के पृथक्करण<em> प्लाज्मोडियम फाल्सीपेरम</em> चुंबकीय साधन के द्वारा देर से मंच संक्रमित एरिथ्रोसाइट्स
Summary
paramagnetic गुण की hemozoin की देर चरणों को अलग करने के लिए उपयोग किया जाता है<em> प्लाज्मोडियम फाल्सीपेरम</em> संक्रमित लाल रक्त संस्कृति में बढ़ कोशिकाओं. विधि सरल और तेज है और परजीवी के बाद में आक्रामक क्षमताओं को प्रभावित नहीं करता है.
Abstract
पी. अन्य प्लाज्मोडियम प्रजातियों के विपरीत, फाल्सीपेरम प्रयोगशाला है, जो अपने अध्ययन की सुविधा 1 में संवर्धित किया जा सकता है. जबकि हासिल पेरासाइटिमिया ≈ 40% सीमा तक पहुँच सकते हैं, अन्वेषक आमतौर पर लगभग 10% से कम प्रतिशत रहता है. कई मामलों में यह परजीवी युक्त असंक्रमित लोगों से लाल रक्त कोशिकाओं (RBCs) को अलग करने के लिए संस्कृति को समृद्ध और एक भी प्रयोग के साथ आगे बढ़ना करने के लिए आवश्यक है.
जब पी. फाल्सीपेरम एरिथ्रोसाइट को संक्रमित करता है, परजीवी degrades और हीमोग्लोबिन 2, 3 से खिलाती है. हालांकि, परजीवी एक बहुत ही विषाक्त लौह युक्त haem 4 आधा भाग, 5 के साथ सौदा होगा. परजीवी एक आभ्यांतरिक क्रिस्टल 6 haemozoin, 7 बुलाया बहुलक में haem बदलने के द्वारा इसकी विषाक्तता eludes. यह लौह युक्त अणु अपने भोजन रिक्तिका में संग्रहीत किया जाता है और में यह धातु एक oxidative राज्य जो 8 haem में एक से अलग है. haem में लोहे की ferric राज्यozoin यह एक paramagnetic असंक्रमित एरिथ्रोसाइट्स में अनुपस्थित संपत्ति पर प्रदान करता है. के रूप में हमलावर परजीवी परिपक्वता तक पहुँचता है, की सामग्री के haemozoin भी 9 बढ़ जाती है, जो पी. के नवीनतम दौर पर भी अधिक अनुचुंबकत्व bestows एरिथ्रोसाइट अंदर फाल्सीपेरम.
इस paramagnetic संपत्ति, पी. के नवीनतम दौर के आधार पर फाल्सीपेरम संक्रमित लाल रक्त कोशिकाओं को एक चुंबकीय मोतियों से युक्त स्तंभ के माध्यम से संस्कृति गुजर द्वारा अलग किया जा सकता है. इन मोतियों चुंबकीय बन जाते हैं जब उन्हें युक्त स्तंभ एक चुंबक धारक पर रखा जाता है. संक्रमित लाल रक्त कोशिकाओं, के कारण उनके अनुचुंबकत्व, तो स्तंभ के अंदर फंस जाएगा, जबकि प्रवाह के माध्यम से शामिल होंगे सबसे अधिक हिस्सा है, असंक्रमित एरिथ्रोसाइट्स और परजीवी की उन युक्त प्रारंभिक दौर के लिए,.
यहाँ, हम चुंबकीय कॉलम, है जो अच्छा परजीवी व्यवहार्यता 10 का कहना है के साथ देर से मंच परजीवी की आबादी को समृद्ध करने की पद्धति का वर्णन.इस प्रक्रिया के प्रदर्शन के बाद, स्वाधीन संस्कृति एक मशीन को लौट जा सकता है शेष परजीवी बढ़ जारी रखने के लिए अनुमति देते हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
मलेरिया परजीवी पी. की इन विट्रो संस्कृतियों में फाल्सीपेरम संस्कृति के प्रसार के उच्चतम बिंदु पर असंक्रमित लाल रक्त कोशिकाओं की तुलना में आधे से अधिक के साथ एक सीमित पेरासाइटिमिया प्रदर्श?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के द्वारा वित्त पोषित किया गया था अनुदान PRB-009 सीएस और नियंत्रण रेखा के लिए एक डॉक्टरेट Secretaria Nacional de Ciencia y (SENACYT) TECNOLOGIA, पनामा से छात्रवृत्ति के लिए.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| RPMI 1640 Hepes Modified | Sigma-Aldrich | R4130 | Supplemented with 10% human serum, 2% glucose, and 0.2% sodium bicarbonate |
| MidiMACS Separator | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-302 | |
| MACS MultiStand | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-303 | |
| LS Columns | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-401 | |
| Hemacytometer | Grafco | Grafco Neubauer Chamber | Can be found through many other suppliers |
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