Summary
מחלה קליפת אשור היא ביוזמת האכלת פעילויות של החרק בקנה מידה אשור שיוצרים נקודות כניסה פטרייתי בקליפה. עצים, כי הם עמידים לחרקים בקנה מידה הם גם מחלה עמידה. כאן אנו מציגים את הפרוטוקול שפיתחנו למסך עצי אשור פרט להתנגדות בקנה מידה אשור.
Abstract
מחלה אשור קליפת תוצאות (BBD) ברמות גבוהות של תמותה ראשונית, והשאירה מאחורי עצי הניצולה שנחלשו מאוד ומעווה. המחלה היא ביוזמת האכלת פעילות של החרקים פולשני בקנה מידה אשור, Cryptococcus fagisuga, אשר יוצרים נקודות כניסה לזיהום על ידי אחד המינים במיקרוסקופ סטראו של פטרייה. ללא נגיעות בקנה מידה, יש הזדמנות קטנה לזיהום פטרייתי. שימוש בביצים בקנה מידה לשורצת באופן מלאכותי עצים בריאים בדוכנים בכבדות השפיעו BBD הראתה כי עצים אלה היו עמידים לחלק החרקים בקנה מידה של מורכבות המחלה 1. כאן אנו מציגים פרוטוקול שפיתחנו, המבוסס על הטכניקה המלאכותית שריצה על ידי יוסטון 2, אשר יכול לשמש מסך לעצים בקנה מידה עמידה בתחום ובקטן יותר שתילים ושתלים בעציצים. זיהוי של עצים בקנה מידה עמידה הוא מרכיב חשוב של ניהול BBD של דרך עץתוכניות שיפור ומניפולציה silvicultural.
Introduction
מחלה אשור קליפה (BBD) יש לו השפעה מזיקה על אשור אמריקאי בצפון אמריקה מאז כניסתה של החרקים פולשני בקנה מידה אשור, fagisuga Cryptococcus, במחוז הקנדי של נובה סקוטיה בסוף 1890s 3. מורכבת חרקי מחלה זו היא יזמה כאשר החרק בקנה מידה האשור מוסיף stylet ההאכלה שלה לתוך הקליפה יוצרת סדקים קטנים המספקים כניסה לזיהום על ידי אחד המינים במיקרוסקופ סטראו של פטרייה (ditissima מיקרוסקופ סטראו או faginata מיקרוסקופ סטראו). כתפטיר הפטרייה לגדול, אזורים גדולים של רקמה עלולים למות, בסופו חוגרים את העץ לגמרי. הנזק מהמחלה מחליש את העץ, מה שהופך אותו נוטה למצלמים ברוחות חזקות 4. רמת התמותה בגל הראשון של המחלה דווח להיות גבוה ככל 50% 5. עצים ששרדו לעתים קרובות מעוותים באופן חמור כcankers יוצר הפחתת ערכו של העץ כמוצר עץ.0, יש עצים מסוג זה נטייה לשורש הנבטה שמובילה להיווצרות של "סבך אשור" שמונע מין רצוי יותר אחר מהקמת, הפחתת הערך הכלכלי ואקולוגי של העמדה 6. למרות המחלה קליפת אשור אינה צפויה להוביל להכחדה של האשור האמריקאי, זה משנה לעמוד הרכב ובריאות שמוביל לירידה במזון ובית גידול ל7,8 חיות בר.
ביציעים מושפעים BBD במשך שנים רבות, עצים שנותרו ללא כל סימפטומים של המחלה כבר דיווחו. ניסויים חיסון מלאכותיים הראו כי עצים אלה הם עמידים לחרקים בקנה מידה 2. ללא נגיעות בקנה מידה, יש הזדמנות קטנה לזיהום במיקרוסקופ סטראו, למזער את השפעתה של הפטרייה. תמותה בקנה מידה גדולה באשור אמריקאי עקב הזיהום במיקרוסקופ סטראו בהעדר התפשטות בקנה מידה לפני מעולם לאדווח, ולכן התנגדות לתוצאות חרקים בקנה מידה אשור בהתנגדות לBBD.
