Procédures d'identification des prions infectieux Après passage dans le système digestif d'une espèce aviaire
Summary
Les charognards ont le potentiel de translocation infectieuses transmissibles prions de l'encéphalopathie spongiforme dans leurs excréments dans les zones exemptes de la maladie. Nous détail les méthodes utilisées pour déterminer si prions de la tremblante adaptée à la souris restent infectieux après le passage à travers le tractus digestif des corneilles d'Amérique (Corvus brachyrhynchos), une consommation courante des animaux morts.
Abstract
Prion infectieux (PrP Res) matériau est probablement la cause d'accidents mortels, neurodégénérative encéphalopathie spongiforme transmissible (EST) maladies 1. Transmission de maladies de l'EST, telles que la maladie du dépérissement chronique (MDC), est présumé être d'un animal à 2,3 ainsi que de sources environnementales 4-6. Charognards et carnivores ont un potentiel de translocation matériau PrP Res par la consommation et l'excrétion de charogne CWD contaminés. Des travaux récents ont documenté le passage du matériau PrP Res par le système digestif des corneilles d'Amérique (Corvus brachyrhynchos), un trésor commun nord-américain 7.
Nous décrivons les procédures utilisées pour documenter le passage du matériau PrP Res par des corneilles d'Amérique. Crows ont été gavés avec RML-souche de tremblante adaptée à la souris et leurs excréments ont été recueillis 4 h après gavage. excréments de corneille ont ensuite été regroupées et injectées par voie intrapéritonéale àSouris C57BL / 6. Les souris ont été suivies quotidiennement jusqu'à ce qu'ils ont exprimé des signes cliniques de la tremblante de la souris et ont ensuite été euthanasiés. Souris asymptomatiques ont été suivis pendant 365 jours après inoculation. Western blot a été effectuée pour confirmer le statut de la maladie. Les résultats ont révélé que les prions infectieux restent après avoir traversé le système digestif des corbeaux et sont présents dans les fèces, ce qui provoque la maladie chez des souris d'essai.
Introduction
Les encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST) sont des maladies infectieuses mortelles neurodégénératives qui affectent la faune, les animaux domestiques et les humains. L'agent infectieux des EST de maladies semble être mal repliées ou isoformes PrP pathogènes (RES) des protéines prions 1. Les EST animales comprennent la maladie du dépérissement chronique (MDC) dans le cerf mulet (Odocoileus hemionus), le cerf de Virginie (Odocoileus virginianus), le wapiti (Cervus elaphus), et de l'orignal (Alces alces); la tremblante chez les ovins et les caprins; l'encéphalopathie spongiforme bovine ( ESB) chez les bovins domestiques; transmissible encéphalopathie du vison en vison d'élevage, l'encéphalopathie spongiforme féline chez les chats; exotique ongulés encéphalopathie spongiforme dans le zoo exotique rumine de la famille des bovidés et l'encéphalopathie spongiforme bovine chez les primates non humains 8. La maladie EST humaine unique, variant de la maladie de Creutzfeldt-Jakob, est rare et la pensée d'être acquis par la consommation de la PrP Res-contaminalimentaire ATED 9. De même, l'ESB peut infecter les humains si bœuf contaminé est consommé 10. De toutes les maladies de l'EST, tremblante et la MDC sont les deux seuls les épidémies et les sources d'infection autonomes sont présumés être d'un animal à 2,3,11 ainsi que de sources environnementales 4-6. La recherche suggère que la plupart des maladies de l'EST nécessitent des périodes d'incubation prolongées notables d'événements d'exposition naturelles de matières PrP Res à la manifestation de signes cliniques 2-4,6,8 et les barrières d'espèces apparentes minimiser, mais n'éliminent pas le risque de transmission inter-espèces 12-14 .
Identification des mécanismes de propagation des prions infectieux (PrP Res) de matériau est extrêmement important pour répondre à des questions sur la façon dont les EST se déplacent à travers le paysage. Des études expérimentales ont suggéré que les insectes 15,16, la volaille et les porcs 17, et la corneille d'Amérique (Corvus brachyrhynchos) 7,18 sont des porteurs passifs ou disperseurs de matériel PrP Res. Passage de matériel PrP Res par le système digestif des corneilles a été récemment documentée, ce qui démontre le rôle qu'ils peuvent jouer dans la dispersion des maladies de l'EST 7. Ces résultats rendent plausible que les corneilles, un trésor, pourraient rencontrer, consomment, et le transport du matériel infectieux par les fèces dépôt, dans les zones exemptes de la maladie.
Les procédures que nous démontrons ici ont été utilisés pour documenter le passage du matériau PrP Res par le système de digestion des corbeaux et facilitera grandement l'application de ces méthodes à un autre fixateur et modèles carnivore espèces spécifiques dans la recherche de futurs correspondants. Dans cette étude, les méthodes classiques ont été utilisés pour étudier des moyens non conventionnels de la traite matériau PrP Res, qui pourrait contribuer à la propagation et l'impact global de la matière PrP Res.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous démontrons une procédure pour documenter le passage du matériau PrP Res par le système digestif des corneilles. Nous avons utilisé des méthodes conventionnelles pour déterminer si les corbeaux ont la capacité de translocation matériau PrP Res à des zones géographiques indemnes de la maladie. D'autres ont évalué la résistance de la PrP Res de ruminants et de rongeurs 19-21 22,23 sucs digestifs, les deux qui n'ont pas réussi à éliminer. Les futures …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier S. Werner pour fournir les corbeaux utilisées dans cette étude et l'USDA, APHIS, WS, CNRF personnel de soins aux animaux pour les soins et la surveillance des animaux. La mention ou utilisation d'un produit n'implique pas l'approbation de l'USDA. Le financement de cette étude a été fourni par l'USDA, APHIS, les Services vétérinaires.
Materials
| RML Chandler strain mouse-adapted scrapie | Rocky Mountain Laboratories | ||
| RC57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals | ||
| American crows | wild captured | ||
| Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
| Phosphate buffered Saline | Invitrogen | 70011-044 | |
| Sonicator | Misonix | ||
| Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
| Loading buffer | Invitrogen | NP0007 and 0009 | |
| Bis-tris SDS PAGE 12% gel | Invitrogen | NP0342 | |
| Immobilon PVDF membrane | Millipore | 1SEQ00010 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
| Bullet blender homogenizer | Braintree Scientific | BBX24B | |
| 2.3 mm Zirconia/silica beads | BioSpec Products | 11079125Z | |
| Bar224 anti-PrP monoclonal antibody | Cayman Chemical | 10009035 | |
| Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
| chemiluminescent substrate | Millipore | WBKLS0500 | |
| G-box gel documentation system | Syngene |
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