提取组织抗原的功能分析
Summary
一个简单的协议，用于制备的人体组织的提取物被用作功能性T细胞分析中的源的抗原进行说明。此方法允许要被测量的组织来源的抗原的T细胞的反应，以<em在体外</em>。
Abstract
许多的适应性免疫反应的抗原的目标，已确认由B细胞和T细胞，还没有被定义1。这是特别真实的，在自身免疫性疾病和癌症的2。我们的目的是研究人类T细胞识别的抗原的自身免疫性疾病，1型糖尿病患者1,3,4,5。来分析人体T-细胞的反应，对其中没有确定T细胞所识别的抗原的组织中，我们开发了一种方法来提取蛋白质抗原从人类组织中的格式是兼容的功能分析6。无法测量，因为在此之前，T细胞的反应，未纯化的组织提取物的提取方法产生的裂解物，所含的清洁剂对人体外周血单个核细胞是有毒的。在这里，我们描述一个协议，用于人类T细胞没有毒性的格式是从人体组织中提取蛋白质。该组织均化的混合物中的丁-1 – 醇，乙腈和笏ER（BAW）。的组织提取物中的蛋白质浓度的测定，和公知的蛋白质的质量分装到管。提取后，将有机溶剂，通过冷冻干燥除去。冻干组织提取物被保存，直到需要。用于检测免疫功能，免疫细胞的悬浮液中，在适当的培养介质中，可以直接添加到冻干提取物。外周血单个核细胞的细胞因子的产生及细胞增殖，在响应于用此方法制备的提取物，很容易测定。因此，我们的方法可以作为一个源的抗原的T细胞应答的分析，可用于人体组织裂解物的迅速地制备。我们认为，这种方法将有助于分析适应性免疫反应的组织移植，癌症和自身免疫。
Protocol
Discussion
此协议是因为我们想生成人体组织是免费的，如清洁剂有毒化学品的提取物。具体来说，我们已经用它来 制备人体组织的提取物，可用于检测在体外人体免疫功能。使用该协议制备的提取物可以同样在任何缓冲器重新配制，并用于许多生化分析，如蛋白质印迹法或液相色谱法。这使得该技术适用于许多下游应用。
使用我们的协议中，组织提取物的反应并不强烈。?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是从澳大利亚国家健康与医学研究委员会（NHMRC＃559007）和青少年糖尿病研究基金会（JDRF 4-2006-1025）和经营性基础设施计划，维多利亚州政府的拨款支持。我们感谢汤姆·曼德尔胰岛移植计划胰岛分离团队成员提供人体组织。收集和使用人体组织与当地的伦理批准（圣文森特医院HREC-A 011/04和圣文森的健康HREC-A 135/08）。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 5 ml 12 x 75 mm sterile polystyrene tubes | BD Falcon | 352054 | |
| Caps for tubes polystyrene tubes (above) | BD Falcon | 352032 | |
| 50ml sterile tubes | Becton Dickinson | 352070 | |
| Acetonitrile | Mallinckradt Chemicals | 2856-10 | |
| Butan-1-ol | Sigma Aldrich | 537993-IL | |
| Homogenizer: PRO200 | Bio-strategy | 01-01200 | 10 x 115 mm saw-tooth generator |
| Lyophilizer | Virtis, Benchtop 4K | ||
| Sterile Needle 18-20 gauge | Becton Dickinson | REF 302032 | |
| CMRL-1066 Medium | Sigma | C0422 | |
| PBS | Sigma | D8537 |
Table 1. Specific reagents and equipment.
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