מחקר שנערך לאחרונה בניהולו של BBD התמקד בזיהוי, התפשטות, רבייה, ושמירה של עצי אשור אמריקאים עם התנגדות לחרקים בקנה מידה אשור. מחקרים גנטיים הראו כי התנגדות לחרקים בקנה מידה היא תורשתית ובחירת רבייה זהירה של עצים עמידים יכולים לגרום לשיפור משמעותי בדור אחד 9. ממצא זה הגבירו את מאמציהם של מנהלי מדינה ויער לאומי בארצות הברית להקמת מטעי זרעים אזוריים של אשור אמריקאי עמיד לספק מקור זרע BBD עמיד גנטי מגוון לנטיעות שיקום 10,11. המחקר גם הצביע על כך שמניפולצית silvicultural גנטיקה עמדה על ידי הסרה של עצים ושימור עצים עמידים רגישים יכולה לגרום 9,12 שיפור עמדה. </ P>
ניהול של BBD באמצעות פעילויות שיפור עץ או באמצעות ביצוע המרשמים silvicultural דורש את היכולת לבחור וללהבחין בין עצים בקנה מידה עמידה ורגישה אשור. השיטות שהוצגו כאן הותאמו משיטה הוצגה לראשונה על ידי דייב יוסטון לחסן באופן מלאכותי שתילים עם ביצים בקנה מידה אשור 1. השיטה יכולה לשמש ככלי מיון לזהות לוקוסי תכונה כמותית (QTL) הקשורים להתנגדות או להבחין בין שתילים בעציץ עמידים ורגישים או ramets מורכב במחקרים גנטיים. לחלופין, ניתן להשתמש בו לסינון עצים בוגרים בתחום לזהות עצים עמידים לפיתוח מטע זרע, או שמירה בתחום. ניתן לזהות עצים רגישים והוסרו כדי למזער את השפעות מחלה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1 צמח חומר:. למבוגרים שדה עצים, שתילי עציצים, או עציצים שתלי
- בתחום בדיקות, בחר עצים בוגרים בריאים אמריקאים אשור שלא מראים סימנים של התפשטות בקנה מידה או מחלה לבדיקת התנגדות אפשרית. בעליל עצים רגישים גם צריכים להיות מזוהים כדי לשמש כביקורת (איור 1).
- לבדיקת שתילים או שתלים בעציץ, לאסוף ולנבוט beechnuts כפי שמתואר בקוך וקארי, 2004 או נצר שתל כמתואר בקארי ואח', 2013.
- גדל שתילים או שתלים בשתילת תערובת אדמה מתוקנת עם 47 micronutrients גרם, 477 גרם דשן שחרור 15N-3.9P-9.9K האיטי, פרלייט גס 700 גרם ו75 סולפט האלומיניום גרם לכל 2.8 מ"ק. תיק מטר. אם יש צורך בהמשך עונת הגידול, לדשן צמחים שבועיים עם 17N-1.3P-14.1K מסיס ב200 חנקן עמודים לדקה.
- במהלך עונת הגידול, לשמור על צמחים בבית צל. מאפשר לצמחים ללכת רדומים מחוץ בסתיו לפני מעברםלמתקן אחסון בטמפרטורה מבוקר (~ 4 ° C) מנובמבר עד אפריל.
2. אוסף של אשור סולם ביצים
- בדוכן שורץ-BBD, לבדוק עצים נגועים בכבדות (המזוהים בקלות על ידי המראה, 1A "המסויד" איור) עם זכוכית מגדלת יד כדי לאשר את קיומו של ביצים, בדרך כלל בשפע מאמצע יולי עד אמצע אוגוסט.
- שימוש במכחול להבריש בעדינות את גושי שעווה הלבנים של כנימות בוגרות, ביצים ופסולת אחרים, לתוך שקית איסוף ליטר אחד סגר פלסטיק (איור 1). לאסוף ממינימום של שלושה עצים שונים זה מזה לפחות 12 מ '.
- במידת צורך, לאחסן ביצים בשקית האיסוף האטומה עד שבועיים ב 4 ° C. קלטת חתיכה קטנה (2.5 סנטימטר מרובע) של פוליאתילן מוקצף לח לחלק הפנימי של השקית כדי למנוע את הביצים מהתייבשות.
- להפריד את הביצים בקנה מידה (0.15 x 0.25 מ"מ) מהמבוגרים (0.60 מ"מ) וdebriים, לבנות מסננת באמצעות קטע קצר של 2 צינור PVC 'וצימוד לתמוך פיסה רבועה של 250 רשת ניילון מיקרון (איור 2).
