Immunodeficient चूहों में चमड़े के नीचे और Intrahepatic मानव hepatocellular कार्सिनोमा Xenografts की पीढ़ी
Summary
Immunodeficient चूहों में मानव ट्यूमर xenografts कैंसर जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए मूल्यवान उपकरण हैं. मानव hepatocellular कार्सिनोमा कोशिकाओं या ट्यूमर के टुकड़े से चमड़े के नीचे और intrahepatic xenografts उत्पन्न करने के लिए विशिष्ट प्रोटोकॉल में वर्णित हैं. प्राप्तकर्ता चूहों में आंशिक hepatectomy से प्रेरित जिगर उत्थान intrahepatic engraftment की सुविधा के लिए एक रणनीति के रूप में प्रस्तुत किया है.
Abstract
Vivo में मानव रोग पुनरावृत्ति कि hepatocellular कार्सिनोमा (एचसीसी) की प्रयोगात्मक मॉडल रोग pathophysiology में अनुसंधान के लिए और उपन्यास के उपचारों के preclinical मूल्यांकन के लिए एक मूल्यवान मंच प्रदान करते हैं. हम अनुसंधान आवेदनों की एक किस्म में उपयोग किया जा सकता है कि immunodeficient चूहों में चमड़े के नीचे या orthotopic मानव एचसीसी xenografts उत्पन्न करने के तरीकों की एक किस्म प्रस्तुत करते हैं. एक शुरुआती बिंदु के रूप में शल्य लकीर के दौर से गुजर रोगियों से प्राथमिक ट्यूमर के ऊतक के उपयोग पर ध्यान देने के साथ, हम xenografting के लिए सेल निलंबन या ट्यूमर के टुकड़े की तैयारी का वर्णन है. माउस तिल्ली में कोशिकाओं के इंजेक्शन द्वारा परोक्ष रूप से या द्वितीय) intrahepatically, या तो ट्यूमर कोशिकाओं या टुकड़े के प्रत्यक्ष आरोपण से जिगर में, या, हम इन ऊतकों मैं) subcutaneously xenograft के लिए विशेष तकनीक का वर्णन. हम भी एक रणनीति के रूप में xenografting के समय में देशी माउस जिगर का आंशिक लकीर के उपयोग का वर्णनप्राथमिक मानव ट्यूमर कोशिकाओं के intrahepatic engraftment सुविधा हो सकती है कि प्राप्तकर्ता माउस में सक्रिय जिगर उत्थान का एक राज्य प्रेरित. इन तकनीकों का अपेक्षित परिणाम सचित्र हैं. वर्णित प्रोटोकॉल आम तौर पर कम मजबूती के साथ साहित्य में व्यापक रूप से इस्तेमाल किया और अक्सर उद्धृत कर रहे हैं कि अच्छी तरह से स्थापित मानव एचसीसी सेल लाइनों से प्रदर्शन जो प्राथमिक मानव एचसीसी नमूनों और xenografts, का उपयोग मान्य किया गया है. सेल लाइनों के साथ इसकी तुलना में, हम xenotransplantation मॉडल में प्राथमिक एचसीसी engraftment की अपेक्षाकृत कम मौका योगदान और xenograft विकास के कैनेटीक्स को प्रभावित कर सकते हैं कि तकनीकी मुद्दों पर टिप्पणी कर सकते हैं, जो कारकों पर चर्चा की. हम यह भी प्राप्त xenografts सही जनक एचसीसी ऊतकों जैसे लगते हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए लागू किया जाना चाहिए कि तरीकों का सुझाव.
Introduction
Hepatocellular कार्सिनोमा (एचसीसी) दुनिया भर में पांचवां सबसे आम कैंसर और उत्तरी अमेरिका में कैंसर से मौत का सबसे तेजी से बढ़ रही है कारण है. एचसीसी के लिए सबसे अधिक प्रचलित जोखिम कारक सबसे अक्सर कारण क्रोनिक वायरल हैपेटाइटिस, शराब दुरुपयोग, autoimmune रोग, या वंशानुगत चयापचय संबंधी विकार 1 के लिए होने वाली, लीवर सिरोसिस है.
