Summary

Die Analyse der Bewegung des Nauplios '<em> Artemia salina</em> 'Von Optical-Tracking von Plasmonische Nanopartikel

Published: July 15, 2014
doi:

Summary

Wir verwenden optische Tracking plasmonischer Nanopartikel zu untersuchen und zu charakterisieren, die Frequenz Bewegungen von Wasserorganismen.

Abstract

Wir zeigen, wie eine optische Pinzette empfindliches Werkzeug, um die Fluid Vibrationen durch die Bewegung von kleinen Wasserorganismen erzeugt analysiert werden können. Ein einzelner Gold-Nanopartikel mit einem optischen Pinzette gehalten wird als Sensor, um die rhythmische Bewegung eines Nauplios Larve (Artemia salina) in einer Wasserprobe zu quantifizieren. Dies wird durch Überwachen der zeitabhängigen Verschiebung des eingeschlossenen Nanopartikel als Folge der Nauplios Aktivität erreicht. Eine Fourier-Analyse der Lage der die Nanopartikel ergibt dann ein Frequenzspektrum, das charakteristisch für die Bewegung der betrachteten Art ist. Dieses Experiment demonstriert die Fähigkeit dieses Verfahrens, ohne die Anforderung zu messen und zu charakterisieren, die die Aktivität von kleinen Wasser Larven, sie direkt zu beobachten und Informationen über die Position der Larven in Bezug auf die eingeschlossenen Partikel zu gewinnen. Insgesamt ist dieser Ansatz einen Einblick auf die Vitalität der bestimmte Arten in einem Wasser e gefunden geben könntecosystem und konnte den Bereich der herkömmlichen Methoden zur Analyse von Wasserproben zu erweitern.

Introduction

Bewertung der Wasserqualität auf Basis der chemischen und biologischen Indikatoren ist von grundlegender Bedeutung, um einen Einblick auf den Zustand und Umgebungsbedingungen eines aquatischen Ökosystems 1-3 zu gewinnen. Klassische Methoden zur chemischen Wasseranalyse werden auf organoleptischen Eigenschaften oder die Bestimmung von physikalisch-chemischen Parametern. Biologische Indikatoren, auf der anderen Seite, sind Tierarten, deren Anwesenheit und Lebensfähigkeit bieten Einblick in die Umweltbedingungen und die Wirkung von Schadstoffen für ein Ökosystem, dass sie auftreten in. Typische Beispiele für Bioindikatoren sind Copepoden, eine Gruppe von kleinen Wasserkrebstiere, die können in fast jedem Lebensraum Wasser 4,5 gefunden werden. Die Beobachtung der Aktivität und Lebensfähigkeit dieser Arten aus einer Wasserprobe kann somit verwendet werden, um Informationen über die Rahmenbedingungen eines Ökosystems 5 zu erhalten. Die Larven der Copepoden, die Nauplien genannt werden, verwenden rhythmische Schläge von ihren Antennen (jede Larve hat drei Paare appendages an ihrem Kopfbereich) in Wasser 6 schwimmen. Die Häufigkeit und Intensität dieser Schlaganfälle ist dabei ein direkter Indikator für das Alter, Fitness und Umweltbedingungen der Tiere 10.07. Jegliche Untersuchungen an diesen Proben sind in der Regel mit einem Mikroskop beobachtet und die Antenne Striche der Nauplien direkt Zählen erfolgt. Aufgrund ihrer Größe (~ 100-500 um) 11, erfordert dies oft, um Messungen entweder einzeln oder um eine einzelne Nauplios auf ein Substrat zu beheben.

Hier einen neuen Ansatz zeigen wir, um die Aktivität der Copepod Larven in Wasserproben mit Hilfe eines optisch gefangenen Gold-Nanopartikel als ultraempfindlichen Detektor zu beobachten. Optische Pinzetten werden in der Regel von vielen Gruppen als feiner experimentelles Werkzeug, um zwischen den Molekülen bis zum Pikonewtonbereich 12-14 an oder messen Kräfte eingesetzt. Vor kurzem, die Palette der Anwendungen für die optische Pinzette wurde erweitert, um akustische Schwingungen zu beobachten und zu lösennt Schwankungen in flüssigen Medien durch Überwachung der Bewegung der Nano-und Mikropartikel, die in einer optischen Falle 15 eingeschlossen werden. Teilchen, die in eine Flüssigkeit eingetaucht werden, werden die Brownsche Bewegung unterworfen. Innerhalb einer optischen Falle, aber diese Bewegung wird teilweise durch eine starke, Laser-induzierte Gradient Kraft gedämpft. Daher kann die Steifigkeit der optischen Falle und die Lokalisierung der Partikel innerhalb des Fokus des Laserstrahls von der Laserleistung eingestellt werden. Zugleich ist es möglich, Eigenschaften über die Fangpotential offenbaren und Wechselwirkungen von Molekülen mit dem Partikel durch Überwachen der zeitabhängigen Bewegung der Teilchen in der Falle zu analysieren. Dieser Ansatz macht es möglich, holen die Häufigkeit, Intensität und die Richtung der Bewegung der fluidischen, die von einem sich bewegenden Objekt in seiner flüssigen Umgebung erzeugt wird. Wir zeigen, wie diese allgemeine Idee angewendet werden, um ein Frequenzspektrum der Bewegung eines einzelnen Nauplios ohne die Notwendigkeit erhalten werdendirekt mit der Probe stören. Dieser experimentelle Ansatz stellt ein neues Gesamtkonzept für die Beobachtung der bewegliche Verhalten von Wasserproben in einem sehr sensiblen Art und Weise. Für Beobachtungen auf Bioindikator Arten, könnte dies die aktuelle Methodik für die Wasseranalyse zu erweitern und konnte angewendet, um Informationen über die Gesundheit und die Unversehrtheit der aquatischen Ökosysteme zu gewinnen.