- רוקן את התערובת של מבוגרים, שעווה, ביצים, ופסולת משקית האיסוף על גבי המסננת ולהשתמש במברשת צבע קטנה כדי לעודד בעדינות את הביצים לעבור דרך הרשת לתוך צלחת פטרי זכוכית בהמשך. יש להימנע ממאכלי פלסטיק פטרי כי הם מחזיקים את חשמל הסטטי יותר, מה שהופך את זה קשה להעביר את הביצים. ביצים לפני ואחרי הסנון מוצגות באיור 3.
- ניתן לאחסן ביצים מטוהרים בצלחת פטרי על 4 מעלות צלזיוס במשך שבוע לפחות. כדי למנוע את הביצים מהתייבשות, קלטת פיסה לחה של קצף למכסה ולאטום עם Parafilm.
3. ביצת מבחני הכדאיות
- כדי להעריך את כדאיות ביצה, להשתמש במזרק 10 סמ"ק ליישם טבעת דקה של וזלין סביב ההיקף של החלק התחתון של צלחת פטרי זכוכית 60 מ"מ (איור 4 א
- העבר על 100 ביצים למרכז הזירה, הנח את המכסה על צלחת פטרי ולאטום עם Parafilm. לאפשר את צלחת פטרי האטום להישאר באין מפריע בטמפרטורת חדר למשך 2 שבועות, או 3 שבועות אם ביצים היו מאוחסנות על 4 מעלות צלזיוס לפני תחילת assay.
- נימפות בקעו יהפכו תקועות בוזלין וניתן לספור בקלות, וביצים ריקות בקלות להבחין בין ביצים שעדיין לא בקעו לפי צבעם וברק (איור 4). חישוב כדאיות על ידי חלוקת מספר נימפות בסכום של הביצים הריקות בתוספת ביצים מלאה שנותרו. כדאיות טובה צריכה להיות ב75% עד 90% טווח הביצים בקע.
4. הקרנה בקנה מידה התנגדות של גדולים למבוגרים אשור עצים בשדה
- למבחן כמוני, לספור את 500 ביצים באמצעות מיקרוסקופ לנתח ובעזרת מרית קטנה בעדינות ומפזרים אותם על פני המרכז לפתוח תאי 10 x 15 x 1.3 מלבן של פוליאתילן מוקצף predampened, סנטימטר. אללצנן את הקצף, הרטבת אותו ואז לסחוט את מים רבים ככל האפשר. למבחן איכותי, ניתן לספור 500 ביצים והניחו בבקבוקון זכוכית קטן וקו "מילוי" נמשך, שניתן להשתמש כדי למדוד קבוצות נוספות של כ 500 ביצים.
- הנח את כרית הקצף על גבי עץ הבדיקה עם צד הביצה פונה נגד לנבוח. להחזיק את הכרית במקום עם חבל, מחרוזת, חוט, חוט או חומרת פלסטיק מצופה. פלסטיק או חומר מבוסס מתכת אמור לשמש במקום חומרי סיבים טבעיים אשר בזז יותר בקלות על ידי חיות הבר.
- קו העליון ואת הצדדים של פיסת סנטימטר חתוך מראש 23 x 30 של לעטוף אדים חדירים למים בית עם דבק סיליקון אצטט מבוססת ומניחים אותו על משטח בדיקת קצף. לחץ על הקצוות של לעטוף את בית העץ כדי ליצור חותם אטום למים. הנח חוט ניילון או חוט חומרה מצופה פלסטיק מסביב לעץ והבית לעטוף, כדי להחזיקו במקום בזמן שקבוצות הדבק (איור 5).
- מניחים מינימום של שנירפידות מבחן על כל עץ בדיקה, רצוי בצדדים מנוגדים של גזעו. בכל אתר, הנח כריות מבחן על לפחות 2 עצים רגישים (עם נגיעות בקנה מידה טבעית ברורות) כביקורת. לפני הצבת רפידות מבחן על עצי שליטה, להסיר כל חרקים באופן טבעי בקנה מידה או ביצים באמצעות משרד זיפי מברשת.
הערה: רפידות קצף עם ביצים גם ניתן להציב על עצים לצורך ביצי היקף גידול, אשר יכול להיות מועילות במיוחד באזורים בהם רמת הנגיעות נמוכה.
