测试：α-细胞快速免费的CD4计数，使用全唾液

Summary

被描述的CD4枚举法，α测试，它采用全唾液，以提供快速，准确的CD4细胞计数。 α-测试成本便士和消除技术培训，如昂贵的试剂，单克隆抗体，仪器仪表，制冷，样品运输，以及收集和处理血液的需要。

Abstract

有负担得起的CD4枚举监测HIV疾病的迫切需要。的CD4枚举是在资源有限的地区，由于时间和温度的限制，技术复杂，试剂成本，尤其是单克隆抗体的血细胞，目前唯一可以接受的方法来衡量的CD4遥不可及。节约成本和节省时间的一种常用实验室的策略，而不是衡量某些血液值，是计算。例如，低密度脂蛋白水平计算，总胆固醇，高密度脂蛋白（HDL），甘油三酯¹使用的测量水平。因此，确定无细胞的相关因素，直接调节的CD4 ⁺ T细胞可以提供一个准确的方法，计算CD4计数由于生理意义的相关因素。

进入血液，并注定要成为循环CD4 ^{+ T}细胞的干细胞数量确定的趋化因子CXCL12的1ND及其受体CXCR4，由于他们对运动^2的影响。此外，进入血液干细胞的运动过程调节细胞表面人类白细胞弹性蛋白酶（HLE _CS）和HLE _CS-反应活性_α1蛋白酶抑制剂_（α1有价证券_，α1抗胰蛋白酶^{，SerpinA1）3。}在HIV-1病毒病_，α1 PI灭活由于疾病的进程^4。 _α1 PI在HIV-1疾病的早期症状类别，积极发现低于100％未经治疗的HIV-1患者（中位数= 12μM，以及达到正常水平，在对症⁴大类^，5正常。格局已被归因于免疫灭活，不足够的合成，蛋白失活，或充氧。我们观察到，在HIV-1> 220的CD4细胞/μl的科目，CD4细胞计数了积极的_α1 PI水平呈正相关（R ² = 0.93，P＆LT; 0.0001，N = 26）和无效的_α1的PI（R ² = 0.91，P <0.0001，N = ^26）5。 _α1的PI HIV-1感染和未感染者的管理，导致在_α1 PI参与调节的CD4 ⁺ T细胞，血液中的³中的CD4计数显着增加。

与刺激，全唾液中含有足够的浆液性渗出物（血浆含有蛋白质的物质通过血管壁进入唾液传递）允许测量活性_α1 PI与此测量的相关性的证据表明，它是一种精确的方法计算CD4细胞计数。简言之，如嚼口香糖或柠檬酸sialogogues刺激到整个口腔唾液，血清渗出。刺激血清渗出后，血清_α1 PI唾液中的活性是衡量其能力，抑制弹性蛋白酶的活性。猪胰弹性蛋白酶（PPE）的弹性蛋白酶是一个现成的廉价来源。个人防护装备的_α1有价证券结合形成一个到一个复杂的，防止切割其特定的底物，其中之一是的比色法肽，琥珀- L-丙氨酸-L-丙氨酸- L-丙氨酸-P-硝基苯胺（SA的个人防护装备³不适用）。孵化器为在室温下10分钟的个人防护装备的饱和浓度的唾液，允许个人防护装备的所有活动_α1 PI唾液中的约束力。可以衡量的PPE抑制活性_α1有价证券加入的PPE基板SA的³不适用。（图1）。虽然CD4细胞计数测量血容量（CD4细胞_{/μL），α1} PI唾液中的浓度与唾液中的血清浓度，唾液量，因为体积可以改变白天和人大大⁶人。然而，几乎所有的唾液中的蛋白质是由于血清含量，唾液中的蛋白质含量是测量surable ^7。因此，活性_α1 PI唾液中的唾液蛋白质含量的比率计算，被称为_α1 PI指数。结果提出此表明_，α1 PI指数提供了一个准确和精确的计算CD4细胞计数的生理方法。

Protocol

1。准备新鲜的工作方案 TBS电视台：0.05 mol的Tris缓冲液，pH值7.8公司（TBS）。准备60毫升TBS /微孔板。 个人防护装备：猪胰弹性蛋白酶，1型（PPE）的暂停。摇匀，稀释约0.01 U / ml的个人防护装备在TBS。准备6毫升工作液/微孔板）。 SA的3 NA：琥珀- L-丙氨酸-L-丙氨酸- L-丙氨酸-P-硝基苯胺（SA的3，NA）。准备在二甲基亚砜（DMSO…

Discussion

未稀释的血清中含有的中位数为36μM的_α1 PI和3.6微米_α2巨球蛋白_（α2米 ），10倍的差异^8。这两种蛋白质的竞争结合个人防护装备。利用这两个特点，浓度和个人防护装备的亲和力，已发展出一种方法，是专门测量在正常血清中存在竞争_α2米 ⁸的_α1有价证券。这种方法可以在0.3％血清检测低至50纳米_μ1有价证券。在血清稀释度为_2.5…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
Sialogogue, 0.05M citric acid	Eda’s Sugarfree Candies, 4900 Rear N.20th Street, Philadelphia, PA 19144	Sugar-Free Lemon dropS
Porcine pancreatic elastase, type 1 (EC 3.4.21.36)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103	E1250
Succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide	Sigma-Aldrich	S4760
Coomassie Brilliant Blue R-250	Sigma-Aldrich	B7920
Tissue culture-treated, 96 well microplates	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886	35-3072
Microplate Reader with filters for 405 nm and 595 nm	MTX Lab Systems, 8456 Tyco Road, Building D, Vienna, Virginia 22182	Dynex P97277