दुनिया भर में आबादी पर एचसीसी द्वारा लगाए गए भारी रोग बोझ के बावजूद, एचसीसी के pathophysiology अपेक्षाकृत खराब ऐसी कोलोरेक्टल, स्तन, या प्रोस्टेट कैंसर के रूप में अन्य आम कैंसर की तुलना में समझा जाता है. उदाहरण के लिए, tumorigenesis ड्राइविंग विशिष्ट आणविक और सेलुलर घटनाओं को स्पष्ट रूप से 2 से परिभाषित किया जाना है. अधिकांश अन्य ठोस उपकला कैंसर की तरह, जीनोमिक दृष्टिकोण एचसीसी 3 के साथ जुड़े aberrations में विविधता का पता चला है. अध्ययन का एक नंबर सेल प्रसार, सुर में शामिल संकेत दे रास्ते की एक किस्म की अव्यवस्थित गतिविधि से पता चला हैvival, भेदभाव, और angiogenesis 4. इसके अलावा, एचसीसी pathobiology में कैंसर स्टेम सेल की भूमिका 5 स्पष्ट किया जाना बना रहता है.
एचसीसी pathophysiology के एक सीमित समझ के साथ, एचसीसी के लिए प्रभावी उपचार का साधन भी अपेक्षाकृत सीमित रह गया है. पुनरावृत्ति आम है, हालांकि जिगर तक ही सीमित ट्यूमर के साथ प्रारंभिक अवस्था रोगियों, ट्यूमर पृथक या शल्य लकीर का उपयोग उपचारात्मक उपचार के लिए उम्मीदवार हैं. अधिक उन्नत रोग, कीमोथेरेपी और विकिरण के साथ रोगियों के लिए सीमित प्रभाव के हैं और उपशामक इरादे 6 के साथ रोग नियंत्रण के लिए मुख्य रूप से इस्तेमाल कर रहे हैं.
मानव एचसीसी के विवो प्रयोगात्मक मॉडल में उच्च गुणवत्ता के इस प्रकार उपन्यास चिकित्सकीय दृष्टिकोण के मूल्यांकन के लिए और साथ ही मानव एचसीसी के pathophysiology में बहुत आवश्यक बुनियादी अनुसंधान के लिए एक मूल्यवान मंच प्रदान करते हैं. सेल लाइनों या अत्यधिक परिभाषित माउस मॉडल का उपयोग, पंचायती राज के xenografts के साथ तुलना के रूप मेंउन्होंने यह भी 7,8 के भीतर और विभिन्न रोगियों के बीच मौजूद है कि विविधता पर कब्जा है, जबकि उच्च निष्ठा के साथ मानव रोग recapitulating में सक्षम हैं के बाद से immunodeficient चूहों में मैरी मानव ट्यूमर इस तरह के अध्ययन के लिए मूल्यवान उपकरण के रूप में उभरा है. यह अंत करने के लिए, हम immunodeficient चूहों में मानव एचसीसी xenografts स्थापित करने के तरीकों की एक किस्म विकसित की है. एचसीसी xenografts शामिल प्रकाशित अध्ययन के बहुमत इस उद्देश्य के लिए अच्छी तरह से स्थापित मानव एचसीसी सेल लाइनों का उपयोग का वर्णन करते हैं, हम तुरंत रोगियों से शल्य लकीर के बाद प्राप्त प्राथमिक एचसीसी नमूनों से xenografts उत्पन्न करने के लिए हमारे assays के अनुकूलन पर ध्यान केंद्रित किया है.
