Para demonstrar imagem molecular do câncer MR com um pequeno peptídeo alvo MRI agente de contraste específico para proteínas do plasma coagulado no estroma tumoral em um modelo de câncer de próstata do rato.
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Artigo de método
MR Imagem Molecular do cancro da próstata com um pequeno Molecular CLT1 Peptide alvejado agente de contraste
Neste artigo
Resumo
Resumo
Matriz extracelular do tumor tem abundância de proteínas relacionadas com o cancro que podem ser utilizados como biomarcadores para imagiologia molecular do cancro. Neste trabalho, nós demonstramos imagem molecular do câncer MR eficaz com um pequeno peptídeo molecular complexa monoamida Gd-DOTA apontado como um agente de contraste MRI alvo específico para proteínas do plasma coagulado no estroma tumoral. Realizamos a experiência de avaliar a eficácia do agente para detecção não invasiva de tumor de próstata com ressonância magnética em um modelo ortotópico de câncer de próstata do rato PC-3. O agente de contraste de alvo era eficaz para produzir aumento significativo de contraste do tumor com uma dose baixa de 0,03 mmol de Gd / kg. O peptídeo alvo agente de contraste MRI é promissor para ressonância magnética molecular do tumor da próstata.
Introdução
Imagem eficaz de alvos moleculares relacionadas ao câncer é de grande importância para melhorar a precisão de antes detecção e diagnóstico do câncer. A ressonância magnética (RM) é uma modalidade de imagem clínica poderoso com alta resolução espacial e sem radiação de ionização 1. No entanto, nenhum agente de contraste alvo está disponível para imagem molecular do câncer MR clínica. Design inovador e desenvolvimento de agentes de contraste alvo de ressonância magnética avançaria muito a aplicação de imagem molecular do câncer MR. Foram feitos esforços significativos para desenvolver agentes de contraste para ressonância magnética direcionados dos biomarcad....
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Protocolo
Protocolo adaptado de um estudo prévio 11.
1. Conjugação de Gd-DOTA para CLT1 Peptide
- Usando a síntese de péptidos em fase sólida padrão, sintetizar CLT1 péptido (CGLIIQKNEC) a partir de aminoácidos protegidos com Fmoc numa resina de cloreto de 2-clorotritilo (1,0 mmol).
- Após a adição de aminoácido final, ciclizar o péptido linear em-resina com tálio (III), trifluoroacetato (1,09 g, 2,0 mmol, 2 equivalentes) em DMF (20 ml) a 0 ° C durante 2 horas.
- Em seguida, o conjugado de PEG e lisina sequencialmente para o N-terminal do péptido CLT1 (1,0 mmol) de resina por meio de reacção sequencial com Fmoc-N....
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Resultados
A Figura 1 descreve a síntese do agente de contraste alvo CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 e o esquema geral do experimento. CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 mostra muito maior relaxividade do que clínico Gd-DOTA (Tabela 1). A 1,5 T, T 1 relaxividade por gadolínio de CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 em PBS (pH 7,4) é de aproximadamente 3 vezes mais elevada do que a de Gd-DOTA 10. Imagiologia Maestro confirma a forte ligação específica de vermelho do Texas marcado CLT1 (CLT1-TR) de tumor .......
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Discussão
Etapas críticas
Seleção de Biomarcador adequada e Segmentação pequeno peptídeo
Para desenvolver com sucesso um agente de contraste com o tamanho pequeno alvo, dois pontos principais devem ser consideradas. Em primeiro lugar, é importante seleccionar os biomarcadores moleculares adequados, que são abundantemente presentes em tecidos doentes com pouca ou nenhuma presença nos tecidos normais. Nossa biomarcador relacionada ao câncer selecionados, proteí.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho é apoiado em parte pela American Heart Association GRA Spring 09 Postdoctoral Clube (09POST2250268) eo NIH R01 CA097465. Nós apreciamos muito Dr. Wen Li e Dr. Vikas Gulani para teste protocolo MRI e configuração, ea Sra. Yvonne Parker por sua assistência na implantação do tumor.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| REAGENTS | |||
| Fmoc aminoácidos protegidos | EMD Chemicals Inc | ||
| DOTA-tris(t-Bu) | TCI America | ||
| PyBOP, HOBt, HBTU | Nova Biochem | ||
| DIPEA, Trifluoroacetato de tálio(III), TIS | Sigma-Aldrich Corp. | ||
| Texas Red, éster succinimidílico, isômero único | Invitrogen | T20175 | |
| EQUIPMENTS | |||
| Agilent 1100 Sistema HPLC | Agilent | ||
| ZORBAX 300SB-C18 PrepHT coluna | Agilent | ||
| ICP-– S Optima 3100XL | Perkin-Elmer | ||
| MALDI-TOF espectrômetro de massa | Bruker | AutoflexTM Speed | |
| Maestro FLEX Sistema de imagem in vivo | Cambridge Research Instrumentation, Inc. | ||
| Scanner de ressonância magnética Biospec 7T | Bruker |
Referências
- Brown, M. A., Semelka, R. C. MRI Basic Principles and Applications. , 3rd, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, New Jersey. (2003).
- Artemov, D. Molecular magnetic resonance imaging with targeted contrast agents. J. Cell. Biochem. 90, 518-524 (2003).
- Kalber, T. L., Kamaly, N., et al.
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Reimpressões e permissões
