بعد transection الشوكي، الزرد الكبار يكون الانتعاش وظيفية لمدة ستة أسابيع بعد الإصابة. للاستفادة من الشفافية اليرقات والانتعاش بشكل أسرع، ونحن نقدم وسيلة لtransecting الحبل الشوكي اليرقات. بعد transection، نلاحظ الانتعاش الحسية ابتداء من الساعة 2 أيام بعد الإصابة، وحركة C-منحنى قبل 3 أيام بعد الإصابة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تفشل الثدييات في الانتعاش الحسية والحركية التالية إصابة النخاع الشوكي بسبب نقص إعادة نمو محور عصبي دون مستوى الإصابة وكذلك عدم القدرة على معاودة تكوين الخلايا العصبية في العمود الفقري. ومع ذلك، فإن بعض anamniotes بما في ذلك الزرد دانيو rerio المعرض على حد سواء الحسية والانتعاش وظيفية حتى بعد transection كاملة من الحبل الشوكي. الزرد الكبار هو نموذج حي أنشئت لدراسة التجديد التالية اصابات الحبل الشوكي، مع الانتعاش الحسية والحركية من خلال 6 أسابيع بعد الإصابة. للاستفادة من الجسم الحي في تحليل عملية التجدد المتاحة في الزرد اليرقات شفافة وكذلك الأدوات الجينية لا يمكن الوصول إليها في الكبار، ونحن نستخدم اليرقات الزرد لدراسة تجديد بعد transection الحبل الشوكي. نحن هنا يبرهن على وجود طريقة لبتكاثر ويمكن التحقق منه transecting الحبل الشوكي اليرقات. بعد transection، بياناتنا تظهر الانتعاش الحسية بداية في 2 يوما بعد الإصابة (نقطة في البوصة)، وخفة دمح حركة-C منحنى كشفها بواسطة 3 نقطة في البوصة واستئناف السباحة الحرة بنسبة 5 نقطة في البوصة. وبالتالي نقترح الزرد اليرقات كأداة مصاحب لالزرد الكبار لدراسة الانتعاش بعد إصابة الحبل الشوكي.
المقدمة
الصدمة الكبرى إلى الحبل الشوكي الإنسان غالبا ما يؤدي إلى الشلل الدائم وفقدان الإحساس دون مستوى الإصابة، وذلك بسبب عدم القدرة على محاور عصبية أو تجديد أعماله تنمو الخلايا العصبية 1،2. وعلى النقيض من الثدييات، ومع ذلك، بما في ذلك anamniotes السلمندر والزرد (دانيو rerio) تظهر انتعاشا قويا حتى بعد transection الحبل الشوكي كاملة 3،4.
الزرد الكبار هو نموذج راسخة لدراسة عملية الانتعاش في أعقاب إصابة الحبل الشوكي 5-7. التالية transection كاملة في النخاع الشوكي، لوحظ إعادة وظيفة الحسية وقاطرة في الزرد الكبار بنسبة 6 أسابيع بعد ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأثيرت الزرد وتربيتها وفقا للاجراءات المتبعة؛ تمت الموافقة على التجارب من قبل الجامعة لجنة رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية ولاية يوتا.
1. إعداد لوحات جراحة
- جعل لوحات الجراحة باستخدام 60 مم أطباق بتري وSylgard 184 السيليكون المرنة كيت، بعد تعليمات الشركة الصانعة. ملء أطباق لا يزيد عن نصف كامل والسماح لبلمرة. متجر تغطيتها على درجة حرارة الغرفة.
2. إعداد بال micropipettes
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
للحد من شدة تلف الأنسجة المحيطة بموقع الإصابة، الميلا السليم من micropipette أمر بالغ الأهمية. ويبين الشكل 1A تلميح مشطوف بشكل صحيح. باستخدام تلميح بأن واسعة جدا (1B الشكل) يميل إلى نتيجة في عدد القتلى أعلى نظرا لاحتمال زيادة الخدش الأبهر الظهري، في حين أن الطرف الذي هو ضيق جدا (الشكل 1C) يميل إلى وهلة قبالة الجلد بدلا من قطع الأنسجة.
لممارسة هذه التقنية، فإنه من.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
عندما تعلم هذه التقنية في البداية، ونحن نوصي محاولة لا أكثر من 50-100 transections في جلسة واحدة. بعد اتقان هذه التقنية، ونحن قادرون على القطع يصل إلى 300 الأجنة في ساعة؛ ومع ذلك، فإن هذا المستوى من الإنتاجية يتطلب بضعة أشهر من الممارسة الأسبوعية. نوصي أيضا ممارسة مع خط مراسل والتحقق من transection كاملة حتى يتم تقليل حدوث ناقصة transection الحبل الشوكي إلى أقل من 1٪.
transection الحبل الشوكي في الزرد الكبار هي ت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
نحن مدينون لمرفق جامعة ولاية يوتا الزرد لتربية المواشي. وأيد من قبل المعاهد الوطنية للصحة RID R56NS053897، وكان LKB متدرب دكتوراه مسبقا بدعم من مبادرة HHMI ميد حيز غراد.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طبق بتري 60 مم | VWR | 82050-544 | |
| 100 مم طبق بتري | VWR | 89038-968 | |
| PDMS ، Sylgard 184 مجموعة مطاط سيليكون | فيشر Scientific | NC9644388 | |
| أنابيب شعرية البورسليكات: OD 1.00 مم ، معرف 0.78 مم | شركة Warner Instruments Inc. | 64-0778 | |
| ملقط | الأدوات العلمية الدقيقة ، Inc. | 11252-30 | |
| مجهر | تشريح نيكون | SMZ6454 | |
| مطحنة دقيقة | Narishige | EG-44 | |
| جنتاميسين كبريتات | أمريسكو | 0304-5 جم | يذوب في الماء 10 مجم / مل ، ويخزن في -20 درجة ؛ C |
| Tricaine | Acros Organics | 118000100 | |
| قضيب قطني ذو رأس ، خشب ، 6 بوصة | فيشر سيانتيفيك | 23-400-101 | |
| 1 مل حقنة | BD | 309625 | |
| 27 جم إبرة | BD | 305109 | |
| Fry food | Argent | Labs F-ARGE-PTL-CN | store عند -20 درجة ؛ C |
| مجتذب الماصات | الدقيقة Sutter Instrument Co. | نموذج P-97 | صندوق خيوط FB330B |
| <قوي>20x E2 (1 لتر) ؛ متجر < / قوي > في RT | |||
| 17.5 جم كلوريد الصوديوم | فيشر Scientific | S671-500 | |
| 0.75 جم KCl | Fisher Scientific | P217-500 | |
| 2.90 جم CaCl 2< / sub>· ؛ 2H2O | Sigma | C7902-500G | |
| 4.90 g MgSO4& middot; 7H2O | Merck | MX0070-1 | |
| 0.41 g KH2PO4 | Fisher Scientific | P285-500 | |
| 0.12 g Na2HPO4 | Sigma | S0876-500G | |
| 500x NaCO3 (10 مل); < / قوي > جعل طازجة ، وتخلص من | |||
| 0.35 جم إضافي من NaCO3< / sub> | Sigma | S5761 | |
| <قوي>1x E2 (1 لتر) ؛ < / قوي > يحفظ في RT | |||
| 50 مل 20x E2 | |||
| 2 مل طازج 500x NaCO3< / sub> |
المراجع
- Houweling, D. A., Bär, P. R., Gispen, W. H., Joosten, E. A. Spinal cord injury: bridging the lesion and the role of neurotrophic factors in repair. Progress in brain research. 117, 455-471 (1998).
- Mikami, Y., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
