Summary

マウス生殖管粘膜からのリンパ球の単離

Published: September 03, 2012
doi:

Summary

マウス生殖管からリンパ球を分離するための効率的な方法が記載されている。この方法では、効率的な分離を可能にするために酵素消化し、パーコール勾配分離を利用しています。この手法は、他の種で使用するためにもに適応可能である

Abstract

、消化器泌尿生殖器、及び気道では、このようなウイルスや細菌などの病原体1のエントリのポータルを提供するなど、粘膜表面。粘膜は、腸管内Peyersのパッチや気道における鼻関連のリンパ網内系組織などの病原体に対する免疫を生成するために、ホストの誘導サイトです。このユニークな機能は、生体防御システムの重要なプレーヤーとしての粘膜免疫をもたらします。多くの研究は、消化器、呼吸器の粘膜部位に焦点を当てている。しかし、生殖粘膜部位の少し調査があった。生殖器の粘膜は、細菌やウイルス感染などの性感染症(STD)のための一次感染のサイトです。性感染症は、今日の世界が直面する最も重要な健康課題の一つです。疾病管理予防センターは、米国で19万人が新たに感染毎年があると推定している。 STDsは毎年2米国の医療システムを170億ドルを費用、および即時、生涯健康への影響のコスト個人一層。この課題に立ち向かうためには、生殖粘膜免疫のより深い理解が必要とされ、リンパ球を分離し、これらの研究の重要なコンポーネントです。ここでは、再現性、他の種への適応のために変更することができる免疫学的研究のためのマウス雌の生殖器官からのリンパ球を単離するための方法を提示する。以下に説明する方法は、1つのマウスに基づいています。

Protocol

1。生殖器の除去承認されたガイドラインを使用してマウスを安楽死させる。低正中切開を行い、皮膚を撤回。 卵管から膣口に、全体の生殖管を分離し、削除します。 ハサミで縦管全体を開きます。 完全RPMI-10/EDTAとペトリ皿の中で細かい部分(<約1mm)(下式参照)に微細手術用のハサミを持つ生殖器を切り取り、に設定マグネチックスターラー上で室温で125ml?…

Discussion

このプロトコルでは、マウスの生殖器管からのリンパ球を準備する方法を示されており、容易に習得されています。このプロセスの最も重要な点は、氷の上に細胞を保持することによって、細胞の生存率を維持することです。このメソッドから細胞収率は、スキル、マウスの感染状況(ナイーブまたは感染翌日)、病原体(細菌、ウイルス、真菌)及びマウス生殖器官検討のセクション(卵?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、資金助成R01-AI026328のためのNIH(KAK)およびR01-AI079004(KAK)に感謝。

Materials

Name Company Catalogue number
Collagenase Sigma Life Sciences C2139-1G
Percoll GE Healthcare Bio-Sciences 17-0891-01
RPMI1640 Gibco by Life Technologies 11875

References

  1. M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
  2. Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
  3. Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
  4. Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
  5. Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
  6. Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
  7. Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
  8. Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
  9. Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
  10. Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
  11. Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).
check_url/4391?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Jiang, J., Kelly, K. A. Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa. J. Vis. Exp. (67), e4391, doi:10.3791/4391 (2012).

View Video