를 사용하여 비 비만 당뇨병 마우스의 위 비우는의 평가 [¹³ C]-octanoic 산성 호흡 시험

Summary

비 침습적으로 위 비우는의 결정 [¹³ C]-octanoic 여성 NOD LtJ 마우스의 추적 gastroparesis에 대한 산 호흡 테스트.

Abstract

쥐 위 비우는 연구는 가장 일반적으로 사용되는 기술은 동물과 식사 ^1,2의 사후 복구를 죽이는해야하기 때문에 같은 동물의 위 비우는 변경 사항을 따르도록 없다는 의해 제한되었습니다. 이 방법은 나이와 질병의 진행과 위 비우는의 변화를 결정하기 위해 길이 방향의 연구를 방지 할 수 있습니다. 일반적으로 사용되는 ^[13 C]-octanoic 인간 ³ 산 숨이 시험은 마우스 ^4-6와 쥐 ⁷ 사용하기 위해 수정 우리는 이미이 시험은 약물에 응답하고 동안 안정적이고 위 비우는 변화에 반응을 보여 주었다되었습니다 당뇨병 질환의 진행 ^8. 이 비디오 프리젠 테이션에서이 수정 테스트의 원칙과 실제 구현은 설명합니다. 이전 연구에서와 같이, NOD LtJ 마우스는 제 1 형 당뇨병 ⁹ 모델을 사용합니다. 이 마우스의 비율은 diabet의 합병증, gastroparesis의 증상을 개발에스 위 ^(10)의 기계적 방해하지 않고 지연 위의 비우는의 특징.

본 논문은 테스트 식사를 준비하고 4 시간 위 비우는 데이터와 어떻게 얻은 데이터를 분석하는 방법을 구하는 방법, 테스트를 위해 쥐를 훈련하는 방법을 보여줍니다. 본 연구에 사용 된 탄소 동위 원소 분석기는 동시에 12 쥐 최대의 공기 샘플의 자동 샘플링에 적합합니다. 이 기술은 당뇨병이나 다른 오랜 질병으로 생쥐의 큰 그룹의 위 비우는의 종 후속 수 있습니다.

Introduction

이 원고 쥐 위 비우는의 비 침습적 측정에 관련된 기술 및 방법론 고려 사항에 대해 설명합니다. 에 따라 프로토콜이 여기에 설명, 조사가 안정적으로 reproducibly 인한 질병의 발전에 비우는 위의 변화를 추적 할 ^수, 위 비우는의 약리 대리인의 영향을 연구하고 기본 질병 또는 결함 ^6,8의 치료 위 비우는의 반응을 따라 ^11,12. 이전 출판물에서 ¹³ C의 응용 프로그램은 octanoic 산성 숨이 테스트는 사람과 동물 ^3,8에서 위 비우는을 측정하는 유용한 방법을 표시했습니다.이 보고서는 상세 설명 6-8으로 신뢰할 수있는 데이터를 얻을하는 데 필요한 절차 당뇨병 쥐 위 비우는의 길이 방향 연구에 필요한 개월. 이전에 다음 ID로 출판 방법에 비해이 프로토콜에 따라의 장점은 탐정이 데이터 obtaine을 보장 할 수 아르d는 신뢰할 수 있고 재현 할 수 있습니다. 또한, 수집 및 가스 샘플을 분석 자동화 된 시스템이 여기에 설명 된 연구에서 동시에 추적 할 수있는 동물의 수를 증가합니다. 전반적으로,이 문서의 목표는 테스트에 마우스 habituation와 그 얻은 결과에 변화를 줄일를 유지 주요 요인을 파악하는 것입니다.

위 비우는의 생체 측정의 경우, 마우스는 하루 아침에 금식하고 지속적인 공기 흐름을 투명 플라스틱 시험 챔버에 투입. 마우스가 튜브에 길들여지면, 기본은 ₂ 수준 결정 ¹³ CO를 exhaled과 공기가 적절히 조정. 다음, 우리는 ¹³ C-라벨 octanoic 산을 섞어 계란 노른자로 구성된 테스트 식사를 관리 할 수 있습니다. 마우스가 금식과 훈련되기 때문에, 그들은 일반적으로 2 분 이내에 테스트 식사를 먹습니다. 관리 octanoic 산성은 위장에서 흡수되지 않습니다하지만 십이지장에 연결됩니다D는 주변 공기를 ¹³ CO _2의 농축의 결과로, 출시와 exhaled되어 ¹³ CO _2로 간에서 대사 질 것입니다. 공기 샘플은 결정 시간 간격으로 수집하고 탄소 동위 원소 분석기에 의해 분석됩니다. 이 모든 과정에서 속도 – 제한 단계는 위 비우는와 CO _2는 직접 레이블 식사 위 비우는과 일치하는 ¹³ 폐 배설입니다.

그림 1. 위 비우는 장치의 도식. 밤새 금식 한 후, 마우스는 그들이 자유롭게 이동하고 회전 할 수 있도록 투명한 방에 배치됩니다. 입구 관은 신선하고 지속적으로 공기 유입을 허용하고 콘센트는 ^{13 C-에-12을} 측정 할 수있는 동위 원소 분석기로 연결의 C 비율은 숨을 exhaled. 챔버는 ^[13 C]-octanoic 산을 포함하는 음식을 제공을위한 중앙 포트가 있습니다.

Protocol

1. 마우스의 교육 및 Habituation 이전 분석에, 테스트 조건으로들이다하기 위해 지속적인 공기 흐름과 2-4 시간의 테스트 챔버에있는 모든 쥐를 넣어. 이 현저하게 다른 지연 위 비우는의 비정상 탐지가 발생할 수 있습니다 스트레스 수준을 줄일 수 있습니다. 마우스에게 위 비우는 실험이 실행 된 경우와 같은 방법으로 취급합니다. octanoic 산을 추가하지 않고 계란 노른자를 (자세한 참조) 준?…

Representative Results

세 가지 마우스에서 설정 한 대표 데이터는 그림 2에 표시됩니다. 검은 색 그래프는 정상 위의 비우는와 마우스에서 데이터 포인트를 나타냅니다. 그것은 시간의 함수로 표현 시간당 관리 복용량의 백분율로 exhaled 공중에 복구 13 C의 비율을 보여줍니다. 파란색 곡선은 168 분의 T 반 값 지연 위의 비우는와 마우스부터 40 분 그리고 붉은 곡선의 T 반 값으로 비우는 가속화 위와 ?…

Discussion

설명 기술은 여기 쥐 고체 위의 비우는의 생체 측정의 반복과 비 침습적 할 수 있습니다. 이 시스템은 사람들이 자유롭게 이동하고 회전 할 수 있도록 동물이 측정 챔버에 묶여하지 않는 장점이 있습니다. 이 익숙하지 않은 환경 때문에, 마우스는 여전히 훈련 위 비우는에 스트레스의 영향을 방지하기 위해 테스트 챔버에게 길들여해야합니다. 일반적으로 연속 위 비우는 테스트 사이의 내?…

Materials

NAME	COMPANY	CAT NUMBER	COMMENTS
A source of constant air-supply, flow as well as composition	central air supply in the research facility
130 ml sampling chamber that has air inlet, air outlet, and food administration opening Plastic tubes for air supply	In-house built
Octanoic acid	Cambridge isotope laboratories (Andover, MA)	CLM-293-1
To prepare the egg meal: small beaker 50 ml plastic tube Bunsen burner egg spatula	Any supplier		Try to be consistent with the egg supplier since the nutritional content and palatability of the eggs can affect ingestion and gastric emptying of the meal
Carbon dioxide isotope analyzer	Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA)