Summary

الوليد الصعق الكهربائي المنطقة Subventricular

Published: February 11, 2013
doi:

Summary

ونحن يبرهن على وجود تقنية مينيملي ويشار إلى الولدان الصعق الكهربائي منطقة subventricular. تقنية حقن الحمض النووي يتكون من البلازميد إلى البطينين الوحشي للالجراء حديثي الولادة وتطبيق التيار الكهربائي لتقديم والتلاعب وراثيا الخلايا الجذعية العصبية

Abstract

الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) خط البطينين الوحشي بعد الولادة وتؤدي إلى أنواع خلايا متعددة والتي تشمل الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، وخلايا البطانة العصبية 1. فهم المسارات الجزيئية المسؤولة عن التزام مجلس الأمن القومي، التجديد الذاتي، والتمايز هو أمر حاسم لتسخير إمكاناتها الفريدة لإصلاح الدماغ وفهم أفضل اضطرابات الجهاز العصبي المركزي. مطلوب الأساليب السابقة للتلاعب من نظم الثدييات المسعى تستغرق وقتا طويلا ومكلفة للهندسة الوراثية على مستوى الحيوان كله 2. وهكذا، واستكشفت الغالبية العظمى من الدراسات وظائف الجزيئات NSC في المختبر أو في اللافقاريات.

هنا، علينا أن نبرهن على تقنية بسيطة وسريعة لمعالجة المواليد الشخصيات التي يشار اليها على انها حديثي الولادة الصعق الكهربائي subventricular (SVZ) المنطقة. تم تطوير تقنيات مماثلة قبل عقد من الزمن لدراسة NSCs الجنينية ولقد ساعد على دراسات corticaL 3،4 التنمية. وفي الآونة الأخيرة تم تطبيق هذه لدراسة الدماغ الأمامي القوارض بعد الولادة 5-7. هذه التقنية نتائج قوية في وضع العلامات من NSCs SVZ وذريتها. وهكذا، بعد الولادة SVZ الصعق الكهربائي و يوفر التكلفة والوقت البديل الفعال للهندسة الوراثية NSC الثدييات.

Protocol

هذا الإجراء هو وفقا لمتطلبات IACUC ييل. هل يجوز للعلماء التأكد من أن تتم الموافقة على المبادئ التوجيهية IACUC وتابع وفقا لاحتياجاتها المؤسسية. 1. القسم 1. إعداد الماصات DNA، والحلول، والزجاج <li style=";text-align:right;direction…

Representative Results

الوليد الصعق الكهربائي منطقة subventricular النتائج في وسم الخلايا الدبقية تقريبا كل شعاعي متجاورة مع، الظهرية الظهرية منطقة subventricular الجانبية، والجانبية بعد حركة "الكاسح" من القطب منتاش (الشكل 1E). ومع ذلك، يمكن أن تكون مصممة الصعق الكهربائي لمتطلبات التجربة …

Discussion

نحن هنا التفاصيل أسلوب الصعق الكهربائي SVZ حديثي الولادة، وهي تقنية لبسرعة وبقوة تسمية الخلايا الجذعية والتلاعب SVZ وذريتها. هناك العديد من المزايا التي الصعق الكهربائي وبالمقارنة مع غيرها من التقنيات. أولا، نظرا للوضع العلامات التنسيق من الخلايا، واحد قادر على تمييز…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من وزارة الدفاع (فكرة الجائزة التنمية، W81XWH-10-1-0041، AB)، CT الجذعية منحة الخلية (AB)، والمعهد الوطني للصحة NRSA 10668225 (DMF). ويستند المواد موجودة على العمل المدعوم جزئيا من ولاية كونيتيكت تحت الخلايا الجذعية كونيتيكت برنامج المنح البحثية. كان شركة والممولين محتوياته هي الجهة الوحيدة المسؤولة عن أصحابها ولا تعبر بالضرورة عن وجهات النظر الرسمية للدولة من ولاية كونيتيكت، وزارة الصحة العامة في ولاية كونيتيكت أو الابتكارات CT، أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Heavy Polished Borosilicate Tubing Sutter Instrument BF150-110-10
Dual-Stage Glass Micropipette Puller Narishige PC-10H
Fast Green Fischer Scientific 0521192205
ECM 830 Square Wave Pulse generator Harvard Apparatus 45-0052
Tweezertrodes Harvard Apparatus 45-0488
Fiber-Optic Light Source Fisher Scientific 12-562-36
Tungsten Halogen lamp USHIO America, Inc 1002247
Picospritzer II Parker Instruments 052-0312-900

References

  1. Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. The glial nature of embryonic and adult neural stem cells. Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).
  2. Imayoshi, I., Sakamoto, M., Kageyama, R. Genetic methods to identify and manipulate newly born neurons in the adult brain. Frontiers in Neuroscience. 5, 64 (2011).
  3. LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex. Cereb Cortex. 19, i120-i125 (2009).
  4. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103, 865-872 (2001).
  5. Boutin, C., Diestel, S., Desoeuvre, A., Tiveron, M. C., Cremer, H. Efficient in vivo electroporation of the postnatal rodent forebrain. PloS ONE. 3, e1883 (2008).
  6. Chesler, A. T., et al. Selective gene expression by postnatal electroporation during olfactory interneuron nurogenesis. PloS ONE. 3, e1517 (2008).
  7. Platel, J. C., et al. NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network. Neuron. 65, 859-872 (2010).
  8. Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 73, 357-365 (2008).
  9. Fernandez, M. E., Croce, S., Boutin, C., Cremer, H., Raineteau, O. Targeted electroporation of defined lateral ventricular walls: a novel and rapid method to study fate specification during postnatal forebrain neurogenesis. Neural Development. 6, 13 (2011).
  10. de Chevigny, A., et al. miR-7a regulation of Pax6 controls spatial origin of forebrain dopaminergic neurons. Nature Neuroscience. 15, 1120-1126 (2012).
  11. Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice. Frontiers in Neuroscience. 4, (2010).
  12. Feliciano, D. M., Quon, J. L., Su, T., Taylor, M. M., Bordey, A. Postnatal neurogenesis generates heterotopias, olfactory micronodules and cortical infiltration following single-cell Tsc1 deletion. Human Molecular Genetics. 21, 799-810 (2012).
  13. Iguchi, T., Yagi, H., Wang, C. C., Sato, M. A tightly controlled conditional knockdown system using the Tol2 transposon-mediated technique. PloS ONE. 7, e33380 (2012).

Play Video

Cite This Article
Feliciano, D. M., Lafourcade, C. A., Bordey, A. Neonatal Subventricular Zone Electroporation. J. Vis. Exp. (72), e50197, doi:10.3791/50197 (2013).

View Video