אחד היתרונות העיקריים בעבודה עם דגי זברה (דניו rerio) הוא כי הגנטיקה שלהם ניתן לתמרן בקלות על ידי microinjection של עוברים בשלב מוקדם. באמצעות טכניקה זו, פתרונות המכילים חומר גנטי או מבנים נוקאאוט מועברים לתוך blastomeres: התאים העובריים יושבים על החלמון של הביצית מופרית לאחרונה. משלוח לתוך הציטופלסמה מושגת באמצעות הזרקה ישירה לתוך blastomere, או באמצעות תנועות ציטופלסמיות טבעיות המתרחשות לאחר פתרון מוזרק לתוך החלמון. מניפולציות גנטיות מוצלחות בדרך כלל ואחריו כימות של פנוטיפים עובריים על מנת להדגיש את המנגנונים הגנטיים של התפתחות.
וידאו זה יספק מבוא לביצוע מיקרו-טג’ים בעוברי דגי זברה. הדיון מתחיל בסקירה של הכלים החיוניים לטכניקה, כולל מנגנון ההזרקה והמיקרו-נג’ר, השולט בתנועת הנוזלים עם פולסים של אוויר. לאחר מכן, צעדי הכנה חשובים מודגמים, כגון שפיכת לוחות אגר כדי לייצב עוברים במהלך הזרקה וכיול של מנגנון המיקרו-יז’ק. הליך ההזרקה מוצג לאחר מכן יחד עם טיפים על מתי ואיפה זריקות צריך להתבצע. לבסוף, יישומים של טכניקת microinjection נדונים, כולל ביטוי יתר של גנים באמצעות הזרקת mRNA, השתקת גנים על ידי משלוח של oligonucleotides מורפולינו antisense, ואת הדור של דגי זברה מהונדסים באמצעות DNA plasmid מהונדס במיוחד.
Procedure
מיקרו-ערך של עוברים של דגי זברה מאפשר לחוקרים לספק פתרונות ישירות לחיה המתפתחת, על מנת לחקור את תפקוד הגנים ואת הדינמיקה ההתפתחותית. עוברים משלב 1 עד 4 תאים משמשים לעתים קרובות להזרקה. מכיוון שאין ממברנות המפרידות בין התאים לחלמון בשלב מוקדם זה, פתרונות המוזרקים לתא אחד או לחלמון יתפשטו באו?…