Les charognards ont le potentiel de translocation infectieuses transmissibles prions de l'encéphalopathie spongiforme dans leurs excréments dans les zones exemptes de la maladie. Nous détail les méthodes utilisées pour déterminer si prions de la tremblante adaptée à la souris restent infectieux après le passage à travers le tractus digestif des corneilles d'Amérique (Corvus brachyrhynchos), une consommation courante des animaux morts.
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Article de méthode
Procédures d'identification des prions infectieux Après passage dans le système digestif d'une espèce aviaire
Dans cet article
Résumé
Résumé
Prion infectieux (PrP Res) matériau est probablement la cause d'accidents mortels, neurodégénérative encéphalopathie spongiforme transmissible (EST) maladies 1. Transmission de maladies de l'EST, telles que la maladie du dépérissement chronique (MDC), est présumé être d'un animal à 2,3 ainsi que de sources environnementales 4-6. Charognards et carnivores ont un potentiel de translocation matériau PrP Res par la consommation et l'excrétion de charogne CWD contaminés. Des travaux récents ont documenté le passage du matériau PrP Res par le système digestif des corneilles d'Amérique (Corvus brachyrhynchos), un trésor commun nord-américain 7.
Nous décrivons les procédures utilisées pour documenter le passage du matériau PrP Res par des corneilles d'Amérique. Crows ont été gavés avec RML-souche de tremblante adaptée à la souris et leurs excréments ont été recueillis 4 h après gavage. excréments de corneille ont ensuite été regroupées et injectées par voie intrapéritonéale àSouris C57BL / 6. Les souris ont été suivies quotidiennement jusqu'à ce qu'ils ont exprimé des signes cliniques de la tremblante de la souris et ont ensuite été euthanasiés. Souris asymptomatiques ont été suivis pendant 365 jours après inoculation. Western blot a été effectuée pour confirmer le statut de la maladie. Les résultats ont révélé que les prions infectieux restent après avoir traversé le système digestif des corbeaux et sont présents dans les fèces, ce qui provoque la maladie chez des souris d'essai.
Introduction
Les encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST) sont des maladies infectieuses mortelles neurodégénératives qui affectent la faune, les animaux domestiques et les humains. L'agent infectieux des EST de maladies semble être mal repliées ou isoformes PrP pathogènes (RES) des protéines prions 1. Les EST animales comprennent la maladie du dépérissement chronique (MDC) dans le cerf mulet (Odocoileus hemionus), le cerf de Virginie (Odocoileus virginianus), le wapiti (Cervus elaphus), et de l'orignal (Alces alces); la tremblante chez les ovins et les caprins; l'encéphalopathie spongiforme bovine ( ....
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Protocole
Notre protocole est adapté de celui que nous avons déjà publié 7. Toutes les procédures impliquant des animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de protection et d'utilisation des animaux de l'United States Department of Agriculture (USDA), Animal et Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services (WS), Centre national de la recherche faunique (CNRF).
Une. Corneille gavage
- Estimer le temps de passage de la «matière cérébrale pseudo 'à travers le tube digestif des corneilles d'Amérique.
- Mélangez 5 ml de cuit et des œufs brouillés ensemble avec un colorant bleu et gavage....
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Résultats
Les procédures utilisées démontrent que le système digestif des corbeaux n'élimine pas PrP Res infectivité 4 h après gavage oral de la tremblante homogénat de cerveau 7. Tous les vingt corbeaux qui ont été gavés avec du matériel PrP Res été transmises matériau PrP Res par les fèces de souris. Souris malades ont été identifiés par la manifestation de signes cliniques de la tremblante à la souris et la confirmation de la maladie a été complétée par une analyse Western blot.
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Discussion
Nous démontrons une procédure pour documenter le passage du matériau PrP Res par le système digestif des corneilles. Nous avons utilisé des méthodes conventionnelles pour déterminer si les corbeaux ont la capacité de translocation matériau PrP Res à des zones géographiques indemnes de la maladie. D'autres ont évalué la résistance de la PrP Res de ruminants et de rongeurs 19-21 22,23 sucs digestifs, les deux qui n'ont pas réussi à éliminer. Les futures applications de c.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Nous tenons à remercier S. Werner pour fournir les corbeaux utilisées dans cette étude et l'USDA, APHIS, WS, CNRF personnel de soins aux animaux pour les soins et la surveillance des animaux. La mention ou utilisation d'un produit n'implique pas l'approbation de l'USDA. Le financement de cette étude a été fourni par l'USDA, APHIS, les Services vétérinaires.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| RML Souche Chandler souris adaptée à la tremblante | Rocky Mountain Laboratories | ||
| RC57BL/6 souris | Hilltop Lab Animals Corbeaux | ||
| américains capturés | à l’état sauvage | ||
| Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
| Saline tamponnée au phosphate | Invitrogen | 70011-044 | |
| Sonicator | Misonix | ||
| Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
| Tampon de chargement | Invitrogen | NP0007 et 0009 | |
| Bis-tris SDS PAGE 12 % gel | Invitrogen | NP0342 | |
| Immobilon Membrane PVDF | Millipore | 1SEQ00010 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
| Bullet mélangeur homogénéisateur | Braintree Scientific | BBX24B | |
| 2,3 mm billes de zircone/silice | BioSpec Products | 11079125Z | |
| Bar224 anticorps monoclonal anti-PrP | Cayman Chemical | 10009035 | |
| Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
| substrat chimiluminescent | Millipore | WBKLS0500 | |
| G-box système de documentation sur gel | Syngene |
Références
- Prusiner, S. B. Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie. Science. 216 (4542), 136-144 (1982).
- Miller, M. W., Williams, E. S., et al. Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming. Journal o....
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Réimpressions et autorisations
