Изображениями глиомы Посвящение<em> В Vivo</em> Через полированной и железобетонных тонких черепа Черепно Window
Summary
Благодаря сочетанию полированных и железобетонных тонкий череп (порты) черепных окна и глиобластомы (GBM) инъекции клеток, мы можем наблюдать глиомы зарождения и роста вводят в клетки глиобластомы в мозгу живых мышей в продольном направлении.
Abstract
Глиомы является одной из самых смертельных форм рака у человека. Наиболее эффективным глиомы терапии для дата-операции с последующей лучевой лечение дает пациентам лишь скромные выгоды, так как большинство пациентов не выживают более пяти лет после диагноза в связи с рецидивом глиомы 1,2. Открытие раковые стволовые клетки в человеческом опухолей головного мозга перспективен для имеющих огромное влияние на развитие новых терапевтических стратегий для глиомы 3. Раковые стволовые клетки определяется их способностью как к самообновлению и дифференцировать, и, как считается, только клетки опухоли, которые имеют возможность инициировать новые опухоли 4. Глиомы рецидива следующие лучевая терапия, как полагают, связаны с сопротивлением стволовые клетки глиомы (GSCs) к терапии 5-10. В естественных условиях, GSCs показано на проживание в периваскулярных нишу, которая имеет важное значение для поддержания их стволовых клеток, как характеристика 11-14 . Центральное место в организацияхзации GSC ниши сосудистых эндотелиальных клеток 12. Существующие данные свидетельствуют о том, что GSCs и их взаимодействие с клетками эндотелия сосудов имеют важное значение для развития опухоли, а также определить GSCs и их взаимодействие с эндотелиальные клетки, как важна терапевтических мишеней для глиомы. Наличие GSCs определяется экспериментально по их способности инициировать новые опухоли на ортотопической трансплантации 15. Это обычно достигается путем введения определенного количества GBM клеток, выделенных из человеческих опухолей в мозге сильно иммуно-дефицитных мышей или мышей GBM клеток в мозге мышей конгенных хозяина. Анализы для роста опухоли, затем выполняется после достаточно времени, чтобы GSCs среди вводили клетки глиобластомы, чтобы дать начало новым опухолям, обычно несколько недель или месяцев. Таким образом, существующие тесты не позволяют рассмотрении важных патологического процесса опухолевого посвящение от одного GSCs в естественных условиях. Следовательно, существенно яnsights в конкретных ролей GSCs и их взаимодействие с клетками эндотелия сосудов на ранних стадиях опухолевого начала отсутствуют. Такие идеи имеют важное значение для разработки новых терапевтических стратегий для глиомы, и будет иметь большое значение для предотвращения глиомы рецидивов у пациентов. Здесь мы адаптировали портов черепно процедуру окна 16 и в естественных условиях двухфотонной микроскопии, чтобы визуализация опухоли посвящение от введенных клеток GBM в мозгу живых мышей. Наша техника проложит путь для будущих усилий по выяснению ключевые сигнальные механизмы между GSCs и сосудистых эндотелиальных клеток глиомы во время инициации.
Protocol
Discussion
Ключ к успешному портов черепно окно рубки ухода и полировки. Хотя первоначальный прореживания могут быть выполнены быстро, уход должны быть приняты для обеспечения однородного прореживания черепа на большой площади. Как правило, мы нанесите тонкий слой соленых к черепу, а затем тонки…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа проводится при поддержке Jackson Laboratory Cancer Center Pilot Грант и Мэн Cancer Foundation.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| DMEM/F12(1:1) with Sodium Pyruvate | Thermo Sci Hyclone | SH3026101 | |
| B-27 Serum Free Supplement (50x) | Invitrogen | 17504-044 | |
| GlutaMax-1 Supplement | Invitrogen | 35050061 | |
| Penicillin-Streptomycin Solution | Thermo Sci Hyclone | SV30010 | |
| Accutase-Enzyme Cell Detachment Medium | eBiosciences | 00-4555-56 | |
| T25 flasks-vent cap green | SARSTEDT | 83.1810.502 | |
| 70% alcohol | JAX LAHS | ||
| 10% povidone-iodine topical solution | JAX LAHS | ||
| Ketamine HCl | Butler Animal Health Supply | NDC# 11695-0550-1 | |
| Xylazine | Akorn, Inc. | NADA# 139-236 | |
| Carprofen | JAX LAHS | ||
| Ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | 17033-211-38 | |
| 0.5% Lidocaine HCl | REGENT, Inc. | NDC 0517-0625-25 | |
| Cyanoacrylate glue | Henkel Corp. | 46551 | |
| Sterile Swabs | Fisher Scientific | 23-400-114 | |
| Diamond paste | Widget Supply | BBE60 | |
| Tin oxide | LORTONE, Inc. | 591-038 | |
| Liner Bond 2V | KURARAY Medical Inc. | 1921-KA | |
| Clearfil AP-X | KURARAY Medical Inc. | 1721-KA | |
| Saline | JAX LAHS | ||
| Cover glass | Warner Instruments | 64-0720 | |
| Hex Nut | Small Parts, Inc. | HNX-0090-C | |
| Syringe Pump | Syringepump.com | NE-1000 | |
| Two-Photon imaging system | Custom built (Any commercial system would work) |
References
- Paulino, A. C., Teh, B. S. Treatment of brain tumors. N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Singh, S. K., et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature. 432, 396-401 (2004).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
- Cheng, L., Bao, S., Rich, J. N. Potential therapeutic implications of cancer stem cells in glioblastoma. Biochem. Pharmacol. 80, 654-665 (2010).
- Cheng, L., Ramesh, A. V., Flesken-Nikitin, A., Choi, J., Nikitin, A. Y. Mouse models for cancer stem cell research. Toxicol. Pathol. 38, 62-71 (2010).
- Dirks, P. B. Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large. Mol. Oncol. 4, 420-430 (2010).
- Ebben, J. D., et al. The cancer stem cell paradigm: a new understanding of tumor development and treatment. Expert Opin. Ther. Targets. 14, 621-632 (2010).
- Germano, I., Swiss, V., Casaccia, P. Primary brain tumors, neural stem cell, and brain tumor cancer cells: where is the link. Neuropharmacology. 58, 903-910 (2010).
- Park, D. M., Rich, J. N. Biology of glioma cancer stem cells. Mol. Cells. 28, 7-12 (2009).
- Bao, S., et al. Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor. Cancer Res. 66, 7843-7848 (2006).
- Calabrese, C., et al. A perivascular niche for brain tumor stem cells. Cancer Cell. 11, 69-82 (2007).
- Barami, K. Relationship of neural stem cells with their vascular niche: implications in the malignant progression of gliomas. J. Clin. Neurosci. 15, 1193-1197 (2008).
- Gilbertson, R. J., Rich, J. N. Making a tumour’s bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche. Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).
- Cho, R. W., Clarke, M. F. Recent advances in cancer stem cells. Curr. Opin. Genet. Dev. 18, 48-53 (2008).
- Drew, P. J., et al. Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull. Nat. Methods. 7, 981-984 (2010).
