Basisk<em> Caenorhabditis elegans</em> Metoder: Synkronisering och miljöövervakning

Summary

Enkelheten att bevara och sprida nematoden<em> C. elegans</em> Gör det till en fin modell organism att arbeta med. Möjligheten att synkronisera maskar kan arbetet med en signifikant mängd av ämnen i samma utvecklingsstadiet, vilken underlättar studiet av en viss process i många djur.

Abstract

Forskning om den molekylära och utvecklingsbiologi av elegans rundmasken Caenorhabditis inleddes i början av sjuttiotalet av Sydney Brenner och har sedan dess använts i stor utsträckning som en modell organism ^1. C. elegans har viktiga egenskaper såsom enkelhet, öppenhet och korta livscykel som har gjort den till en lämplig experimentellt system för grundläggande biologiska studier under många år ^2. Upptäckter i denna nematod har breda konsekvenser eftersom många cellulära och molekylära processer som styr djuret utveckling är evolutionärt konserverad ^3.

C. elegans livscykel går igenom sin linda och fyra larvstadier innan djuren når vuxen ålder. Utvecklingen kan ta 2 till 4 dagar beroende på temperaturen. I vart och ett av stegen flera karakteristiska egenskaper kan observeras. Kunskapen om dess fullständiga cellsläktträd ^4,5 tillsammans med den djupa annotation av sin arvsmassa göra denna nematod i en stor modell i så skilda områden som neurobiologi ^6, åldrande ^7,8, stamcellsbiologi ⁹ och könscellerna biologi ^10.

En ytterligare funktion som gör C. elegans en attraktiv modell för att arbeta med är möjligheten att få populationer av maskar synkroniserade i ett visst skede genom en relativt enkel protokoll. Den lätthet att bevara och sprida denna nematod till möjligheten av synkronisering ger ett kraftfullt verktyg för att få stora mängder maskar, som kan användas för en mängd olika små eller hög kapacitet experiment som RNAi skärmar, microarrays, massiv sekvensering, immunoblotting eller hybridisering in situ, bland andra.

På grund av sin öppenhet, C. elegans strukturer kan särskiljas under mikroskop med användning av Differential mikroskopi interferenskontrast, även känd som Nomarski microskopieras. Användningen av en fluorescerande DNA-bindemedel, DAPI (4 ',6-diamidino-2-fenylindol), till exempel, kan leda till specifik identifiering och lokalisering av enskilda celler, såväl som subcellulära strukturer och defekter associerade med dem.

Protocol

1. Protokoll A: Odling av Worms för blekning 11 Stora populationer av C. elegans kan erhållas genom odling av dem antingen i flytande medier eller på fasta medier i plattorna. De är vanligtvis odlas på fast NGM (nematodtillväxt medier) och matas med E. coli-bakterier, som tillsätts till plattorna antingen levande eller döda (dödas av UV-12, genom värme 13 eller genom kall 14). Det vanligaste förfarandet använder levande …

Discussion

Nematod Synkronisering

Flera bleknings-lösningar har beskrivits. Vi försökte fem olika recept (Tabell I) och i våra händer, har de inte visar betydande skillnader i synkroniseringen av masken populationer (figur 1). Emellertid gjorde våra experiment visar att parametrar såsom temperatur (fig 2), varvid förhållandet blekningslösningen: volym av maskar (fig. 3) och volymen av M9 med vilka embryona inkuberades under klä…