5. הקרנה בקנה מידה התנגדות של שתילי עציצים או שתלי
- לבדיקה, בחר עצים בעציצים בקוטר מינימאלי של 1 סנטימטר (קליפר 5 ס"מ מעל קו אדמה) שהם גבוהים מספיק כדי לקבל לפחות 2 רפידות מבחן נפרדות מוטלות עליהם. לגזום צד סניפים קטנים בעת צורך כדי לפנות מקום לרפידות המבחן.
- השתמש במיקרוסקופ לנתח לספור את 150 ביצים ולפזר אותם על פני חתוך ולח 2.5 x 7.6 x 1.3 סנטימטר תיקים עשויים לפתוח תאיםמשטח קצף Lene.
- להדביק משטח הקצף לשתיל עם צד הביצה נגד לנבוח, באמצעות חוט מצופה פלסטיק. לעטוף את הריבוע קטן של הבית לעטוף סביב השתיל בדיוק מעל הקצף ולאטום אותו עם סיליקון מבוסס אצטט (ראה איור 6 א).
- כולל ידוע משפחות שתיל רגישות או שתלי שולטת.
6. איסוף נתונים
הערה: כ 52-57 שבועות לאחר הצבת כריות הקצף וביצים על עצי הבדיקה, ניתן לאסוף נתונים. זה חשוב כי זה לא נעשה עד לאחר המבוגרים החלו להטיל ביצים, כך שהיכולת שלהם להתרבות ניתן לקבוע. על כמה עצים עמידים זה לא יוצא דופן לראות מספר קטן של מבוגרים להקים אך ללא רבייה מתרחשת.
- מוציא בזהירות את משטח הקצף ולספור את מספר הכנימות למבוגרים שהוקמו על הקליפה באמצעות יד או עדשת זכוכית מגדלת (10X).
- כאשר משטח הקצף מוסר, זה לא uncommon לחלק ממבוגרים ורוב אשכולות ביצה שהוריד מהעץ עם הקצף (ראה איור 7). באמצעות מיקרוסקופ לנתח, לספור את אשכולות הביצה ומבוגרים שנשארו מחובר למשטח הקצף.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 6 מראה שתיל עמיד (C) ושני שתילים רגישים (D, E) המציג דרגות שונות של רגישות. דוגמא למה שעץ בוגר רגיש נראה כמו 57 שבועות לאחר בדיקת נגיעות המלאכותית הוקמה מוצגת באיור 5. כשהקצף התקלף מהעץ, זה לא נדיר עבור כנימות ואשכולות הביצה שלהם כדי להישאר דבוק לקצף כפי שמוצגים באיור 7, ולכן זה חיוני כדי לאסוף נתונים משני העץ ומשטח הקצף .
איור 8 ממחיש את המספר הממוצע של חרקים בוגרים הוקמו לכל 100 ביצים על עצים נגועים באופן מלאכותי בשתי עמדות שונות, אחד ביער הלאומי אלגני (ANF) בפנסילבניה, והשני בפרק המדינה Ludington (LSP), מישיגן. שני היציעים היו שורצים BBD ובכל עמדה, מקבץ של עץ בריאים היה מזוהה (LSP עמיד ועמיד ANF) ונחוש בדעתו להיות מבוסס על ניתוח ה-DNA משובט (מידע לא מוצג). אשכול משובט של עצי BBD-רגישים זוהה גם בLSP (LSP רגיש) אבל בANF שימשו חמישה עצים רגישים שונים (ANF רגיש). בתוך ובין אשכולות משובטים, גודל מגוון עם DBH החל 2.1-12.8 סנטימטרים. איור 8 מראה כי למרות שיש הרבה וריאציה במספר המבוגרים שהוקמו על העצים רגישים, הבדלים ברורים מזוהים בין עצים רגישים ועמידים. הייתה פחות וריאציה במספר המבוגרים בשני אשכולות עמידים יחסית לעצים רגישים. באשכול עמיד ANF, כל 12 שיבוטים שנבדקו לא היו מבוגרים, ואילו באשכול עמיד LSP היו כמה שיבוטים מספר קטן של מבוגרים. עם זאת, לא הייתה חפיפה בסטיית התקן מהממוצע של העצים עמידים ורגישים בשני האתרים.
