Caracterización de los mecanismos moleculares de la<em> En vivo</em> Catarata inducida por RUV
Summary
La catarata es la principal causa de ceguera en el mundo. Radiación solar ultravioleta (UVR) es el principal factor de riesgo para el desarrollo de cataratas. Un modelo animal de lejos catarata inducida por UVR-B fue desarrollado. En este artículo se describen los métodos para la investigación de la formación de cataratas: La exposición a los rayos UV, cuantitativos RT-PCR e inmunohistoquímica.
Abstract
La catarata es la principal causa de ceguera en el mundo 1. La Organización Mundial de la Salud define catarata como una opacidad del cristalino del ojo que impide la transmisión de la luz. La catarata es una enfermedad multifactorial asociada con la diabetes, el tabaquismo, la radiación ultravioleta (UVR), alcohol, radiación ionizante, los esteroides y la hipertensión. Hay una fuerte evidencia experimental 2-4 y epidemiológica 5,6 UVR que provoca catarata. Hemos desarrollado un modelo animal para UVR B catarata inducida en ambos anestesiados 7 y los animales no anestesiados 8.
La única cura para las cataratas es la cirugía, pero este tratamiento no es accesible a todos. Se ha estimado que un retraso de la aparición de cataratas durante 10 años podría reducir la necesidad de cirugía de cataratas en un 50% 9. Para retrasar la incidencia de cataratas, que es necesario para comprender los mecanismos de la formación de cataratas y encontrar estrategia eficaz de prevencióngias. Entre los mecanismos para el desarrollo de cataratas, la apoptosis desempeña un papel crucial en la iniciación de cataratas en los seres humanos y los animales 10. Nuestro enfoque ha sido recientemente apoptosis en la lente como el mecanismo para el desarrollo de cataratas 8,11,12. Se prevé que una mejor comprensión del efecto de la radiación UV en la vía de la apoptosis se proporcionan posibilidades para el descubrimiento de nuevos productos farmacéuticos para prevenir cataratas.
En este artículo se describe cómo catarata puede ser inducida experimentalmente por la exposición en vivo a los rayos UV-B. Además RT-PCR e inmunohistoquímica se presentan como herramientas para estudiar los mecanismos moleculares de la RUV-B inducida por la catarata.
Protocol
Representative Results
Discussion
En este trabajo se describen los métodos que permiten estudiar los eventos moleculares que ocurren durante la RUV-B inducida por la catarata.
Teniendo en cuenta, que la mayoría de la información disponible para UVR in vivo inducida por catarata se derivó de los experimentos con ratas albinas Sprague-Dawley 7, 16, 17, 18, 19, se decidió utilizar la albinas Sprague-Dawley en el estudio actual. Edad de las ratas fue de seis semanas de edad. El género fue es…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el Instituto Karolinska KID-financiación, la Autoridad Sueca de Protección Radiológica, Instituto Karolinska Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, Eye St. Erik el Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V: s och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
| Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
| Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
| Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
| Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
| 3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
| NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
| p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
| Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
| Agarose | Sigma | A5093 | |
| Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
| Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
| 1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
| iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
| 96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
| Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
| Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
| Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | ||
| Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
| TBE buffer 10x | Promega | V4251 |
References
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