नवजात subventricular क्षेत्र electroporation
Summary
एक न्यूनतम इनवेसिव तकनीक नवजात subventricular क्षेत्र electroporation के रूप में भेजा प्रदर्शित करता है. तकनीक नवजात पिल्ले के पार्श्व ventricles में प्लास्मिड डीएनए इंजेक्शन और बिजली के वर्तमान आवेदन वितरित करने के लिए होते हैं और आनुवंशिक रूप से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं में हेरफेर
Abstract
तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (एनएससी) प्रसवोत्तर पार्श्व ventricles लाइन और जो न्यूरॉन्स astrocytes, और ependymal कोशिकाओं में शामिल हैं 1 कई प्रकार की कोशिकाओं को जन्म देते हैं. आणविक एनएससी प्रतिबद्धता आत्म नवीकरण के लिए जिम्मेदार रास्ते, और भेदभाव को समझना उनके अद्वितीय क्षमता का दोहन करने के लिए मस्तिष्क की मरम्मत करने के लिए और बेहतर केंद्रीय तंत्रिका तंत्र विकारों को समझने के लिए महत्वपूर्ण है. स्तनधारी प्रणालियों के हेरफेर के लिए पिछले विधियों पूरे जानवर 2 स्तर पर जेनेटिक इंजीनियरिंग के समय लेने और महंगी प्रयास की आवश्यकता है. इस प्रकार, अध्ययन के विशाल बहुमत इन विट्रो में या अकशेरूकीय में एनएससी अणुओं के कार्यों का पता लगाया है.
यहाँ, हम नवजात NPCs कि नवजात subventricular क्षेत्र electroporation (SVZ) के रूप में संदर्भित किया जाता है में हेरफेर करने के लिए सरल और तेजी से तकनीक का प्रदर्शन. इसी तरह की तकनीक एक दशक पहले विकसित किए गए अध्ययन करने के लिए भ्रूण एनएससी और cortica पर अध्ययन सहायता प्राप्तएल विकास 3,4. हाल ही में इस प्रसवोत्तर कृंतक अग्रमस्तिष्क 5-7 अध्ययन करने के लिए लागू किया गया था. इस तकनीक SVZ एनएससी और उनके वंशज के मजबूत लेबलिंग में परिणाम है. इस प्रकार, प्रसवोत्तर SVZ electroporation एक और स्तनधारी एनएससी जेनेटिक इंजीनियरिंग के लिए समय प्रभावी वैकल्पिक लागत प्रदान करता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ हम नवजात SVZ electroporation की तकनीक, एक तेजी से और robustly लेबल और तकनीक SVZ स्टेम सेल और उनके संतान में हेरफेर करने के लिए विस्तार. वहाँ कई फायदे कि electroporation अन्य तकनीकों की तुलना में है. सबसे पहले, कोशिकाओं की फोकल लेब?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के रक्षा विभाग (आइडिया विकास पुरस्कार, W81XWH-10-1-०,०४१, एबी), सीटी स्टेम सेल (एबी) अनुदान, और स्वास्थ्य 10668225 एनआरएसए (DMF) का एक राष्ट्रीय संस्थान से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. वर्तमान सामग्री आंशिक रूप से कनेक्टिकट स्टेम सेल अनुसंधान अनुदान कार्यक्रम के तहत कनेक्टिकट के राज्य द्वारा समर्थित काम पर आधारित है. इसकी सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और कनेक्टिकट, कनेक्टिकट या सीटी नवाचार के राज्य के लोक स्वास्थ्य विभाग के राज्य के अधिकारी विचार जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व, इंक funders अध्ययन डिजाइन में कोई भूमिका नहीं थी, डाटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि की तैयारी.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
| Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
| ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
| Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
| Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
| Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |
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