Nakledilen Muscle Progenitör Hücreler Hedefleyecek Moleküler Görüntüleme
Summary
Miyoblast ekiminin başarısını değerlendirmek için bir non-invaziv yollarla açıklanmıştır. Yöntemi olan ifade farklı görüntüleme yöntemleri ile görüntülenebilir genlerin oluşan birleşik bir füzyon muhabiri gen yararlanır. Burada, bir yararlanabilir<em> Değişimlerine</emBiyolüminesans görüntüleme yoluyla hedef hücrelere> muhabiri gen dizilimi.
Abstract
Duchenne müsküler distrofi (DMD) 3500 erkeklerde 1 etkileyen ciddi bir genetik nöromüsküler hastalıktır ve ilerleyici kas dejenerasyonu 1, 2 ile karakterizedir. Hastalarda, hasarlı myofibers yenilenmesine ikamet kas uydu hücrelerinin yeteneği (SC'ler) 4 gittikçe verimsiz hale gelmektedir. Bu nedenle, sağlıklı deneklerden kas progenitör hücrelerin (PPM'ler) / miyoblastları transplantasyonu DMD için umut verici bir tedavi yaklaşımıdır. Kök hücre tedavisi kullanımı önemli bir kısıtlaması, ancak implante hücrelerin uzun vadeli izlenmesi için, ve onun etkinliğini değerlendirmek için güvenilir görüntüleme teknolojilerinin bir eksikliğidir. Burada, miyoblast ekiminin başarısını değerlendirmek için bir non-invaziv, gerçek zamanlı bir yaklaşım açıklanmaktadır. Bu yöntem (ateş böceği lusiferaz [değişimlerine], monomer cinsi kırmızı flöresanlı protein [MRFP] ve SR39 timidin kinaz [sr39tk]) expre genlerin oluşan bir birleşik füzyon raportör gen yararlanırSsion farklı görüntüleme yöntemleri 9, 10 ile görüntülenebilir. Pozitron emisyon tomografisi (PET), tek foton emisyon bilgisayarlı tomografi (SPECT), manyetik rezonans görüntüleme (MRI), optik görüntüleme ve yüksek frekanslı 3D ultrason dahil olmak üzere görüntüleme yöntemleri, çeşitli eşsiz avantajları ve sınırlamaları, her biri mevcuttur 11. Bio-ışıldama, görüntüleme (BLI) çalışmalar, örneğin, nispeten düşük maliyetle ve yüksek işlem olma avantajına sahiptir. Bu çalışmada, biz bir fare içine implantasyonu uygulanabilir C2C12 miyoblastları kısa vadeli lokalizasyon için füzyon geni ve biyolüminesans görüntüleme (BLI) bulunan ateşböceği lusiferaz (değişimlerine) muhabiri gen sekansı yararlanabilir, bu nedenle içindir DMD modeli 12-14 (X kromozomu [mdx] fare müsküler distrofi). Önemlisi, BLI etiketli PPM'ler implantasyon sonrası kinetiğini incelemek için bir yol bize sağlar ve t üzerinde art arda hücreleri izlemek için yararlı olacaktırime ve aşağıdaki göç. Bizim muhabiri gen yaklaşımı bizi daha tek bir canlı konuda birden fazla görüntüleme yöntemleri birleştirme sağlar; tomografik doğası, ince uzaysal çözünürlük ve büyük hayvanlarda ve insanlarda 10,11 büyültmek için yeteneği verilir, PET gelecekteki çalışmalarımızın temelini oluşturacaktır ki önermek preklinik modeller ve klinik uygulamalara hücrelerinde geliştirilen yöntemlerden hızlı çeviri kolaylaştırabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu çalışmada, transplantasyon sonrası non-invaziv hedef miyoblastları / PPM'lere hızlı ve güvenilir bir moleküler görüntüleme, muhabir gen yaklaşımı nitelendirdiler. Bu çalışmada bioluminescense görüntüleme (BLI), aslında, kolayca çok hücre implantasyon yoluyla, hücre uyumunu uzunlamasına bir değerlendirme için uygulanabilir hedef hücreler olduğu şekilde üzerinden nakledilen PPM'lerin kısa süreli yerleşimi gösterilmiştir da stabil olarak ekspres raportör ge…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar fluc/mrfp/sr39tk muhabiri gen hediye Sanjiv Gambhir teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Kanada Kök Hücre Ağı (SCN) ve Jesse Yolculuğu Vakfı tarafından finanse edildi.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| C2C12 myoblasts | ATCC | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | Life Technologies | 12800-017 | |
| fetal bovine serum | Life Technologies | 12483020 | |
| 0.25% Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25200-72 | |
| Hanks Balanced Salt Solution | Sigma Aldrich | H6648 | |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668-019 | |
| Nikon Eclipse TE2000-5 | Nikon Instruments Inc. | ||
| Xenolight D-luciferin | PerkinElmer | 122796 | 40 mg/ml in PBS |
References
- Emery, A. E. The muscular dystrophies. Lancet. 359, 687-695 (2002).
- Blake, D. J., et al. Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle. Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).
- Goldring, K., Partridge, T., Watt, D. Muscle stem cells. J. Pathol. 197, 457-467 (2002).
- Partridge, T. A. Cells that participate in regeneration of skeletal muscle. Gene Ther. 9, 752-753 (2002).
- Moss, F. P., Leblond, C. P. Satellite cells as the source of nuclei in muscles of growing rats. Anat. Rec. 170, 421-435 (1971).
- Snow, M. H. An autoradiographic study of satellite cell differentiation into regenerating myotubes following transplantation of muscles in young rats. Cell Tissue Res. 186, 535-540 (1978).
- Kuang, S., Rudnicki, M. A. The emerging biology of satellite cells and their therapeutic potential. Trends Mol. Med. 14 (2), 82 (2008).
- Hoffman, E. P., et al. Characterization of dystrophin in muscle-biopsy specimens from patients with Duchenne’s or Becker’s muscular dystrophy. N. Engl. J. Med. 318, 1363-1368 (1988).
- Ray, P., Tsien, R., Gambhir, S. S. Construction and validation of improved triple fusion reporter gene vectors for molecular imaging of living subjects. Cancer Res. 67 (7), 3085 (2007).
- Ray, P., et al. Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects. Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).
- Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Molecular imaging in living subjects: seeing fundamental biological processes in a new lights. Genes Dev. 17, 545-580 (2003).
- Sicinski, P., et al. The molecular basis of muscular dystrophy in the mdx mouse: a point mutation. Science. 244, 1578-1580 (1989).
- Mattson, M. P. . Pathogenesis of neurodegenerative disorders. In: Contemporary neuroscience. X, 294 (2001).
- Andersson, J. E., Bressler, B. H., Ovalle, W. K. Functional regeneration in hind limb skeletal muscle of the mdx mouse. J. Muscle Res. Cell Motil. 9, 499-515 (1988).
