هذه الدراسة توضح إجراءات إنشاء محور عصبي رواية العصبية و(الفلكية) الدبقية منصة شارك في الثقافة. في هذا النظام المشترك والثقافة، والتلاعب التفاعل المباشر بين محور عصبي واحد (واحد الخلية الدبقية) يصبح ممكنا، مما يسمح للتحليل الآلي للعصبون إشارات متبادلة لالدبقية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحليل التصوير من الخلايا العصبية إلى الخلايا الدبقية في التفاعل منهاج الثقافة ميكروفلويديك (MCP) على أساس الخلايا العصبية والخلايا الدبقية اكسون نظام المشاركة في الثقافة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا العصبية المناسبة لتفاعل الخلايا الدبقية أمر بالغ الأهمية للعمل الفسيولوجية للجهاز العصبي المركزي (CNS). وتوسطت متطور هذا الاتصال ثنائي الاتجاه عن طريق محددة مسارات الإشارات العصبية بين الخلايا الدبقية و1،2. تحديد وتوصيف هذه المسارات إشارة ضرورية لفهم كيفية الخلايا العصبية لعلم وظائف الأعضاء الدبقية التفاعل CNS الأشكال. سابقا، تم الخلايا العصبية والخلايا الدبقية الثقافات المختلطة المستخدمة على نطاق واسع لاختبار وتميز بين مسارات الإشارات العصبية والخلايا الدبقية. ما تعلمناه من هذه الاستعدادات وغيرها من الأدوات في الجسم الحي، ومع ذلك، فقد اقترح أن يشير المتبادل بين الخلايا العصبية والخلايا الدبقية وقعت في كثير من الأحيان في حجرات داخل الخلايا العصبية المحددة (أي محور عصبي، التغصنات، أو سوما) 3. هذا يجعل من المهم لوضع نظام ثقافة جديدة تسمح فصل الأجزاء العصبية ويتناول على وجه التحديد التفاعل بين الخلايا الدبقية والعصبيةنال محاور عصبية / التشعبات. وبالإضافة إلى ذلك، فإن النظام التقليدي ثقافة مختلطة غير قادر على التمييز بين العوامل القابلة للذوبان وإشارات الاتصال المباشر بين الخلايا العصبية وغشاء الخلايا الدبقية. وعلاوة على ذلك، فإن كمية كبيرة من الخلايا العصبية والخلايا الدبقية في نظام المشاركة في الثقافة التقليدية تفتقر إلى القرار اللازم لمراقبة التفاعل بين محور عصبي واحد وخلية الدبقية.
في هذه الدراسة، ونحن تصف الرواية ومحور عصبي الدبقية نظام المشاركة في الثقافة مع استخدام منصة ميكروفلويديك الثقافة (MCP). في هذا النظام شارك في الثقافة، والمثقف الخلايا العصبية والخلايا الدبقية في غرفتين منفصلتين التي ترتبط من خلال قنوات متعددة المركزية. في هذا المنبر الثقافة ميكروفلويديك، يمكن لعمليات الخلايا العصبية فقط (محاور عصبية خاصة) أدخل الجانب الدبقية عن طريق القنوات المركزية. في تركيبة مع وضع العلامات القوية بروتين فلوري، وهذا النظام يسمح الفحص المباشر للإشارة مسارات التفاعلات بين محور عصبي / شجيري والدبقية، فإن مثل هذاق محور عصبي بوساطة تنظيم النسخي في، الدبقية الاتجار مستقبلات الخلايا الدبقية بوساطة الخلايا العصبية في محطات، والخلايا الدبقية بوساطة نمو محور عصبي. قطر الدائرة الضيقة ليحظر أيضا بشكل كبير من تدفق المتوسطة الخلايا العصبية التخصيب الى غرفة الدبقية، وتسهيل التحقيق للتفاعل غشاء من البروتين مباشرة بين محاور عصبية / التشعبات والسطوح الدبقية.
