Здесь мы опишем метод для быстрого и точного измерения летно у дрозофилы, что позволяет высокопроизводительного скрининга.
Drosophila оказалась полезной моделью система для анализа поведения, в том числе полет. Первоначальный тестер полета участие понижение летит в масло покрытием мерный цилиндр, высота посадки условии меру летно путем оценки, как далеко летит упадет перед производить достаточный толчок, чтобы вступить в контакт со стенкой цилиндра. Здесь мы опишем обновленную версию тестера полета с четырьмя основными улучшений. Во-первых, мы добавили "в раскрывающемся трубку", чтобы гарантировать, что все мухи введите полета цилиндр на аналогичной скорости между испытаниями, устраняя изменчивость между пользователями. Во-вторых, мы заменили масло покрытие со съемными пластиковыми листами, покрытыми в Tangle-Trap, Клей, предназначенный для захвата живых насекомых. В-третьих, мы используем более длительный цилиндр для обеспечения более точную дискриминацию способности полета. В-четвертых, мы используем цифровую камеру и обработки изображений для автоматизации счет производительности полета. Эти усовершенствования позволяют рэпID, количественная оценка поведения полета, полезно для больших наборов данных и крупномасштабных генетических экранов.
Дрозофилы уже давно используется для изучения генетической основы поведения 1, и исследователи разработали ряд способов анализа различных типов поведения 2-6. Мухи были особенно полезны в предоставлении полезные модели нервно-мышечных расстройств 7. Общий анализ используется для изучения поведения двигательную является летно-технические характеристики. Оригинальный тестер полет полезны для определения летных дефектных мутантов и для количественной оценки полета способности 1, но у него есть несколько недостатков, которые ограничивают его применение для экранов высокой пропускной: использование цилиндров покрытых нефтью является грязным и громоздким, некоторые функции, такие как длина цилиндра и введение летит в трубке с переменной силы уменьшить количественный точность и трудно восстановить живые мух от тестера. Чтобы преодолеть эти ограничения, мы изменили тестер полета включить ряд усовершенствований. Мы добавили "падение Тубыть "ввести мух для устранения изменчивости между экспериментами и пользователей. Мы используем съемные акриловые листы, покрытые клеем, что облегчает очистку и восстановление отдельных мух. Мы увеличили продолжительность полета трубки улучшить количественную точность и надежность. Наконец , мы используем цифровую камеру и обработки изображений для вычисления высоты посадки мух. Мы считаем, что эти улучшения будут полезны для любой лаборатории, заинтересованных в проведении широкомасштабных генетических экраны для дефектов в летных.
Используя методы, описанные здесь, мы смогли быстро оценить летные характеристики большого числа Drosophila мутантов, обеспечивая большую эффективность, чем это было возможно ранее. Для наших экспериментов мы регулярно отделить самцов и самок и поднять их при низкой плотности (менее 20…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Национальными Институтами Здоровья предоставляет F32 NS078958 (DTB) и R01 AG033620 (BG).
Putty knife | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
Pine back band moulding ( x2 ) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.com |
Furring Strip Board | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
Tangle Trap Insect Trap Coating | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
Laptop Computer | Apple | _ | www.apple.com/mac/ |
mineral oil | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
white poster board | Staples | 247403 | www.staples.com |
polystyrene weighing dish | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
ImageJ Software | National Institutes of Health | _ | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
digital camera | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
fine forceps | Fine Science Tools | _ | www.finescience.com |
polycarbonate cylinder (drop tube) | mcMaster-Carr | 8585K62 | www.mcmaster.com |
flight cylinder (acrylic) | mcMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
polycarbonate sheets | mcMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
ring stand (x2) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
ring support | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
Three-prong extension clamps (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
funnel | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
chain clamps (x2) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
glass vials | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |