בסיסי<em> Caenorhabditis elegans</em> שיטות: סנכרון תצפית
Summary
קלות של תחזוקה להפצת נמטודות<em> ג elegans</em> להפוך אותו אורגניזם מודל נחמד לעבוד איתו. אפשרות של תולעים סינכרון מאפשר עבודה עם כמות משמעותית של הנושאים בשלב התפתחותי דומה, מה מאפשר לימוד של תהליך מסוים אצל בעלי חיים רבים.
Abstract
מחקר בביולוגיה מולקולרית התפתחותית של Caenorhabditis elegans נמטודות החלה בתחילת שנות השבעים של סידני ברנר וזה ומאז נעשה שימוש נרחב כאורגניזם מודל 1. ג elegans הוא בעל תכונות מפתח כגון שקיפות ופשטות, ועל מחזור החיים הקצר שהפכו אותה מערכת ניסיונית מתאים למחקרים ביולוגיים בסיסיים במשך שנים רבות 2. תגליות נמטודות הזה יש השלכות רחבות בגלל תהליכים תאיים ומולקולריים רבים חיים פיתוח שליטה הם 3 משומר האבולוציוני.
סי אלגנס מחזור החיים עובר בשלב העוברי וארבעה שלבים הזחל לפני בעלי החיים מגיעים לבגרות. הפיתוח יכול לקחת 2 עד 4 ימים, תלוי בטמפרטורה. בכל אחד מהשלבים התכונות האופייניות כמה ניתן לצפות. הידע של השושלת תא המוחלטת 4,5 יחד עם annotat עמוקיון של הגנום שלו להפוך את נמטודות למודל רב בתחומים מגוונים כמו לנוירוביולוגיה 6, הזדקנות 7,8, ביולוגיה לתאי גזע 9 וביולוגיה נבט קו 10.
תכונה נוספת שהופכת ג elegans מודל אטרקטיבי לעבוד היא האפשרות לקבל אוכלוסיות של תולעים מסונכרנים בשלב מסוים באמצעות פרוטוקול פשוט יחסית. קלות תחזוקה להפצת נמטודות זה להוסיף אפשרות של סנכרון לספק כלי רב עוצמה כדי להשיג כמויות גדולות של תולעים, אשר ניתן להשתמש בהם עבור מגוון רחב של ניסויים קטנים או תפוקה גבוהה כגון מסכי RNAi, microarrays, רצף מסיבי, immunoblot או הכלאה באתרו, בין היתר.
בגלל השקיפות שלה, ג מבנים elegans ניתן להבחין תחת מיקרוסקופ באמצעות התערבות דיפרנציאלי מיקרוסקופ ניגודיות, הידוע גם בשם Nomarski MICROSלהעתיק. השימוש קלסר DNA ניאון, DAPI (4 ',6-diamidino-2-phenylindole), למשל, יכול להוביל לזיהוי לוקליזציה ספציפי של תאים בודדים, כמו גם מבנים subcellular / פגמים הקשורים אליהם.
Protocol
Discussion
נמטודות סנכרון
פתרונות הלבנת מספר תוארו. ניסינו חמישה מתכונים שונים (טבלה I) ו, בידינו, הם לא הראו הבדלים משמעותיים הסנכרון של אוכלוסיות תולעת (איור 1). עם זאת, בניסויים שלנו לא מראים פרמטרים כגון טמפרטורה (איור …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים רוצים להכיר MICINN (התוכנית ועד ההורים תומכים מונסראט פורטה דה לה ריבה), AGAUR (PhD מלגה כדי לורה Fontrodona), Instituto de Salud קרלוס השלישי (תוכנית מיגל Servet תמיכה ג'וליאן Cerón), ומארי קירי IRG, ISCIII ו IDIBELL למימון במעבדה.
References
- Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
- Wood, W. B. . The nematode Caenorhabditis elegans. , (1988).
- Potts, M. B., Cameron, S. Cell lineage and cell death: Caenorhabditis elegans and cancer research. Nat. Rev. Cancer. 11, 50-58 (2011).
- Kimble, J., Hirsh, D. The postembryonic cell lineages of the hermaphrodite and male gonads in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 70, 396-417 (1979).
- Sulston, J. E., Horvitz, H. R. Post-embryonic cell lineages of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 56, 110-156 (1977).
- Hobert, O. Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans. WormBook. , 1-24 (2010).
- Depuydt, G., Vanfleteren, J. R., Braeckman, B. P. Protein metabolism and lifespan in Caenorhabditis elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 81-107 (2010).
- Jia, K., Levine, B. Autophagy and longevity: lessons from C. elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 47-60 (2010).
- Joshi, P. M., Riddle, M. R., Djabrayan, N. J., Rothman, J. H. Caenorhabditis elegans as a model for stem cell biology. Dev. Dyn. 239, 1539-1554 (2010).
- Waters, K. A., Reinke, V. Extrinsic and intrinsic control of germ cell proliferation in Caenorhabditis elegans. Mol. Reprod. Dev. 78, 151-160 (2011).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. , (2006).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev. Biol. 8, 49 (2008).
- Olahova, M. A redox-sensitive peroxiredoxin that is important for longevity has tissue- and stress-specific roles in stress resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 19839-19344 (2008).
- Voisine, C. Identification of potential therapeutic drugs for huntington’s disease using Caenorhabditis elegans. PLoS One. 2, e504 (2007).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
- Aceves, J., Erlij, D., Martinez-Maranon, R. The mechanism of the paralysing action of tetramisole on Ascaris somatic muscle. Br. J. Pharmacol. 38, 602-607 (1970).
- Shaham, S. Methods in cell biology. Wormbook. , (2006).
- Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbardm, E. J. Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition. Genetics. 163 (1), 115-132 (2003).
- Morley, J. F., Brignull, H. R., Weyers, J. J., Morimoto, R. I. The threshold for polyglutamine-expansion protein aggregation and cellular toxicity is dynamic and influenced by aging in Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 10417-10422 (2002).
