الخلايا الليفية من المرضى تحمل طفرات في الجينات المسببة للمرض باركنسون يمثل الوصول إليها بسهولة<em> خارج الجسم</em> نموذج لدراسة الظواهر المرتبطة المرض. يعيش خلية التصوير يعطي فرصة لدراسة الصفات المورفولوجية والوظيفية في الخلايا الحية. نحن هنا وصف إعداد الخلايا الليفية الإنسان ورصد الظواهر اللاحقة من الميتوكوندريا.
مرض باركنسون (PD) هو الثاني الأكثر شيوعا اضطراب الحركة ويصيب 1٪ من الناس فوق سن ال 60 1. لأن الشيخوخة هي عامل خطر الأهم من ذلك، سوف زيادة حالات PD خلال العقود القادمة 2. بجوار طي البروتين المرضية وضعف مسارات تدهور البروتين، وأشار في وظيفة الميتوكوندريا التعديلات والتشكل على النحو السمة المميزة مزيد من تنكس عصبي في PD 3-11.
بعد سنوات من البحث في الخلايا السرطانية الفئران والإنسان ونماذج في المختبر لتشريح المسارات الجزيئية بمرض باركنسونز، أصبح استخدام الخلايا الليفية الإنسان من المرضى وضوابط ملائمة كنماذج فيفو السابقين أداة بحث قيمة، إذا أخذت في الاعتبار المحاذير المحتملة. غير خلد، ونماذج خلية اصطناعية بدلا من ذلك، الخلايا الليفية الأولية من المرضى تحمل المرض الطفرات المرتبطة تعكس على ما يبدو الميزات الهامة المرضية ياو هذا المرض الإنسان.
نحن هنا تحدد الإجراء أخذ خزعات الجلد، الخلايا الليفية الإنسان وزراعة باستخدام بروتوكولات مفصلة لتقنيات المجهرية ضرورية لتحديد الظواهر الميتوكوندريا. واستخدمت هذه الميزات للتحقيق المختلفة المرتبطة PD ذات الصلة وظيفة الميتوكوندريا وديناميكية. فيفو السابقين، يمكن تحليل الميتوكوندريا من حيث وظيفتها، مورفولوجيا، colocalization مع الجسيمات الحالة (الميتوكوندريا المختلة وظيفيا والعضيات المهينة) وتدهور عبر مسار الليزوزومية . هذه الظواهر هي ذات أهمية كبيرة للتعرف على العلامات المبكرة للPD قد يسبق الأعراض السريرية للسيارات في ناقلات للأمراض الجينات البشرية. وبالتالي، يمكن الاستفادة من المقايسات المقدمة هنا كأدوات قيمة للتعرف على الميزات المرضية من تنكس عصبي ويساعد على تحديد استراتيجيات علاجية جديدة في PD.
الخلايا الليفية الجلد المريض كنماذج فيفو السابقين تمثل أداة مهمة لوصف المرض المرتبطة عيوب وراثية. وبالإضافة إلى ذلك، والجلد المستمدة من الخلايا الليفية يمكن الحصول عليها بسهولة ويمكن توسيعها عند زراعة. ولذلك، الخلايا الأولية التي تم الحصول عليها من المرضى تحم…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة فريتس تيسن (10.11.2.153 إلى RK)، ومجلس البحوث الألمانية (DFG، وKR2119/3-2 KR2119/8-1 إلى RK)، والوزارة الاتحادية للتعليم والبحث (BMBF ، NGFNplus؛ 01GS08134 إلى RK) ومنحة دراسية من مؤسسة الدكتوراه هرتي الخيرية [لLFB]. نشكر كارولين OBERMAIER وWestermeier جوليا لما قدموه من دعم خلال تبادل لاطلاق النار الفيديو.
Name of reagent | Company | Catalogue no. |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium | Invitrogen | 52400-025 |
RPMI 1640 medium, no Phenol Red | Invitrogen | 11835-063 |
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Invitrogen | 14190-094 |
Fibroblast growth factor 2 (FGF2) | PeproTech | 100-18B |
AccuMax (detachment solution) | PAA | L11-008 |
Lab-TekTMII chambered coverglasses | Nalge Nunc International | 115382 |
Tetramethylrodamine ethyl ester (TMRE) | Invitrogen | T-669 |
Mitotracker Green FM | Invitrogen | M-7514 |
Mitotracker CM-H2XRos | Invitrogen | M-7513 |
Lyostracker Red DND-99 | Invitrogen | L-7528 |
Hoechst 33342 | Invitrogen | H-3570 |
Table 1. Specific reagents and equipment.