Esaurimento e Ricostituzione dei macrofagi nei topi
Summary
I macrofagi hanno un ruolo centrale nella omeostasi e patologia in molti tessuti. Il protocollo presentato qui descrive i metodi per esaurire i macrofagi<em> In vivo</em>, Derivanti da macrofagi polarizzati aspirati di midollo osseo, e trasferendo adoptively macrofagi in topi. Queste tecniche consentono la determinazione del ruolo che i macrofagi polarizzati svolgono nella salute e nella malattia.
Abstract
I macrofagi hanno un ruolo critico nella risposta immunitaria innata alla sfida infettiva o lesioni, iniziando la risposta immunitaria innata e dirigere la risposta immunitaria acquisita. Macrofagi disfunzione può comportare l'impossibilità di montare una risposta immunitaria appropriata e, come tale, è stata implicata in molti processi patologici, quali le malattie infiammatorie intestinali. I macrofagi visualizzare fenotipi polarizzati che sono approssimativamente suddivise in due categorie. Classicamente macrofagi attivati, attivato dalla stimolazione con LPS o IFNy, svolgono un ruolo essenziale nella risposta alla sfida batterica che macrofagi attivati alternativamente, attivato da IL-4 o IL-13, partecipare detriti scavenging e rimodellamento tissutale e sono stati implicati nella risoluzione fase di infiammazione. Durante una risposta infiammatoria in vivo, i macrofagi si trovano in mezzo a una miscela complessa di infiltrare cellule del sistema immunitario e possono partecipare mediante l'esasperazione o resolving infiammazione. Per definire il ruolo di macrofagi in situ in un modello animale intero, è necessario esaminare l'effetto di esaurire macrofagi dall'ambiente complesso. Per porre domande circa il ruolo del fenotipo dei macrofagi in situ, fenotipicamente definite macrofagi polarizzati, può essere derivata ex vivo, da aspirati di midollo osseo e aggiunto nuovamente ai topi, con o senza previa deplezione dei macrofagi. Nel protocollo qui presentata clodronato liposomi contenenti, rispetto ai controlli iniettati PBS, sono stati utilizzati per esaurire macrofagi colon durante destrano solfato sodico (DSS)-colite indotta nei topi. Inoltre, macrofagi polarizzati sono stati ottenuti ex vivo e trasferito topi mediante iniezione endovenosa. Un avvertimento di questo approccio è che clodronato contenenti liposomi esaurire tutte le fagociti professionali, comprese sia le cellule dendritiche ei macrofagi in modo da garantire l'effetto osservato da deplezione dei macrofagi è specifico, la ricostituzione of fenotipo mediante trasferimento adottivo di macrofagi è necessario. Deplezione macrofagi nei topi possono anche essere ottenuto topi reincrocio su un CD11b-DTR fondo, che è un ottimo approccio complementare. Il vantaggio di clodronato contenente mediata da liposomi esaurimento è che non richiede il tempo ei costi legati in topi reincrocio e può essere utilizzato in topi indipendentemente dal fondo dei topi C57BL / 6, BALB / c, o sfondo mista ).
Protocol
Discussion
I macrofagi sono cellule fagocitiche che svolgono un ruolo importante nel sistema immunitario. Essi sono responsabili per l'avvio della risposta immunitaria innata e dirigere la risposta immunitaria acquisita. Tipicamente, macrofagi attivati classicamente vengono attivati da IFNy o LPS e sono responsabili per eliminare patogeni e montare una risposta infiammatoria 1. Viceversa, in alternativa macrofagi attivati sono attivati da IL-4 o IL-13 e gioca un ruolo in detriti di lavaggio e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato da un 'Grant in Aid di Ricerca' dal morbo di Crohn e Colite Foundation del Canada LMS, che è supportato da una Canadian Association of Gastroenterology / Canadian Association of Health s Research / Crohn 'e Colite Fondazione Premio Canada Investigator Nuovo.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Clodronate-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| PBS-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| Sterile PBS pH7.4 | Invitrogen | 14190 |
| IMDM | Invitrogen | 12440 |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Invitrogen | 12483 |
| acetic acid | BDH Aristar | BDH3092-500MLP |
| Monothioglycerol (MTG) | Sigma | 96-275 |
| Recombinant murine MCSF | Stemcell Technologies | 02951 |
| Recombinant murine GM-CSF | Stemcell Technologies | 02935 |
| Recombinant murine IL-3 | Stemcell Technologies | 02903 |
| Recombinant murine IFNγ | Stemcell Technologies | 02746 |
| Recombinant murine IL-4 | Stemcell Technologies | 02714 |
| Cell Dissociation Buffer | Invitrogen | 13150-016 |
| Rat anti-F4/80 Antibody | AbD Serotec | MCA497GA |
| Mouse anti-ArgI Antibody | BD Transduction Laboratories | 610708 |
Table 1. Specific reagents used in this protocol.
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