'सिंगल वायरस जीनोमिक्स' का उपयोग कर एकल virions के अलगाव और जीनोम विश्लेषण
Summary
सिंगल वायरस जीनोमिक्स (एसवीजी) एकल virons के जीनोम को अलग करने और बढ़ाना करने के लिए एक विधि है. एक मिश्रित संयोजन के वायरल निलंबन जिससे विरिअन पर कब्जा करने और बहाव के प्रसंस्करण के दौरान जीनोम कर्तन को कम करने, agarose युक्त असतत कुओं के साथ एक खुर्दबीन स्लाइड पर प्रवाह का उपयोग कर हल कर रहे हैं. पूरे जीनोम प्रवर्धन अनुक्रमण के लिए उपयुक्त है कि जीनोमिक सामग्री में जिसके परिणामस्वरूप कई विस्थापन प्रवर्धन (एमडीए) का उपयोग कर हासिल की है.
Abstract
एक माइक्रोबियल कोशिकाओं के पूरे जीनोम प्रवर्धन और अनुक्रमण खेती 1-3 की आवश्यकता के बिना जीनोमिक लक्षण वर्णन सक्षम बनाता है. सर्वव्यापक और हमारे ग्रह 4 पर सबसे अनेक संस्थाओं और सभी प्रकार के वातावरण 5 में महत्वपूर्ण हैं जो वायरस, समान दृष्टिकोण के माध्यम से पता चला जाना अभी बाकी है. यहाँ हम 'सिंगल वायरस जीनोमिक्स' (एसवीजी) नामक एक virions की जीनोम अलग और निस्र्पक के लिए एक दृष्टिकोण का वर्णन है. एसवीजी बाद अनुक्रमण प्रतिक्रियाओं में इस्तेमाल किया जा सकता है कि उच्च आणविक वजन जीनोमिक डीएनए (gDNA) प्राप्त करने के लिए व्यक्तिगत वायरस और पूरे जीनोम प्रवर्धन अलग करने के लिए प्रवाह cytometry का इस्तेमाल करता है.
Protocol
Discussion
एसवीजी दृष्टिकोण जब आवेदन महत्वपूर्ण कारकों की एक संख्या को ध्यान में रखा जाना चाहिए. जीनोटाइपिंग, सबूत की अवधारणा प्रयोग 13 के दौरान प्रदर्शन किया गया था, के रूप में संरक्षित प्राइमरों सभी वायरल स?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि तैयार करने की प्रक्रिया के दौरान अपनी अंतर्दृष्टि और सलाह के लिए केन Nealson धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Material Name | Company | Catalogue Number | Comments |
| 1X TE buffer | Invitrogen | 12090-015 | |
| Buffer-saturated Phenol | Invitrogen | 15513-039 | |
| GenomiPhi HY kit | GE Healthcare | 25-6600-22 | |
| Glycoblue | Invitrogen | AM9516 | 15 mg/ml |
| LMP agarose | Invitrogen | 16520100 | |
| PTFE microscope slide | Electron Microscopy Sciences | 63430-04 | 24 well, 4 mm Diameter |
| SybrGreen | Invitrogen | S7585 | 10,000X |
| β-agarase | New England Biolabs | M0392S |
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