השונותtion במספר המבוגרים בעצים הקשורים clonally בLSP (LSP רגיש) הוא גדול יותר מאשר נצפה בעצי ANF רגישים (ANF רגישים) למרות העובדה שהעצים האלה הם לא משובטים ושונים מבחינה גנטית. בדיקות כדאיות (מידע לא מוצג) מצביעות על וריאציה זו אינה נובעת מהבדלים גדולים ביכולת הקיום של הביצים. הווריאציה היא כנראה עקב שני הבדלים גנטיים וסביבתיים, וממחישה את החשיבות של בעל פקדים רגישים להתייחסות בכל אתר בדיקה.
איור 1. אוסף של ביצים בקנה מידה מעץ אשור אמריקאי שורץ בקנה מידה. . עץ אשור אמריקאי כבדות שורצי קנה מידה. ב '. מכחול משמש לצחצח כנימות בוגרות וביצים שלהם לתוך שקית אחסון סגר מתחת.
איור 2. בנייה של מסננת כדי להפריד ביצים בקנה מידה ממבוגרים ומזהמים אחרים. כיכר מראש לחתוך 4 X 4 סנטימטר של 250 רשת ניילון מיקרון ממוקמת בין חתיכת 4 סנטימטר של צינור PVC בקוטר 2 "וצימוד כדי ליצור את המסננת .
איור 3. ביצי סולם לפני () ואחרי סינון (ב '). תערובת. של כנימות בוגרות, ביצים, ופסולת שנצפו תחת מיקרוסקופ לנתח לאחר איסוף מעץ. ב '. ביצים מטוהרים שהושגו לאחר שעבר את המסננת.
ge = "תמיד"> 
איור 4. בדיקת כדאיות ביצה. טבעת. נפט בצלחת פטרי לנימפות מלכודת לאחר הבקיעה. ב '. טופס I נימפה בצד הימין של ביצה. C בקע-האו"ם. ביצים בקעו הם קלים בצבע ושקוף ביחס לביצים צהבהבות אטומות לפני הבקיעה.
איור 5. התפשטות מלאכותית של אשור האמריקאי בוגר בתחום. לעטוף. בית המודבק עם סיליקון מבוסס אצטט כדי למנוע עודף לחות להצטבר על משטח קצף עם ביצים מתחת. ב '. הבית לעטוף הוסר ומשטח הקצף קלף 52 שבועות לאחר ההשמה לחשוף יםקייל קולוניזציה מתחת לעץ רגיש זה.
איור 6. התפשטות מלאכותית של שתילי אשור אמריקאים בעציצים. א קצף עם ביצים הצמודות לגזע. קצף הבית ב 'לעטוף כיסוי. ג קצף הוסר לאחר 56 שבועות על שתיל עמיד, ד' שתיל רגיש, א ושתיל רגיש מאוד. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.
איור 8. השוואה של המספר הממוצע של חרקים בוגרים הוקמו על עצים נגועים באופן מלאכותי בשני יציעים נפרדים. עצים עמידים ביער אלגני הלאומי, הרשות הפלסטינית (ANF) ובפרק מדינת Ludington, MI (LSP) הן בהשוואה לעצי שליטה רגישות. מספר העצים שנבדקו בכל אחת מקבוצות רשומים בסוגריים בהמשך, וספירה מבוגר לכל 100 ביצים מיושמות היו בממוצע על פני כל העצים בתוך הקבוצה. בר מייצג סטיית תקן אחת ממ 'EAN.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הנדרשים להצלחה של assay זה השלבים הקריטיים כוללים ביצוע בדיקת כדאיות על הביצים והשימוש בפקדים רגישים בכל אתר נבדק, ועם חומרים בעציצים. חשוב גם להשתמש בכרית מבחן יותר מפעם אחת לכל עץ או שתיל. מצאנו כי גם בשטח והן בבדיקות מבוקרות יותר על עציצים, מקור תכוף של טעות יכול להיות כישלון כרית. לדוגמא, בתחום, גם עם השינוי של מכסה את משטח הבדיקה עם הבית לעטוף כדי למנוע עודף לחות, מים זורמים במורד הגזע יכול להעדיף צד אחד של עץ ולגרום לאובדן של משטח בדיקה שלנו.
