Слюна, слюнные железы, и гемолимфы Коллекция от иксодовых клещей Scapularis
Summary
Коллекция инфицированных гемолимфы клещей, слюнные железы, и слюна важно изучить, как клещевой патогенов вызывает болезни. В этом протоколе мы показали, как собирать гемолимфы и слюнных желез от кормления<em> Ixodes scapularis</em> Нимф. Мы также продемонстрировать коллекцию слюны у женщин<em> I. scapularis</em> Взрослые.
Abstract
Клещи встречаются по всему миру и страдают люди с большим количеством клещевой болезни. Клещи являются переносчиками возбудителей, которые вызывают болезнь Лайма и клещевого возвратного тифа (Borrelia SPP.), Пятнистая лихорадка Скалистых гор (Rickettsia rickettsii), эрлихиоза (Ehrlichia chaffeensis и Е. рав), анаплазмоза (Anaplasma phagocytophilum), энцефалит (клещевой вируса клещевого энцефалита), бабезиоз (Babesia sрр.), штат Колорадо, тик лихорадка (Coltivirus) и туляремии (Francisella tularensis) 1-8. Чтобы быть правильно переданы в принимающих эти инфекционные агенты дифференциально регулируют экспрессию генов взаимодействуют с белками тик, и мигрируют через клещей 3,9-13. Например, агент болезни Лайма, Borrelia burgdorferi, адаптируется через дифференциальное выражение гена на праздник и голод этапах энзоотический цикл клеща 14,15. Кроме того, как тик Ixodes потребляетbloodmeal Borrelia копировать и переносить из кишки в hemocoel, где они путешествуют в слюнных железах и передаются на хост с изгнанным слюны 9,16-19.
Как галочку кормит хозяин обычно реагирует с сильными кровоостанавливающее и врожденного иммунного ответа 11,13,20-22. Несмотря на это множество ответов, I. scapularis может питаться в течение нескольких дней, потому что тик слюна содержит белки, иммуномодулирующее, литические средства, антикоагулянты, и fibrinolysins помочь клеща кормления 3,11,20,21,23. Иммуномодулирующее деятельности обладает слюна тик или слюнных желез экстракт (ПОС) содействие передаче, распространению и распространение многочисленных клещевых патогенов 3,20,24-27. Чтобы еще больше понимаю, как клещевой инфекционные агенты вызывают заболевания важно анализировать активно кормятся и собирают клещей тик слюны. Это видео демонстрирует протокол вскрытия методыКоллекция гемолимфы и удаления слюнных желез от активного кормления I. scapularis нимф после 48 и 72 часов после размещения мыши. Мы также продемонстрировать коллекцию слюны из взрослой самки I. scapularis тик.
Protocol
Discussion
Сбор клещей гемолимфы, слюнные железы, и слюна играет важную роль в изучении клещевого возбудителя передачи, распространения, распространение оружия, и сохранение как клещ и принимающей 6,11-13,20,23,29. Есть несколько способов, чтобы вскрыть галочку 30,31. Тем не менее, при сборе слю…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить отдел трансмиссивных болезней животных отделения ресурсов, в частности Андреа Петерсон, Лиза Massoudi, Verna О'Брайен и Джон Лидделл их ухода и содержания мышей и кроликов. Мы также хотели бы поблагодарить Эми Ульман, Тереза Расселл, и Барбара Дж. Джонсон за их вклад к этой рукописи. Наконец, мы хотели бы отметить Алиса Эккерта в канцелярии заместителя директора по вопросам коммуникации в CDC для создания графических иллюстраций и Джуди Lavelle для направления всей законность связана с Съемки этой рукописи.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number |
| Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
| Ethanol | Acros | 61509-5000 |
| PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
| Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
| Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
| Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
| Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
| Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
| #11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
| Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
| Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |
References
- Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. What’s eating you? Hyalomma ticks. Cutis. 87, 165-167 (2011).
- Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. Tick-borne illnesses: a CME update. Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).
- Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. Vector-host interactions in disease transmission. J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).
- Estrada-Pena, A., Jongejan, F. Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission. Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).
- Nuttall, P. A. Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus. Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).
- Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. Enhancement of virus transmission by tick salivary glands. J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).
- Labuda, M., Nuttall, P. A. Tick-borne viruses. Parasitol. 129, 221-245 (2004).
- Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. Update on tick-borne bacterial diseases in Europe. Parasite. 16, 259-273 (2009).
- Zhang, L., et al. Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph. PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).
- Piesman, J., Schneider, B. S. Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks. Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).
- Brossard, M., Wikel, S. K. Tick immunobiology. Parasitol. , S161-S176 (2004).
- Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo. Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).
- Nuttall, P. A., Labuda, M. Tick-host interactions: saliva-activated transmission. Parasitol. 129, 177-189 (2004).
- Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host. FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).
- Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis. Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).
- Dunham-Ems, S. M., et al. Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks. Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).
- Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae). J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).
- Piesman, J. Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi. Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).
- De Silva, A. M., Fikrig, E. Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding. Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).
- Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks. Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).
- Brossard, M., Wikel, S. K. Immunology of interactions between ticks and hosts. Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).
- Wikel, S. K. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission. Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).
- Binnington, K. C., Kemp, D. H. Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission. Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).
- Guo, X., et al. Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins. Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).
- Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils. Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).
- Lima, C. M., et al. Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut. J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).
- Severinova, J., et al. Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice. Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).
- Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts. Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).
- Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut. J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).
- Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a “How-to” pictorial dissection guide. Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).
- Ledin, K. E., et al. Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum. Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).
- Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?. Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).
- Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods. J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).
- Burgdorfer, W. Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks. Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).
