鳥類の消化器系を通過した後の感染プリオンを識別するための手順
Summary
スカベンジャーは無病領域に糞中の感染伝達性海綿状脳症プリオンを移動させる可能性を持っている。私たちはマウス適応スクレイピープリオンはアメリカのカラスの消化管（ アメリカガラス ）、死んだ動物の共通の消費者も通過した後、感染のままかどうかを判断するために使用される詳細な方法。
Abstract
感染性プリオン（PRP RES）材料は、おそらく致命的な神経変性伝達性 海綿状脳症（TSE）の病気1の原因である。例えば、慢性消耗病（CWD）などのTSE疾患の送信は、動物から動物への2,3並びに環境源4-6からであると推定される。スカベンジャーと肉食動物は、CWDに汚染された死肉の摂取と排泄を通してプリオン解像度材料を移動させる可能性を持っている。最近の研究はアメリカのカラスの消化器系（ アメリカガラス ）、一般的な北アメリカのスカベンジャー7を通してプリオン解像度素材の通過を文書化しました。
我々はアメリカのカラスを通じてプリオン解像度素材の通過を記録するために使用される手順について説明します。カラスはRML – ひずみマウス適応スクレイピーで強制経口投与し、それらの糞は4時間後に強制経口投与を収集した。カラスの糞をし、その後プールし、腹腔内に注射したC57BL / 6マウス。彼らはマウススクレイピーの臨床徴候を表明し、その後、安楽死させたまではマウスを毎日モニターした。無症候性マウスは365日後に接種するまで監視した。ウェスタンブロット解析は、疾患状態を確認するために行った。結果は、プリオンがカラスの消化器系を通って移動した後に感染性のままであり、試験マウスにおいて疾患を引き起こす、糞便中に存在することが明らかになった。
Introduction
伝達性海綿状脳症（TSE）は、野生生物に影響を与える致命的な感染性の神経変性疾患、家畜、そしてヒトである。 TSE疾患の感染性病原体はプリオンタンパク質1のミスフォールドまたは病原性アイソフォーム（PRP RES）であるように思われる。ヒツジおよびヤギにおけるスクレイピー;、牛海綿状脳症（動物TSE疾患はラバ鹿（ ミュールジカ ）、オジロジカ（ オジロジカ ）、エルク（ アカシカ ）、およびムース（ ヘラジカ ）の慢性消耗病（CWD）が含まれ国内の牛のBSE）;養殖ミンクにおける伝染性ミンク脳症、ネコのネコ海綿状脳症、ヒト以外の霊長類8にし、海綿状脳症、エキゾチックな動物園のエキゾチックな有蹄動物海綿状脳症は、家族ウシ科の反芻。単一のヒトTSE病、変異型クロイツフェルト·ヤコブ病は、稀で、 解像度のPrP-contaminを消費することによって取得されると考えられているated食品9。汚染された牛肉が10消費された場合も、BSEはヒトに感染することができます。すべてのTSE疾患のうち、スクレイピーおよびCWDは、動物から動物2,3,11にだけでなく、環境源4-6からのものであると推定される自律的な流行と感染のソースでのみ2である。研究では、ほとんどのTSE疾患は臨床徴候が発現する前にプリオン解像度素材の自然曝露イベントからの注目すべき拡張潜伏期間が必要2-4,6,8、見かけ種の壁を最小限に、しかし、種間伝播12月14日の可能性を排除しないことを示唆している。
感染性プリオン（PRP RES）材料の普及のためのメカニズムを識別することはTSE疾患が風景を越えて移動する方法についての質問に答えるために非常に重要です。実験的研究は、昆虫15,16、家禽および豚17、およびアメリカのカラス（ カラスのブラチことが示唆されているhyrhynchos）7,18は、PrP解像度材料の受動的なキャリアまたは分散機である。カラスの消化器系を通じてプリオンのRES物質の通過は最近、TSE疾患7の分散でプレイしてもよい役割を示す、文書化されています。これらの結果は、カラス、スカベンジャーは、遭遇する可能性があること、それがもっともらしい作る消費し、無病領域に、糞の堆積により感染性物質を輸送する。
我々はここに証明する手続きは、カラスの消化システムを介してプリオンのRES物質の通過を記録するために使用されたと大いに関連する今後の研究の他のスカベンジャーと肉食種特異的なモデルに、これらの方法の適用を容易にします。本研究では、従来の方法は、プリオン解像度素材の広がりと全体的な重荷に貢献できるプリオン解像度素材を、人身売買の型破りな手段を調査するために使用された。
Protocol
Representative Results
Discussion
私たちは、カラスの消化器系を通じてプリオンのRES物質の通過を文書化するための手順を示しています。私たちは、カラスが無病の地域へのプリオン解像度素材を転位する能力を持っているかどうかを判断するために、従来の方法を使用していました。他はそれを排除することができなかった、どちらも19〜21と齧歯類22,23消化液を反芻するプリオン解像度…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、動物のケアとモニタリングのために、S.、本研究と米国農務省で使用されるカラスを提供するためのヴェルナー、APHIS、WS、NWRC動物管理スタッフに感謝したいと思います。言及または製品を使用するには、米国農務省の承認を意味するものではありません。この研究のための資金は、米国農務省、APHIS、獣医サービスによって提供された。
Materials
| RML Chandler strain mouse-adapted scrapie | Rocky Mountain Laboratories | ||
| RC57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals | ||
| American crows | wild captured | ||
| Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
| Phosphate buffered Saline | Invitrogen | 70011-044 | |
| Sonicator | Misonix | ||
| Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
| Loading buffer | Invitrogen | NP0007 and 0009 | |
| Bis-tris SDS PAGE 12% gel | Invitrogen | NP0342 | |
| Immobilon PVDF membrane | Millipore | 1SEQ00010 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
| Bullet blender homogenizer | Braintree Scientific | BBX24B | |
| 2.3 mm Zirconia/silica beads | BioSpec Products | 11079125Z | |
| Bar224 anti-PrP monoclonal antibody | Cayman Chemical | 10009035 | |
| Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
| chemiluminescent substrate | Millipore | WBKLS0500 | |
| G-box gel documentation system | Syngene |
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