एक एवियन प्रजातियों की पाचन प्रणाली के माध्यम से पारित होने के बाद संक्रामक prions की पहचान के लिए प्रक्रिया

Summary

सफाई कर्मियों के रोग से मुक्त क्षेत्रों के लिए उनके मल में संक्रामक संक्रामक spongiform encephalopathy prions सरकाना करने की क्षमता है. हम माउस अनुकूलित scrapie prions अमेरिकी कौवे की पाचन तंत्र (Corvus brachyrhynchos), मरे हुए जानवरों का एक आम उपभोक्ता हालांकि पारित होने के बाद संक्रामक रहते हैं, तो यह निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल विस्तार तरीकों.

Abstract

संक्रामक prion (पीआरपी ^{को छोड़कर)} सामग्री संभावना घातक, neurodegenerative संक्रामक spongiform encephalopathy (त्से) रोग ¹ का कारण है. पुरानी बर्बाद रोग (CWD) के रूप में त्से रोगों के संचरण, पशु ^2,3 करने के लिए पशु से और साथ ही पर्यावरण सूत्रों ^4-6 से माना जाता है. सफाई कर्मियों और मांसाहारी खपत और CWD दूषित लाश के उत्सर्जन के माध्यम से पीआरपी ^रिस सामग्री सरकाना करने की क्षमता है. हाल ही में काम अमेरिकी कौवे की पाचन तंत्र (Corvus brachyrhynchos), एक आम उत्तरी अमेरिकी मेहतर ⁷ के माध्यम से पीआरपी ^रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ तैयार किया है.

हम अमेरिकी कौवे के माध्यम से पीआरपी ^रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ के लिए प्रयोग किया जाता प्रक्रियाओं का वर्णन. कौवे आरएमएल तनाव माउस अनुकूलित scrapie साथ gavaged थे और उनके मल 4 घंटा पद नलिका – पोषण एकत्र किए गए थे. क्रो मल में तो जमा और intraperitoneally थे इंजेक्शनC57BL 6 / चूहों. वे माउस scrapie के नैदानिक ​​लक्षण व्यक्त की और उसके बाद euthanized थे जब तक चूहे दैनिक निगरानी की गई. स्पर्शोन्मुख चूहों 365 दिनों के बाद टीका तक निगरानी की गई. पश्चिमी धब्बा विश्लेषण रोग की स्थिति की पुष्टि करने के लिए आयोजित किया गया था. परिणाम prions परीक्षण चूहों में रोग के कारण, कौवे के पाचन तंत्र के माध्यम से यात्रा के बाद संक्रामक रहते हैं और मल में मौजूद हैं कि पता चला.

Introduction

संक्रामक spongiform encephalopathies (त्से) वन्य जीवन को प्रभावित करने वाले घातक संक्रामक neurodegenerative विकारों, घरेलू पशुओं, और मनुष्यों हैं. त्से रोगों के संक्रामक एजेंट prion प्रोटीन ¹ की misfolded या रोगजनक isoforms (पीआरपी ^{को छोड़कर)} प्रतीत होता है. भेड़ और बकरियों में scrapie; गोजातीय spongiform encephalopathy (पशु त्से रोगों खच्चर हिरण (Odocoileus hemionus), सफेद पूंछ हिरण (Odocoileus virginianus), एल्क (सर्वस elaphus), और मूस (Alces alces) में पुरानी बर्बाद रोग (CWD) शामिल घरेलू पशुओं में बीएसई); farmed मिंक में संक्रामक मिंक मस्तिष्क विकृति, बिल्लियों में बिल्ली के समान spongiform encephalopathy, nonhuman primates ⁸ में और spongiform encephalopathy, विदेशी चिड़ियाघर में विदेशी ungulate spongiform encephalopathy परिवार Bovidae की ruminates. एकल मानव त्से रोग, संस्करण Creutzfeldt-Jakob रोग, दुर्लभ और पीआरपी ^{रेस-contamin} लेने द्वारा अधिग्रहीत होने लगा हैपैदा खाद्य ^9. दूषित गोमांस ¹⁰ सेवन किया जाता है इसी प्रकार, यदि बीएसई मनुष्यों को संक्रमित कर सकते हैं. सभी त्से रोगों की, scrapie और CWD जानवर से जानवर ^2,3,11 करने के साथ ही पर्यावरण सूत्रों ^4-6 से माना जाता है आत्मनिर्भर महामारी और संक्रमण के लिए स्रोतों के साथ केवल दो हैं. रिसर्च सबसे त्से रोगों नैदानिक ​​लक्षण की अभिव्यक्ति के लिए पीआरपी ^रिस सामग्री की प्राकृतिक जोखिम की घटनाओं से उल्लेखनीय विस्तारित ऊष्मायन अवधि की आवश्यकता ^2-4,6,8 और स्पष्ट प्रजातियों बाधाओं को कम, लेकिन, interspecies संचरण ^12-14 के लिए क्षमता को खत्म नहीं पता चलता है कि .