البروتوكول
1. جمعية الثقافة ميكروفلويديك الدائرة (MCP)
- MCP (الشكل 1) هي الدوائر المفتوحة مصممة للثقافات مجزا من أنواع مختلفة من الخلايا 4. لديها عادة اثنين من مقصورات التي ترتبط من خلال القنوات المركزية (3 ميكرون في القطر). جمعية MCP مع الزجاج ذات قاع الأطباق ضروري لإعداد الثقافات واللاحقة تحليل التصوير.
- الأولى، ومعطف العقيمة ذات قاع زجاجي مع الأطباق Polyornithine (سيغما الدريخ، 1 ملغ / مل) الذائب في بورات ثنائي الصوديوم (سيغما الدريخ، 10 ملي درجة الحموضة 8.5) وحضنت بين عش....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الوقت الفاصل بين التصوير من محور عصبي تحليل الناجم عن تفعيل الخلايا النجمية في المروج GLT1
الخلايا العصبية ومجزا نجمية نظام المشاركة في الثقافة يسمح فقط العمليات العصبية، محاور عصبية خاصة، للتفاعل مع انتقائي الخلايا النجمية. بعد نجاح إنشاء محور عصبي ونجمية (أو الخلايا الدبقية الأخرى) شاركت في الثقافة MCP تجميعها، يمكن دراسة أنواع مختلفة من محور عصبي الدبقية التفاعلات مثل؛ محور عصبي الناجم عن تفعيل جين astroglial تفع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخلايا العصبية القائمة على MCP والخلايا النجمية نظام المشاركة في الثقافة يسمح تشريح الخلايا العصبية إشارات تفصيلية لمسارات دبق نجمي الخلايا عن طريق السماح فقط محاور عصبية تمرير القنوات المركزية والتفاعل مع الخلايا astroglial. ويمكن هذا النظام شارك في وضع مريح الثقافة مع الخلايا العصبية التقليدية والإجراءات الثقافة نجمية. وصفنا أيضا التطبيق العملي لهذا النظام المشترك من خلال توظيف الثقافة مراسل EGFP مقرها لإثبات محور عصبي التي تعتمد على تفعيل الخلايا النجمية في المروج GLT1.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نود أن نشكر الدكتور جيفري روثشتين لتوفير BAC GLT1 الفئران EGFP والأجسام المضادة GLT1؛ تافتس مركز البحوث العصبية (NIH P30 NS047243؛ PI، روب جاكسون) لتوفير المرافق الأساسية قيمة؛ جديد كلية منحة التوظيف (NIH P30-02 5P30NS069254 ؛ PI، فيل هايدون) في علم الأعصاب تافتس الإدارة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المصل البقري الجنين | Hyclone | SH30070.03 | وبالنسبة للطلاء الخلايا العصبية للعصبون المتوسطة cutlure |
| المصل البقري الجنين | سيغما الدريخ | F4135 | لثقافة المتوسط نجمية |
| الدبقية مشتقة عامل الأعصاب | R & D أنظمة | 212-GD | تطبيق 10-20 نانوغرام / مل إلى جانب الخلايا العصبية من غرفة |
| Dulbecco تعديل النسر المتوسط ارتفاع نسبة الجلوكوز | سيغما الدريخ | 11995 | |
| 70 مم مصفاة الخلية | BD الصقر | 352350 | |
| طبق زجاج معقمة أسفل | شركة ماتيك | ||
| منصات الثقافة ميكروفلويديك | Xona على microfluidics LLC | SND150 | |
| 6 آبار لوحة الثقافة | Cellstar | 657 160 | |
مستنبت الخلايا العصبية
| |||
الخلايا العصبية للخلية ثقافة المتوسط الطلاء
| |||
نجمية مستنبت
| |||
الجدول 1. المواد المستخدمة في محور عصبي ميكروفلويديك منصة القائمة على العصبية والخلايا الدبقية الثقافة نظام المشاركة في الثقافة. |
المراجع
- Stevens, B. Neuron-astrocyte signaling in the development and plasticity of neural circuits. Neuro-Signals. 16, 278-288 (2008).
- Paixao, S., Klein, R. Neuron-astrocyte communication and synaptic plasticity. Current opinion in neurobiology. 20
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
