Un tégument Literie dosage à explorer génétiquement In Vitro Comment la germination des contrôles endosperme des semences dans Arabidopsis thaliana

Summary

Nous présentons la procédure pour assembler une literie de manteau essai de semences (ARA) de Arabidopsis thaliana graines. L'ARA s'est révélée être un outil puissant pour explorer génétiquement in vitro et la façon dont la germination des contrôles de l'endosperme de graines en dormance des graines et en réponse à des signaux lumineux. L'ARA est en principe applicable en vertu d'une situation où l'endosperme est soupçonné d'influencer la croissance embryonnaire.

Abstract

L'endosperme de Arabidopsis est constitué d'une seule couche de cellules entourant l'embryon mature et jouant un rôle essentiel pour empêcher la germination des graines ou dormants que des graines non dormantes irradiés par une impulsion de lumière rouge lointain (FR). Afin d'obtenir d'autres renseignements sur les mécanismes génétiques moléculaires qui sous-tendent l'activité répressive de germination exercée par l'endosperme, un test "graines de literie de manteau" (ARA) a été conçu. L'ARA est une procédure de dissection séparer physiquement les téguments et les embryons de graines, qui permet de surveiller la croissance des embryons sur une couche sous-jacente de téguments. Remarquablement, l'ARA reconstitue la germination activités répressives de l'enveloppe de la graine dans le contexte de la dormance des graines et de contrôle FR-dépendante de la germination des graines. Depuis l'ARA permet l'utilisation combinatoire de manteau de graines dormantes, dormantes et génétiquement modifiés et matériaux embryonnaires, les voies génétiques contrôlant la germination et spécifiquement operating dans l'endosperme et de l'embryon peut être disséqué. Ici, nous détaillons la procédure d'assembler un appareil respiratoire autonome.

Introduction

Dans les graines matures Arabidopsis, le tégument est composé de la testa, une couche externe de tissu mort d'origine maternelle, et l'endosperme, une seule couche de cellules de tissus vivants entourant directement l'embryon ^1. L'endosperme et l'embryon sont dérivés d'événements de fertilisation distinctes: l'endosperme est un tissu triploïde avec deux maternel et un génome paternel tandis que l'embryon est un tissu diploïde avec une mère et un génome paternel ^2.

La fonction principale traditionnellement attribué à l'endosperme est celui d'un tissu nutritif. Cependant....

Protocol

Une fois que l'ARA est assemblé, la croissance de l'embryon est surveillé pendant plusieurs jours. Par conséquent, avant la procédure de dissection des semences et de l'assemblage de l'appareil respiratoire, il faut stériliser les semences pour éviter les contaminations futures qui pourraient empêcher une évaluation adéquate de l'effet du matériau d'enveloppe de graine sur la croissance embryonnaire.

Une. Graine de stérilisation

1. Verser 50 à 60 ul de graines d'Arabidopsis matures et sèches, dans un tube de centrifugation de 1,5 ml et de préparer une solution d'éthanol à 70%.
2. Ajo....

Results

Des travaux antérieurs ont montré que les graines mutantes incapables de synthétiser GA ont été incapables de germer à la suite d'une forte accumulation de l'ABA dans les graines ^11,12. Cependant, l'incapacité à germer nécessite l'enveloppe de la graine depuis son enlèvement déclenche ¹³ de croissance embryonnaire. Ce fortement indiqué que l'endosperme de graines incapables de synthétiser GA publie ABA pour bloquer la croissance embryonnaire. Nous attendons donc graines manteaux incapables de synth.......

Discussion

Le dosage de la literie de tégument (ARA) décrite ici est en principe applicable à toute circonstance où la germination des graines d'Arabidopsis est bloqué (ou retardée) et où l'endosperme est soupçonné de mettre en œuvre cette arrestation. Ce dernier peut être attestés par enlever le tégument (testa et endosperme) et en observant que le produit de croissance embryonnaires rapides par rapport à celle observée lorsque les embryons sont entourés par l'enveloppe de la graine. La germination peut être .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Thermomixeur Comfort	Eppendorf AG	5355 000.011	Eppendorf AG, Hambourg, Allemagne
Vacusafe Comfort	INTEGRA Biosciences AG	158 310	Integra Biosciences AG, Zizers, Suisse
Plaque de boîte de Pétri (100 mm x 20 mm)	Greiner Bio-One GmbH	664 102	Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Allemagne
Murashige et Skoog	Sigma-Aldrich	M5524	Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA
MES	Sigma-Aldrich	M3671	Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA
Agar (gélose végétale)	Duchefa Biochemie B.V.	P1001	Duchefa Biochemie, Haarlem, Pays-Bas
Pince Dumont #5	Fine Science Tools GmbH	11251-10	Fine Science Tools GmbH, Heidelberg Allemagne
Aiguille de seringue	BD Micro-Fine	324827	BD, Franklin Lakes, NJ USA
Maille de nylon (SEFAR NYTEX)	SEFAR AG	03-50/31	Sefar AG, Heiden, Suisse
Chambre de croissance	CLF Plant Climatics	Percival I-30BLLX	CLF plant Climatics, Wertingen, Allemagne
Paclobutrazol	Sigma-Aldrich	46046	Sigma-Aldrich, St Louis, MO, États-Unis