Intralymphatic Immunterapi og vaksinasjons i Mus

Summary

Profylaktisk og terapeutisk vaksinasjon ofte ikke klarer å stimulere sterke immunreaksjoner på grunn av uken drenering av vaksinen til lymfeknuter og dermed dårlig involvering av immunceller. Ved direkte tilførsel av vaksinen til lymfeknuter, såkalt intralymphatic injeksjon, kan vaksineeffekt forbedres være sterkt og vaksinedoser kan reduseres.

Abstract

Vaksiner er vanligvis injiseres subkutant eller intramuskulært for stimulering av immunresponser. Suksessen til dette krever effektiv drenering av vaksine til lymfeknuter der antigenpresenterende celler kan samhandle med lymfocytter for generering av de ettersøkte immunresponser. Styrken og den type immunresponser induseres også avhenge av tettheten eller frekvensen av vekselvirkninger, så vel som mikromiljøet, spesielt innholdet av cytokiner. Som bare en liten brøkdel av perifert vaksiner når lymfeknutene, ble vaksinasjoner av mus og mennesker utført ved direkte injeksjon av vaksine i lyske lymfeknuter, dvs. intralymphatic injeksjon. Hos mennesker er prosedyren veiledet av ultralyd. Hos mus er en liten (5-10 mm) innsnitt gjort i det inguinale region av anesteserte dyr, lymfeknute er lokalisert og immobilisert med tang, og et volum på 10-20 pl av vaksine injiseres under visuell kontroll.Snittet er stengt med en enkelt søm ved hjelp av kirurgiske sting. Mus ble vaksinert med plasmid-DNA, RNA, peptid, protein, partikler og bakterier, så vel som hjelpestoffer, og sterk forbedring av immunresponser mot alle typer vaksiner ble observert. Den intralymphatic metode for vaksinasjon er spesielt aktuelt i situasjoner hvor konvensjonell vaksinasjon produserer tilstrekkelig immunitet eller hvor mengden av tilgjengelig vaksine er begrenset.

Introduction

Vaksiner er vanligvis injiseres subkutant eller intramuskulært for stimulering av immunresponser. Suksessen med denne fremgangsmåten krever effektiv drenering av vaksine til lymfeknuter hvor antigen-presenterende celler kan kommunisere med lymfocytter for generering av T-og B-celle responser. I tillegg, styrken og typen av immunresponser induseres også avhenge av tettheten eller hyppigheten av slike vekselvirkninger, så vel som mikromiljøet i seg selv, spesielt innholdet av cytokiner. Ettersom bare en liten brøkdel av en vaksine injiseres inn i en perifert vev når en lymfeknute, vaksiner for mus og mennesker ved direkte injeksjon av vaksinen i lymfeknuter, i stedet ble immunresponser er generert, er blitt utført. Hos mennesker er prosedyren styrt av ultralyd, en prosedyre som også benyttes for administrering av avbildningsmidler for visualisering og diagnostisering i lymfesystemet. Hos mus er prosedyren invasiv. Her en liten (5-10 mm) incision er laget i det inguinale region av anesteserte dyr ^1, er lymfeknute lokalisert og immobilisert med tang, og et volum på 10-20 pl av vaksine injiseres under visuell kontroll, 10 pl brukes for første injeksjoner, og i unge mus med små lymfeknuter, mens 20 pl kan injiseres i lymfeknuter av eldre eller allerede primede mus, som har større lymfeknuter. Snittet kan lukkes med en enkelt søm ved hjelp av kirurgiske sting. Ved denne metoden, er mus vaksinert med plasmid-DNA ^2,3, messenger RNA ^{til 4, 1,3,5,6} peptid, protein ^7-10, partikler ^{11, 12} bakterier, så vel som hjelpestoffer ^7,13, og sterk forbedring av immun respons mot alle typer vaksiner har blitt observert. Den intralymphatic metode for vaksinasjon er spesielt aktuelt i situasjoner hvor konvensjonell vaksinasjon produserer tilstrekkelig immunitet eller hvor mengden av tilgjengelig vaksine er begrenset eller very kostbart. Hos menneske har intralymphatic metode for immunisering blitt brukt til allergi pasienter ^14,15 eller til pasienter med kreft ^16-21. Selv om den nåværende oppfatning er at den intralymphatic metoden er mer omfattende enn andre injiserbare metoder slik som intramuskulære og subkutane injeksjoner, er den smerteopplevelse som ikke er høyere enn etter en venepunksjon ^15. Det er forventet at intralymphatic vaksinering vil bli et alternativ eller supplement til andre metoder for profylaktisk og spesielt terapeutiske vaksiner. Denne artikkelen beskriver i detalj hvordan prosedyren ifølge intralymphatic vaksinering blir utført i mus. Alle prosedyrer er beskrevet, ble godkjent av Cantonal Veterinær Agency of Zurich og utført i henhold sveitsiske føderale retningslinjer og direktiver om vern av dyr som brukes til vitenskapelige formål.

Protocol

En. Anestesi av Mus Forbered bedøvelse ved å blande ketamin (dissosiativ bedøvelse) og xylazin (beroligende og smertestillende) i saltvann. Konsentrasjonene av ketamin og xylazin i den endelige oppløsning er 12,5 og 2 mg / ml, henholdsvis. Injiser anestetika til mus ved intraperitoneal administrering ved hjelp av en sprøyte med en 25 til 30 G-nål. Bruk 0,1 ml/10 g kroppsvekt. Påfør en ophthalmica salve til muse øyne for å hindre uttørking av hornhinner. Forsikrer at mu…

Representative Results

Fremgangsmåten ifølge intralymphatic injeksjoner i mus, til tross for det kirurgiske natur, er likefrem og relativt raskt. En trenet person kan utføre prosedyren i 3-4 min. Snittet som er lukket med en maske helbreder vanligvis i løpet av to dager (Figur 1) Intralymphatic vaksinasjon eller immunisering er utført med mRNA, plasmid DNA, peptider, proteiner, virus og bakterier. Figur 2 illustrerer antistoffproduksjon etter immunisering med protein fosfolip…

Discussion

Intralymphatic immunisering og immunterapi har vist seg å være egnet for stimuleringen av både antistoff-respons og T-celleresponser. Som vist i denne video-artikkelen, er den intralymphatic fremgangsmåte for vaksinering en rask og enkel metode for å stimulere sterke immunresponser i mus. En trenet kirurg kan utføre prosedyren under 3-4 min. Økten kan også deles mellom to kirurger der man vanligvis gjør anestesi og suturering og andre kirurgen gjør for snittet og injeksjon. Effektiviteten av prosedyren er mer …

Materials

Ketamine (Ketasol-100)	Graeub AG, Switzerland		Anesthetics
Xylazine (Rompun)	Bayer, Germany		Anesthetics
Viscotears Eye-Gel	Novartis, Switzerland		To keep eyes from drying out during anesthesia.
BD Micro-Fine 0.5 ml	BD Medical, France		29 G Insulin syringes with permanently attached needles
6-0 Dermalon Monofilament nylon	Covidien, MA, USA		For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue)
Curved forceps, 4.5 inch	Polymed, Switzerland		For incision and holding of lymph node
Straight surgical scissors, 4.5 inch	Polymed, Switzerland		For incision
Needle holder, 5.5 inch	Polymed, Switzerland		To close incision with suture