विभिन्न xenografting तकनीक विभिन्न अनुसंधान अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक हो सकता है. उदाहरण के लिए, ट्यूमर के टुकड़े से उत्पन्न चमड़े के नीचे xenografts, तेजी से उत्पन्न कर रहे हैं आसानी से निगरानी कर रहे हैं, और सुविधाजनक के साथ उपन्यास चिकित्सा विज्ञान के स्थानीय प्रशासन के लिए अधिक उपयुक्त हो सकता हैट्यूमर प्रतिक्रिया की निगरानी. Intrahepatic xenografts एचसीसी जीव विज्ञान में यकृत microenvironment की भूमिका से संबंधित अध्ययन के लिए और अधिक प्रासंगिक हो सकता है. ट्यूमर सेल निलंबन से उत्पन्न Xenografts ट्यूमर की शुरुआत सेल सबसेट की पहचान और लक्षण वर्णन के लिए या पूर्व xenotransplantation को ट्यूमर कोशिकाओं के इन विट्रो जोड़तोड़ में आवश्यकता के प्रयोगों के लिए आवश्यक हैं. हम इस प्रकार विकसित की है और प्राथमिक मानव एचसीसी नमूनों से निकाली गई कोशिका निलंबन या ट्यूमर के टुकड़े से चमड़े के नीचे या intrahepatic xenografts स्थापित करने के लिए निम्नलिखित प्रोटोकॉल पुष्टि की है.
Protocol
Representative Results
Discussion
हम प्रयोगात्मक प्रश्नों और assays की एक विस्तृत विविधता के लिए लागू किया जा सकता है कि immunodeficient चूहों में चमड़े के नीचे और intrahepatic मानव एचसीसी xenografts की स्थापना के लिए विभिन्न तकनीकों का वर्णन किया है. चमड़े के नीचे…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान चरण 1 clinician के वैज्ञानिक पुरस्कार (एजी) के एक कनाडाई संस्थानों और कैंसर रिसर्च सोसायटी (एजी) से एक ऑपरेटिंग अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. लेखक इस परियोजना के अपने समर्थन के लिए डॉ. जॉन डिक के लिए आभारी हैं.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco’s Mod. Eagle Medium/Ham’s F12 50/50 Mix x1(DMEM-F12) | WISENT Bioproducts | 319-075-CL | |
| Collagenase TypeIV | Sigma-Aldrich | C5138 | |
| Dispase II | Stemcell Technologies | 7923 | |
| Matrigel Matrix | Becton-Dickinson Biosciences | 354234 | |
| 10 % Buffered Formalin solution | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| 0.9 % Saline Solution (NaCl), sterile | House Brand | 1011-L8001 | |
| Betadine surgical scrub | Purdue Pharma | NPN 00158313 | |
| LORIS 10% PVP-I Solution | LERNA Pharma Inc. | 109-09 | |
| Buprenorphine (Temegesic) NR 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser | ||
| Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anesthetic | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| Tear-Gel | Novartis Pharmaceuticals | ||
| Frozen section compound | VWR | 95057-838 | |
| Cryomold, Tissue -Tek | Sakura Finetek | 4566 | |
| Precision Glide Needle 18G 1 ½ | Becton-Dickinson Biosciences | 305196 | |
| Precision Glide Needle 27G ½ | Becton-Dickinson Biosciences | 305109 | |
| Insulin syringe, 3/10 cc U-100, 29G½ | Becton-Dickinson Biosciences | 309301 | |
| Surgical blade No.10 | Feather Safety Razor Co. | 08-916-5A | |
| #5-0 Soft silk surgical suture, 3/8″ taper point needle | Syneture | VS-880 | |
| Transpore surgical tape | 3M Health care | 1577-1 | |
| Cotton applicator | Medpro | 018-425 | |
| Surgicel, oxidized regenerated cellulose | Ethicon | 1951 | |
| Cell strainer 100 μm nylon | Becton-Dickinson Biosciences | 352360 | |
| Magnification lighting with mobile base | Benson medical Industries Inc. | model: RLM-CLT-120V | |
| Petridish sterile 100×20 mm | Sarstedt | 821474 | |
| Tissue forcep, 1×2 teeth, 4-1/2″ | Almedic | A10-302 | |
| Adson dressing forcep 4-3/4″ | Almedic | A10-220 | |
| Eye dressing forcep, serrated, straight, 4″ | Almedic | A19-560 | |
| Hartman Hemostatic Forceps, curved, 3-1/2″ | Almedic | A12-142 | |
| Iris scissor, curved, 4-1/4″ | Almedic | A8-690 | |
| Iris scissor, straight, 4-1/2″ | Almedic | A8-684 | |
| Olsen-Hegan needle driver, 5-1/2″ | Almedic | A17-228 |
References
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