Determinación del vaciamiento gástrico con un no-invasivo [<sup> 13</sup> C]-octanoico prueba de aliento de fuego para la gastroparesia seguimiento en mujeres ratones NOD LTJ.
Estudios de vaciamiento gástrico en ratones han sido limitada por la incapacidad de seguir cambios de vaciado gástrico en el mismo animal ya que las técnicas más comúnmente usadas requieren la matanza de los animales y de recuperación post mortem del 1,2 comida. Este método evita que los estudios longitudinales para determinar los cambios en el vaciado gástrico con la edad y la progresión de la enfermedad. El uso común [13 C]-octanoico prueba de aliento ácido 3 para los seres humanos ha sido modificado para su uso en ratones y ratas 4-6 y 7 que anteriormente mostró que esta prueba es fiable y sensible a los cambios en el vaciado gástrico en respuesta a los fármacos y durante progresión de la enfermedad diabética 8. En este vídeo de presentación del principio y la aplicación práctica de esta prueba modificada se explica. Al igual que en el anterior estudio, los ratones NOD LTJ se utilizan, un modelo de diabetes tipo 1 9. Una parte de estos ratones desarrollan los síntomas de la gastroparesia, una complicación de la diabetes caracterizado por un vaciado gástrico retardado sin obstrucción mecánica del estómago 10.
En este trabajo se muestra cómo entrenar a los ratones para probar, cómo preparar la comida de prueba y obtener 4 hr gástricas datos vaciado y cómo analizar los datos obtenidos. El analizador de isótopo de carbono usado en el presente estudio es adecuado para el muestreo automático de las muestras de aire de hasta 12 ratones al mismo tiempo. Esta técnica permite el seguimiento longitudinal de vaciamiento gástrico de los grupos más grandes de ratones con diabetes u otras enfermedades de larga duración.
Este manuscrito describe los aspectos técnicos y metodológicos relacionados con la medición no invasiva del vaciamiento gástrico en ratones. Siguiendo el protocolo descrito aquí, los investigadores pueden fiable y reproducible seguir los cambios en el vaciado gástrico debido al desarrollo de la enfermedad, estudiar el impacto de los agentes farmacológicos en el vaciado gástrico y seguir la respuesta de vaciamiento gástrico para el tratamiento de las enfermedades subyacentes o defectos 6,8, 11,12. En las publicaciones anteriores, la aplicación de pruebas de aliento 13 C ácido octanoico ha demostrado ser una forma útil de medir el vaciado gástrico en humanos y animales 3,8. Este trabajo describe en detalle, los procedimientos necesarios para obtener datos fiables sobre la 8 6 a meses necesarios para un estudio longitudinal de vaciamiento gástrico en ratones con diabetes. Las ventajas de seguir este protocolo, en comparación con los métodos publicados anteriormente son que el investigador puede estar seguro de la obtaine datosd será fiable y reproducible. Además, el sistema automatizado de recogida y análisis de las muestras de gas se describe aquí aumenta el número de animales que puede ser seguido de forma simultánea en un estudio. En general, el objetivo de este trabajo es identificar los factores clave que mantienen la habituación de los ratones a la prueba y que reducir la variabilidad en los resultados obtenidos.
Para la medición in vivo de vaciado gástrico, los ratones se mantienen en ayunas durante la noche y puesto en las cámaras de ensayo de plástico transparente con flujo de aire constante. Después de que los ratones se habituaron a los tubos, de referencia exhalado 13 niveles de CO 2 se determinan y se ajusta en consecuencia el flujo de aire. A continuación, se administrará una comida de prueba que consiste en la yema de huevo mezclada con 13 C-etiquetados octanoico. Debido a que los ratones se mantienen en ayunas y entrenados, por lo general, comer la comida de prueba dentro de 2 min. El administrarse ácido octanoico no se absorbe en el estómago pero se recogió en el duodeno und conseguirá metaboliza en el hígado en 13 CO 2, que se libera y exhalado, lo que resulta en un enriquecimiento de 13 CO 2 en el aire circundante. Las muestras de aire se recogen a intervalos de tiempo determinados y son analizados por el analizador de isótopo de carbono. La tasa de limitación de paso en este proceso es el vaciado gástrico y la excreción pulmonar de 13 CO 2 se corresponde directamente con el vaciado gástrico de la comida etiquetada.
Figura 1. Esquema de aparato de vaciado gástrico. Después de una noche de ayuno, los ratones se colocaron en cámaras transparentes que les permitan moverse y girar libremente. Un tubo de entrada permite afluencia de aire fresco y una salida constante y conduce al analizador de isótopos para medir el C-13 a-12Relación C en el aire exhalado. La cámara también tiene un orificio central para el suministro de alimentos que contienen [13 C]-ácido octanoico.
La técnica descrita en este documento permite repetida y no invasiva de medición in vivo de vaciado gástrico sólido en ratones. Este sistema tiene la ventaja de que los animales no se restringen en la cámara de medición, lo que les permite moverse y girar libremente. Como se trata de un entorno desconocido, los ratones todavía necesitan ser entrenados y acostumbrados a las cámaras de prueba para prevenir los efectos del estrés sobre el vaciado gástrico. En general, se supone que los datos de vaciado g…
The authors have nothing to disclose.
Esta publicación vídeo fue posible gracias al financiamiento del Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales (NIDDK) para el Proyecto de Programa de Subsidios "Biopatología del sistema entérico" DK 68055. Christopher T. Creedon fue apoyada por el Programa de Mentores de Rochester Public Schools.
Agradecemos al Sr. Gary Stoltz para la asistencia técnica, la Sra. Kristy Zodrow para asistencia secretarial y el Dr. Douglas Baer de Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).
NAME | COMPANY | CAT NUMBER | COMMENTS |
A source of constant air-supply, flow as well as composition | central air supply in the research facility | ||
130 ml sampling chamber that has air inlet, air outlet, and food administration opening Plastic tubes for air supply |
In-house built | ||
Octanoic acid | Cambridge isotope laboratories (Andover, MA) | CLM-293-1 | |
To prepare the egg meal:
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Any supplier | Try to be consistent with the egg supplier since the nutritional content and palatability of the eggs can affect ingestion and gastric emptying of the meal | |
Carbon dioxide isotope analyzer | Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) |