संक्रामक prion (पीआरपी ^{को छोड़कर)} सामग्री के प्रसार के लिए तंत्र की पहचान त्से रोगों परिदृश्य के पार ले जाने के बारे में सवाल का जवाब देने के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है. प्रायोगिक जांच ^15,16, मुर्गी पालन और सूअर ^17, और अमेरिकी कौवे (Corvus Brac कीड़े सुझाव दिया है किhyrhynchos) ^7,18 पीआरपी ^रिस सामग्री के निष्क्रिय वाहक या dispersers हैं. कौवे की पाचन तंत्र के माध्यम से पीआरपी ^रिस सामग्री के पारित होने हाल ही में वे त्से रोगों ⁷ के प्रसार में खेल सकते भूमिका का प्रदर्शन, प्रलेखित किया गया है. ये परिणाम, कौवे, एक मेहतर, मुठभेड़ सकता है कि यह प्रशंसनीय बनाने का उपभोग, और रोग से मुक्त क्षेत्रों के लिए, मल बयान के माध्यम से संक्रामक सामग्री के परिवहन.

हम यहाँ का प्रदर्शन प्रक्रियाओं कौवे की पाचन प्रणाली के माध्यम से पीआरपी ^रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ के लिए इस्तेमाल किया गया है और बहुत से संबंधित भविष्य के अनुसंधान में अन्य मेहतर और मांसभक्षी प्रजाति विशेष मॉडलों के लिए इन तरीकों के आवेदन की सुविधा होगी. इस अध्ययन में पारंपरिक तरीकों पीआरपी ^रिस सामग्री के प्रसार और समग्र बोझ के लिए योगदान कर सकता है जो पीआरपी ^रिस सामग्री, तस्करी के एक अपरंपरागत साधन जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया.

Protocol

हमारे प्रोटोकॉल हम पहले 7 प्रकाशित एक से अनुकूलित है. जानवरों को शामिल सभी प्रक्रियाओं संयुक्त राज्य अमेरिका के कृषि विभाग (यूएसडीए), पशु और पादप स्वास्थ्य निरीक्षण सेवा (APHIS), वन्यजीव सेवा (था), राष्ट?…

Representative Results

इस्तेमाल किया प्रक्रियाओं कौवे की पाचन तंत्र scrapie मस्तिष्क homogenate 7 की मौखिक नलिका – पोषण के बाद पीआरपी रिस संक्रामकता 4 घंटा समाप्त नहीं करता है कि प्रदर्शित करता है. पीआरपी रिस सामग्री के साथ gav…

Discussion

हम कौवे की पाचन तंत्र के माध्यम से पीआरपी ^रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ के लिए एक प्रक्रिया का प्रदर्शन. हम कौवे रोग मुक्त भौगोलिक क्षेत्रों के लिए पीआरपी ^रिस सामग्री सरकाना करने की क?…

Materials

RML Chandler strain mouse-adapted scrapie	Rocky Mountain Laboratories
RC57BL/6 mice	Hilltop Lab Animals
American crows	wild captured
Pen/Strep	Invitrogen	15140-122
Phosphate buffered Saline	Invitrogen	70011-044
Sonicator	Misonix
Proteinase-K solution	Roche	3115887001
Loading buffer	Invitrogen	NP0007 and 0009
Bis-tris SDS PAGE 12% gel	Invitrogen	NP0342
Immobilon PVDF membrane	Millipore	1SEQ00010
Tween 20	Sigma Aldrich	P2287
Bullet blender homogenizer	Braintree Scientific	BBX24B
2.3 mm Zirconia/silica beads	BioSpec Products	11079125Z
Bar224 anti-PrP monoclonal antibody	Cayman Chemical	10009035
Superblock	Thermo Scientific	37517
chemiluminescent substrate	Millipore	WBKLS0500
G-box gel documentation system	Syngene