Protocol

1. Versuchsaufbau Verwenden Sie einen aufrechten Mikroskop und eine Dunkelfeld-Ölkühler mit einer numerischen Apertur (NA) = 1.2 für Dunkelfeldbeleuchtung. Verwenden Sie ein Wasserimmersionsobjektiv mit 100-facher Vergrößerung und einem NA = 1.0 für Partikel Beobachtungen und Trapping. Verwenden Sie ein Luftziel mit 10-facher Vergrößerung und einem NA = 0,2, um die Bewegung des Nauplios folgen. Verwenden Sie eine optische Pinzette Setup mit einem 1064 nm Dauerstrich-Laser in den oben rechts …

Representative Results

Eine schematische Darstellung des experimentellen Aufbaus ist in Fig. 1A gezeigt. Ein Dunkelfeldkonfiguration ist notwendig, um die Verschiebung eines 60 nm Goldpartikel in einer optischen Falle 15 optisch zu erfassen. Die Wellenlänge von 1064 nm für die Fanglaser wird so gewählt, um eine stabile Begrenzung der Detektor Goldteilchen 12,14 zu gewährleisten. Ein Strahlteiler, der in dem Mikroskop verwendet wird, um das Einfangen Strahl durch das Objektiv zu fokussieren und ein Ke…

Discussion

Dunkelfeldmikroskopie ist ein leistungsfähiges Werkzeug für die Visualisierung Gold-Nanopartikel mit Abmessungen unterhalb der optischen Beugungsgrenze, da der Streuquerschnitt der Metallnanopartikel ihrer geometrischen Querschnitt (vgl. Fig. 2A) 18 überschreitet. In einer Pinzette Setup, ermöglicht dieser Ansatz auch zu unterscheiden, ob nur einzelne oder mehrere Gold-Nanopartikel werden durch den Laserstrahl eingefangen, weil Plasmonenkopplung zwischen den Teilchen verursacht eine Rotve…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Finanzielle Unterstützung durch den ERC durch die Erweiterte Investigator Grant HYMEM, von der DFG in der Nanosystems Initiative Munich (NIM) und durch den Sonderforschungsbereich (SFB1032) wird Projekt A8 dankbar anerkannt. Wir sind dankbar, dass Dr. Alexander Ohlinger, Dr. Sol Carretero-Palacios, Spa und Wellness Nedev für die Unterstützung und fruchtbare Diskussionen.

Materials

Microscope Zeiss Axio Scope.A1 Carl Zeiss 490035-0012-000 dark field illumination
Water objective Achroplan Carl Zeiss 440087 100x magnification, NA=1.0
Air objective Epiplan Carl Zeiss 442934 10x magnification, NA=0.2
Dark field oil condenser Carl Zeiss 445323 NA=1.2
Cobolt Rumba CW 1064 nm DPSSL Cobolt  1064-05-01-2000-500 1064nm, CW, λ=1064nm, 2 Watt, TEM00
Beam expander Edmund Optics Part no. 1064 2-8X 64414
High Speed Camera Dimax HD PCO. Germany
Color Camera Canon EOS 500 D  Canon FAQ-ID: 8201395700
Notch filter StopLine 532/1064 Semrock A11149-711265 Part no. NF01-532U
Water 
Nauplius Artemia Salina
Gold colloid BBInternational Batch 13741  Diameter 60nm
MQMie Version 3.2  r. Michael Quinten
Mathematica 8.0 Wolfram
Comsol Multiphysics 4.0  COMSOL, Inc.

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Cite This Article
Kirchner, S. R., Fedoruk, M., Lohmüller, T., Feldmann, J. Analyzing the Movement of the Nauplius ‘Artemia salina‘ by Optical Tracking of Plasmonic Nanoparticles. J. Vis. Exp. (89), e51502, doi:10.3791/51502 (2014).

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