Apoptotic सेल क्लीयरेंस की इमेजिंग के दौरान जीते<em> ड्रोसोफिला</em> Embryogenesis
Summary
यहाँ हम apoptotic सेल निकासी की गतिशीलता के अध्ययन के लिए एक प्रभावी विधि का वर्णन<em> Vivo में</em>. इस विधि रहते रोजगार<em> ड्रोसोफिला</em> Apoptotic कोशिकाओं और फ़ैगोसाइट की विशिष्ट लेबलिंग का उपयोग कर apoptotic कोशिकाओं की निगरानी phagocytosis के लिए एक शक्तिशाली मॉडल के रूप में भ्रूण.
Abstract
apoptosis और बाद में phagocytosis के माध्यम से अवांछित या न्यायपालिका कोशिकाओं का उचित उन्मूलन (apoptotic सेल निकासी) सभी metazoan जीवों के सामान्य विकास के लिए महत्वपूर्ण है. Apoptotic सेल निकासी परिचित कोशिका मृत्यु के साथ जुड़े एक अत्यधिक गतिशील प्रक्रिया है, unengulfed apoptotic कोशिकाओं मुश्किल से सामान्य परिस्थितियों में vivo में देखा जाता है. Apoptotic सेल निकासी के विभिन्न चरणों को समझने के लिए और 'पेशेवर' फ़ैगोसाइट तुलना करने के लिए आदेश में – मैक्रोफेज और वृक्ष के समान कोशिकाओं 'गैर पेशेवर' – ऊतक निवासी पड़ोसी कोशिकाओं, प्रक्रिया के vivo रहते इमेजिंग में अत्यंत मूल्यवान है. यहाँ हम जीवित भ्रूण ड्रोसोफिला में apoptotic सेल निकासी के अध्ययन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है. हम apoptotic कोशिकाओं और फ़ैगोसाइट के लिए विशिष्ट मार्कर का उपयोग phagocytosis में विभिन्न चरणों की गतिशीलता का पालन करने के लिए. इसके अलावा, हम समानांतर में दो भक्षककोशिकीय प्रणालियों की निगरानी कर सकते हैं: 'पेशेवर' मैक्रोफेज और 'अर्द्ध profeविकासशील केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में ssional 'glia (सीएनएस). यहाँ वर्णित विधि apoptotic सेल निकासी की वास्तविक समय अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल के रूप में ड्रोसोफिला भ्रूण कार्यरत हैं.
Introduction
apoptosis और बाद में phagocytosis के माध्यम से अवांछित या न्यायपालिका कोशिकाओं का उचित उन्मूलन भ्रूण के विकास के लिए और साथ ही वयस्क में ऊतक homeostasis के लिए महत्वपूर्ण है. Apoptotic कोशिकाओं या apoptotic सेल निकासी की phagocytosis चार चरणों में आगे बढ़ती है जो एक अत्यधिक गतिशील प्रक्रिया है: apoptotic सेल को फ़ैगोसाइट की (1) भर्ती ('खोजने वाली मुझे'), phagocytosis के लिए एक लक्ष्य के रूप में सेल की (2) पहचान ( 'मुझे खाना') और (3) घिराव, apoptotic कण 1-5 (4) फेगोसोम परिपक्वता और गिरावट के द्वारा पीछा किया. 'पेशेवर' मैक्रोफेज और अपरिपक्व वृक्ष के समान कोशिकाओं, और 'गैर पेशेवर' ऊतक निवासी पड़ोसी कोशिकाओं, metazoan विकास 6,7 दौरान apoptotic सेल निकासी के लिए जो महत्वपूर्ण हैं: फ़ैगोसाइट के दो प्रकार के होते हैं.
ड्रोसोफिला विकास, apoptosis के माध्यम से अनावश्यक कोशिकाओं के उन्मूलन तीन मीटर में होता हैदेर से भ्रूण के मध्य में, पहले तो मध्य प्यूपा में, और फिर जल्दी वयस्क में ऐन चरणों,. Embryogenesis दौरान apoptotic कणों 'पेशेवर' फ़ैगोसाइट, मैक्रोफेज, और 'गैर पेशेवर' बाहरी झिल्ली और glia 8,9 द्वारा से हटा रहे हैं.
हमारे पिछले काम में हम embryogenesis दौरान phagocytic कोशिकाओं में विशेष रूप से व्यक्त किया जाता है जो एक phagocytic रिसेप्टर, छह माइक्रोन के नीचे (SIMU) की पहचान की है. मोबाइल प्रमोटर का उपयोग हम हमें एक जीवित विकासशील भ्रूण 8 में एक साथ मैक्रोफेज, बाह्य त्वक स्तर और glia नजर रखने के लिए सक्षम बनाता है जो phagocytic सेल आबादी (मोबाइल-cytGFP) के लिए एक विशिष्ट मार्कर उत्पन्न. इसके अलावा, apoptosis के विभिन्न चरणों में apoptotic कोशिकाओं के लिए विशिष्ट मार्कर का उपयोग करके, हम इन विवो में apoptotic सेल निकासी की गतिशीलता का पालन करने में सक्षम हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
Apoptotic सेल निकासी अत्यधिक गतिशील है जो apoptosis, का एक महत्वपूर्ण अंतिम चरण में है. इसलिए प्रक्रिया की वास्तविक समय पढ़ाई अत्यंत महत्व के हैं. यहाँ हम विकासशील भ्रूण ड्रोसोफिला रहने में apoptotic सेल निकासी की नि…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम एक मैरी क्यूरी Reintegration अनुदान (IRG249084) द्वारा समर्थित किया गया था. हम Kurant प्रयोगशाला के सभी सदस्यों को धन्यवाद.
Materials
| Reagent | |||
| Annexin V | Molecular Probes | A35108 | |
| PhiPhiLux G2D2 | OncoImmunin | A304R2G-5 | |
| LysoTracker | Molecular Probes | L-7528 | |
| Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898 | |
| Material | |||
| Capillary tubing | FHC | 30-30-0 | |
| Cell Strainer | SPL | 93100 | |
| Paintbrush |
References
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