蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離
Summary
癌関連線維芽細胞（CAFS）は増殖、血管新生、炎症を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を容易にします。ここでは、表面マーカーとしてPDGFRαを使用して、細胞選別により新鮮なマウスおよびヒト組織由来正常線維芽細胞とCAFSの純粋な集団を単離するための方法を説明します。
Abstract
癌関連線維芽細胞（CAFS）は、特定の乳癌では、多くの癌の腫瘍間質内で最も顕著な細胞型であり、その卓越した存在は、しばしば予後不良の1,2に関連付けられています。 CAFSは、間質の線維芽細胞の活性化亜集団であり、それらの多くは筋線維芽細胞マーカーのα-SMA 3を発現している 。 CAFSは、地元組織の線維芽細胞からだけでなく、骨髄由来細胞から由来する腫瘍の開発に採用され、腫瘍微小環境4の影響下にCAFの表現型を採用しています。 CAFSは、腫瘍細胞増殖、血管新生、および浸潤5-8を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を促進することが示された。我々は、CAFSは早く前腫瘍段階9時から、腫瘍促進炎症を介在することによって腫瘍の成長を高めることが実証された。腫瘍の成長を促進する上で重要な役割をCAFSプレイの増加する証拠にもかかわらず、勉強CAFSは、CAF-特異的なマーカーと腫瘍微小環境10に共存する多くのサブタイプを持つこれらの細胞の広大な異質性の欠如のために継続的な課題となっている。また、in vitroで線維芽細胞を研究し、それらの遺伝子発現プロファイルはしばしば組織培養11,12で変更されているという事実によって妨げられる。この問題に対処するために、新鮮なマウスおよびヒト組織からの線維芽細胞の公平な遺伝子発現プロファイリングを可能にするために、我々は、蛍光活性化細胞ソーティング（FACS）13,14は、前のプロトコルに基づいた方法を開発した。我々のアプローチは新鮮なマウスおよびヒト組織から線維芽細胞を単離するための表面マーカーとしてPDGFRαを利用に依存しています。 PDGFRαは豊富正常線維芽細胞およびCAFS 9,15両方で表される。このメソッドは、正常線維芽細胞およびCAFSの純粋な集団の単離を可能に含むが、α-SMA +活性化筋線維芽細胞に限定されません。隔離された線維芽細胞は、その後することができます特性評価および腫瘍形成時にCAFSで発生し遺伝子発現の進化の比較のために使用される。実際、我々と他の人は16を細胞選別によって単離された線維芽細胞の発現プロファイリングを報告した。このプロトコルは正常皮膚、乳腺、膵臓、肺組織からの線維芽細胞の高度に濃縮された集団を分離し、プロファイリングを行った。また、我々の手法は、機能の実験を行うため、しばしば文化CAFSしようと、大きな障害となっている腫瘍細胞による汚染を避けるために、選別された細胞を培養することができます。
Protocol
Representative Results
Discussion
組織培養で行われた実験は、有益であるとin vivoで検証することができる機能的な原則を提案することができますが、それは文化11,12中の細胞の遺伝子発現に大きな変化が起こることが知られている。線維芽細胞における遺伝子発現プロファイルの作成時手順組織培養を避けるために、私たちは新鮮なマウスやヒト組織から通常の分離、ならびに癌関連線維芽細胞を可能にする?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、FACSソーティングと彼らの助けのために博士Yitzchak Oschry博士と点の他鷺-アシフに感謝します。この研究は、助成合意nの下欧州連合第7次フレームワーク計画（FP7/2007-2013）から°[276890]、イスラエル癌学会（＃20110078）から、イスラエルがん研究基金（ 研究からNEへの補助金によって支えられてキャリア開発賞 ）。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| DMEM | Gibco | 41965 | |
| PBS | Biological Industries | 02-023-1A | |
| Collagenase II | Worthington | LS4176 | |
| Collagenase IV | Worthington | LS4188 | |
| Deoxyribonuclease | Worthington | LS2007 | |
| PharmLyse | BD | 555899 | |
| Cell strainer 70 μm | SPL | 93070 | |
| Purified anti-mouse CD16/CD32 | BD Pharmingen | 553142 | |
| Via probe (7AAD) | e-Bioscience | 00-6993-50 | |
| Anti-mouse CD140a-PE (PDGFRa) | e-Bioscience | 12-1401-81 | |
| Anti-mouse F4/80- FITC | Cederlane | CL8940F | |
| DMEM w/o Phenol Red | Gibco | 31053 | |
| Collagen Type I | BD Biosciences | 354236 |
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