노화 암 세포를 정량화하는 민감한 방법
Summary
노화가 방지하거나 종양 논란이 계속 추진할지 여부를 지정합니다. chemotherapeutical 마약 senesce하는 암 세포를 유도 할 수 있기 때문에, 노화를 연구하는 새로운 치료법을 제안 필수적이다. 그러나, 표준 및 널리 사용되는 β-갈 락토시다 분석은 주요 단점을 제공합니다. 우리는 여기에서 노화를 정량화 할 수있는 신속하고 민감한 유동 세포 계측법 기반 분석을 제안한다.
Abstract
인간의 세포는 무한정 증식하지 않는다. 외부 및 / 또는 내재적 단서에 따라, 세포는 죽거나 노화라는 안정적인 세포주기 정지를 입력 할 수 있습니다. 이러한 텔로미어 단축과 세포 분열 종양 유전자의 이상 발현 등 여러 세포 메커니즘은, 노화를 유발하는 것으로 알려져있다. 노화는 정상 세포에 국한되지 않고, 암 세포는 senesce보고되었다.
Chemotherapeutical 약물은 암 세포의 노화를 유발하는 것으로 알려져있다. 그러나 노화를 방지하거나 종양을 촉진하는지 논란이 남아있다. 그것은 결국 환자 특정 할 수 있듯이, 암 세포의 노화를 평가하기 위해 신속하고 민감한 방법은 빨리해야합니다.
이를 위해, 표준 β-갈 락토시다 분석, 현재 사용되는 방법은 주요 단점을 제공합니다 : 그것은 시간이 걸리고 문자를 구분하지 않습니다. 우리는 여기에서 리튬의 노화를 연구하는 유동 세포 계측법 기반 분석을 제안한다세포를 쉬게. 이 분석은 민감하고 신속하다는 장점을 제공하며, 다양한 세포 마커의 immunolabeling의에 결합 할 수 있습니다.
Introduction
60 년대 초반과 헤이 플릭 및 무어 헤드의 발견 이후, 노화는 여전히 휴대 호기심 1 남아있다. 인간의 세포는 무한정 노화에 의해, 헤이 플릭 및 무어 노화의 세포 프로세스를 만들어 낸, 확산되지 않습니다. 노화는 세포의 죽음에 반대하는 세포 대사 활성 상태로 유지하는 안정적인 세포주기 정지됩니다. 텔로미어 단축, DNA 손상, 염색질 교란 및 세포 분열 종양 유전자의 이상 발현 2 일에 네 개의 세포 메커니즘은 노화를 유발하는 것으로 알려져있다. 이것은 정상 세포뿐만 아니라 의미뿐만 아니라 암 세포가 노화 3을받을 수 있습니다. 사실, 노화가 진행 암 세포는 더욱 종양의 진행 4-5 장벽을 구성하는 표시했다. 그러나 몇몇 보고서는 이제 특정 상황에서, 세포의 노화는 악성 6-7을 촉진 할 수 있다고 지적했다. 암 CEL의 노화를 연구LS는 현재 화학 요법 약물은 체외에서뿐만 아니라 생체 8뿐만 아니라 암 세포의 노화로 이어질 수 있습니다 사용되는 암 연구 충동이되기에 관하여이다.
노화 세포의 존재 여부를 조사하기 위해 마스터 분석은 산성 pH에서 β-갈 락토시다 분석이다. 이 조직 화학적 분석은 대부분 노화 세포에서 발생하는 리소좀 생합성 증가를 반영합니다. 간단히, 세포에 적용 외생 X-GAL는, 파랑 색 9 상승을주는, 노화 세포의 리소좀에 풍부한 β-갈 락토시다 제에 의해 절단되어있다. 블루 노화 세포는 그 시야 현미경으로 정량화 할 수있다. 매우 인기가 있지만, β-갈 락토시다 분석은 주요 단점을 제공합니다. 첫째,이 분석은 고정 된 세포에서 수행됩니다. 그것은 현미경으로 노화 세포의 상당히 높은 숫자를 계산하여 노화의 정도를 정량화하는 것을 의미하기 때문에 둘째, 시간이 소요됩니다. 셋째,이 분석노화 및 비 – 노화 세포 사이의 차별은 전적으로 관찰자에 의존로 구분하지 않습니다.
우리는 여기에 살고 노화 세포의 존재 여부를 평가하기 위해 개발되지 않은, 빠른, 민감한 세포 계측법 기반의 분석을 설명합니다. 이 분석은 막 투과 분자의 분해, 5 dodecanoylaminofluorescein 디-β-D-갈 락토 피 라노 (C 12 FDG)을 기반으로, β-갈 락토시다 아제에 의해 노화 세포 충실. 가수 분해 및 레이저 여기 후, C 12 FDG 녹색 형광을 방출하기 때문에 유동 세포 계측법 10, 11에 의해 감지 할 수 있습니다. 유동 세포 계측법을 통해 노화 세포의 검출은 신속하고 민감의 큰 장점을 제공합니다. 또한, 유동 세포 계측법에 의한 노화 세포의 검출은 다른 세포 마커의 검출과 결합 할 수 있습니다. 이 분석은 화학 요법으로 치료 암 세포의 인구 내에서 노화 세포를 감지하는 데 사용할 수 있으며, 정기적으로 설정할 수 있습니다최대 조직 절편에서 세포 분리 후, 진료소합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리는 여기에서 살아있는 암세포의 세포 노화를 정량화하는 유동 세포 계측법 기반 방법을 제시 하였다. 이 방법은 막 투과 화합물 C 12 FDG의 사용을 기반으로하며, 화합물은 세포에 의해 촬영 그러므로 어떤 종류의 세포와 장기 등 다양한 치료 후 사용할 수 있습니다. 세포 흡수시, C 12 FDG는 노화 세포의 리소좀에 풍부한 β-갈 락토시다 아제에 의해 가수 분해됩니다. 레이저 여기 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 세포 계측법 시설의 사용을위한 SF 4206 ICORE을 (캉 대학교) 감사합니다. JC는 헌법위원회 데 방사선 방호 디 EDF와 노르망디의 헌법위원회 지역에서 박사 후 장학금을 받았다. Comités 드 난 Orne의 등 뒤 칼바도스 – 해당 데이터는 리그 국립 contre 르 암에 의해 투자 프로젝트의 일환이었다.
Materials
| Name of the Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| 5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galactopyranoside | Invitrogen | D-2893 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Bafilomycin A1 | Sigma | B1793 | |
| Doxorubicin | Sandoz | ||
| Trypan blue | Sigma | T8154 | |
| RPMI 1640 cell culture medium | Lonza | BE12-702 | |
| Fetal calf serum | PAA Laboratories GmBH | A15 101 | |
| Antibiotics | Gibco | 5290-018 | |
| Gallios flow cytometer | Beckman Coulter | A94291 |
References
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