Способ генерации легких нейтрофилия Использование аэрозольного липосахарид

Summary

Мы опишем метод индукции нейтрофилов воспаление легких на вызов аэрозольного липополисахарида распылением, для моделирования острого повреждения легких. Кроме того, основные хирургические методы для выделения легких, интубации трахеи и бронхоальвеолярного лаважа, также описаны.

Abstract

Острое повреждение легких (ALI) является серьезным заболеванием, которое характеризуется альвеолярной нейтрофилез с ограниченными возможностями лечения и высокой смертностью. Экспериментальные модели ALI являются ключевыми в повышении нашего понимания патогенеза заболевания. Липополисахарид (LPS), полученный из грамположительных бактерий вызывает нейтрофильный воспаление в дыхательных путях и легких паренхимы мышей. Эффективное легочной доставки соединений, таких как ЛПС, однако, трудно достичь. В подходе, описанном здесь, легочная доставка на мышах достигается вызов аэрозольных синегнойной палочки ЛПС. Растворенный ЛПС аэрозоля с помощью распылителя, подключенного к сжатому воздуху. Мыши подвергались воздействию непрерывного потока аэрозоля LPS в коробке из оргстекла в течение 10 мин, а затем 2 мин после кондиционирования аэрозоль был прекращен. Интубация трахеи и последующее бронхоальвеолярного лаважа, а затем формалина перфузии был следующий выполнены, что позволяет характеристике стерильной рulmonary воспаление. Аэрозольный LPS генерирует воспаление легких характеризуется альвеолярной нейтрофилез, обнаруженных в бронхоальвеолярного лаважа и гистологических. Этот метод может быть создана за небольшую плату с нескольких приборов, и требует минимальной подготовки и опыта. Система экспозиции таким образом, может быть выполнена на регулярной основе на любой лаборатории, с потенциалом для повышения нашего понимания легких патологии.

Introduction

Липополисахарид (ЛПС) является клеточной стенки компонент грамотрицательных бактерий ^1. Вызов ЛПС хорошо документированы модель острого повреждения легких, синдром характеризуется острым нейтрофилов воспаления и отека ^2. Кроме того, легочная нейтрофилия также отличительной чертой хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) ^3, и ЛПС у человека был использован для моделирования ХОБЛ обострений ^4. Таким образом, экспериментальные модели воздействия ЛПС клинически значимых и ценных инструментов, чтобы понять патологии человека.

Целью легочной доставки аэрозольных ЛПС, описанных здесь, чтобы генерировать нейтрофильный воспалительную реакцию в проводящей и дыхательных путей, без системного вовлечения. Несколько методик ЛПС были описаны ранее. Внутривенной инъекции LPS является наиболее широко используется способ введения. Хотя этот метод является легко доступным, тОн первичной повреждение к эндотелию, со средним разрушения легочный эпителий следующей миграции нейтрофилов в легкие. Внутривенного введения также вызывает системное воспаление ^2, который может осложнить клинической картины на животных моделях. Системное воспаление в отличие не наблюдается с администрацией внутри трахеи. Этот метод, однако, является трудоемким и требует анестетиков, а также значительное подготовку ^{5, 6.} Кроме того, легочной осаждения этого способа введения зависит от дыхания ^7. Таким образом, осаждение легких зависит от глубины анестезии, необходимых для можно наблюдать внутри трахеи и введение переменной осаждения в дыхательных путях. В отличие от этого, в легкие с аэрозольными LPS требуется минимальное обучение, и может быть легко достигнуто на большом количестве животных с небольшим или без изменения между индивидами ^{5, 8.}Недавнее исследование подтверждает, что аэрозоль доставка превосходит внутри трахеи маршрута с учетом осаждения, и что более актуальной дозы ЛПС вызвать нейтрофильный воспаление с этой моделью ^8.

Предыдущие исследования показали, что вызов в виде аэрозоля Psuedomonas палочки LPS генерирует заметное воспалительной реакции в просвете дыхательных путей и паренхимы легких, в том числе альвеолярных пространств ^{9, 10.} Воспаление характеризуется преобладанием нейтрофилов и наличие отека легких, и, таким образом, может быть использована для решения патогенеза острого повреждения легких и получить дополнительные знания о механизмах, способствующих патологии болезни.

Protocol

Исследования на животных были одобрены этики защиты животных комитета северной части Стокгольма. Экспериментальные процедуры были выполнены в соответствии со шведским законодательством. 1. Создание ЛПС аэрозолей Растворите 0,5 г очищенного П. палочки ЛПС в 50 …

Representative Results

Вызов аэрозольного P. палочки ЛПС, как правило, дает выраженный воспалительный ответ в просвете дыхательных путей и альвеол пространства, характеризующиеся преобладанием нейтрофилов на обоих ранних и поздних временных точках. Аэрозольный LPS индуцирует легочную ней?…

Discussion

Аэрозольный LPS генерирует воспалительную реакцию в дыхательных путях, характеризуется нейтрофилов в эпителиальных подслизистой, пробелы, окружающие проводящие дыхательные пути, а также альвеолярных пространств. Это, вместе с увеличением общего содержания белка в БАЛ, указателем уте?…

Materials

Name of the material/equipment	Company	Catalog number	Comments/Description
Purified Pseudomonas aeruginosa LPS	Sigma-Aldrich		Harmful. Recomended purification. LPS purified from other bactria may be used.
Pari LC sprint star nebulizer	PARI Respiratory Equipment Inc.	023G1250
TSI mass flowmeter 4040	TSI	4040	Alternative product from supplier may be used.
Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tube	Sigma-Aldrich	Z685704	Recomended brand.
Plexiglas boxes with removable lids	Custom built	N/A	150 x 163 x 205 mm (a 2 mm hole on the side).
3M Half Facepiece Reusable Respirator	3M	7503	Recomended brand.
3M Advanced Particulate Filters (P100)	3M	2291	Recomended brand.
Sissors	VWR	233-1104	Preferred scissors may be used.
Forceps	VWR	232-1313	Preferred forceps may be used.
Intramedic PE50 polyethylene tube	BD	427411	Recomended brand.
Ethicon 2-0 Perma-hand silk tread	VWR	95056-992	Recomended brand.
26 ½  gage needle			Alternative suppliers exist.
1 mL BD slip-tip syringe, non-sterile	BD	301025	Alternative suppliers exist.
60 mL BD Luer-Lok syringe, non-sterile, polypropolene	BD	301035	Alternative suppliers exist.
Fluka Hematoxylin-Eosin	Sigma-Aldrich	3972	Alternative suppliers exist.
Türk's solution	Merck Millipore	109277
Table top centrifuge			Alternative manufacturers exist.
Cytospin 4 cytocentrifuge	Thermo Scientific	A78300003	Alternative centrifuge can be used.
HEMA-3 stat pack	Fisher Scientific	23-123-869	Alternative staining kits exists.
Formalin solution, neutral buffered, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128	Alternative suppliers exist.