על מנת לקבל תוצאות מדויקות, חשוב להבקיע שני משטח העץ מתחת לכרית ומשטח הקצף עצמו. בנוסף למבוגרים ואשכולות ביצה, השלב הנייד רק במחזור החיים בקנה מידה שנקרא טופסי נימפות, יכול גם להיות שנצפה. נימפות אלה ניידים סופו של דברהכנס stylet ההאכלה שלהם לקליפת העץ, הופך נימפה צורה השנייה. שני הסוגים של נימפות דומים מאוד בגודל ומראה לביצים קטנות, בצורת האליפסה, בעוד שהמבוגרים יותר צורה כדורית יותר. טופסי נימפה הוא להבחין בין ביצים כי יש לו עיניים אדומות והוא נע, אבל תנועה זו גורמת מקבלת ספירה מדויקת מאוד קשה. נימפה הצורה השנייה יכולה בקלות להיחשב בטעות לביצה, ובמיוחד בעת הקלטת נתונים בשדה עם יד עדשה או זכוכית מגדלת ולא במיקרוסקופ. מסיבות אלה, אנו ממליצים לספור רק את המבוגרים ואת מספר אשכולות ביצה, שמצאנו נותן לנו נתונים לשחזור על יכולתו של עץ בדיקה כדי לתמוך התפשטות בקנה מידה עצמית לקיום. העבודות קודמות הראו כי ספירת המבוגר בקורלציה גבוהה עם אשכול מספר ביצי 9. במקרים רבים זה עשוי להיות מספיק רק כדי לספור מבוגרים; עם זאת, ראו כמה מקרים שבם מבוגרים המסוגליםההקמה בגנוטיפים מסוימים של עצים, אך אינו מייצרים ביציות. בלי היכולת להתרבות, שריצה בקנה מידה לא תהיה בת קיימא על עצים אלה.
נפילתו צפויה של assay זה כאשר היא מבוצעת בתחום היא את האטרקטיביות של רפידות מבחן לדובים. שינויים עתידיים לפרוטוקול צריכים להתמקד בשימוש בחומרים שעלולות להיות פחות אטרקטיבי לדובים או הצבת רפידות מבחן בגבהים שונים. הגבלה לשיטה זו של בדיקה היא שזה לא צריך להיות בשימוש באזורים שעדיין אין לי לפחות בקנה מידה התפשטות אשור אור, כדי למנוע את הסיכון של התפשטות מחלה קליפת אשור.
השירות של טכניקה זו הוא שניתן להשתמש בו כדי להעריך את ביצועים של הורה כחלק מתכנית רבייה. לצאצאים כגון בדיקות קריטריונים מחמירים לקנה מידת התנגדות הן בדרך כלל אחרי, המאפשרות רק בוגר אחד ואפס לדוגמאאשכולות גרם כקריטריון להתנגדות. שימוש בהנחיות אלה לבחירת הורים, חלקם של צאצאים עמידים צריך להיות כ 50%, המהווה שיפור ניכר על זרעים פתוחים האבקה 15. עם זאת, לצורך ניהול קרקעות זה עשוי להיות רצוי להשתמש בקריטריונים מחמירים פחות לשמירה על עצים מפני שעצים שתומכים ברמה נמוכה של כנימות עשויים להישאר בריאים יחסית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
Acknowledgments
המחברים בתודה להכיר מימון מניטור יער ארה"ב ההערכה להגנת בריאות שירות יערות והתוכניות מיוחדות לפיתוח טכנולוגיה שתמך בהתפתחות, שינוי והיישום של הפרוטוקול המתואר כאן לזהות עצים, כי הם עמידים ורגישים לחרקים בקנה מידה אשור. כמו כן אנו מודים להולדן גנים בוטניים, Kirtland, אוהיו, לשותפות שלהם מתמשכת ותמיכה של התכנית שלנו אמריקאי אשור התנגדות ההקרנה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nylon Mesh Sheet, 250 micron |  Small Parts |
CMN-0250-D | Mesh opening size: 250 microns square, % of open area: 34, thread diameter: 180 micron, width: 24”, Length: 12”, Package quantity: 1 |
| Tyvek Home Wrap | DuPont |
D1349991 | 9 ft x 150 ft roll, can ask for it to be cut in half. |
| Polyethylene foam, ½” thick | Columbus Foam Products |
2 ft x 50 ft roll | |
| MetroMix 510 | Sun Gro Horticulture |
2.8 cu. ft. bark, peat moss, vermiculite, bark ash, starter nutrient charge (with Gypsum), slow release nitrogen and dolomitic limestone. | |
| Osmocote Plus 15-9-12 | Everris |
E903206 | Standard 3-4 month release |
| Sight Savers 10X | Bausch & Lomb |
813434 | 10X magnification illuminated coddington |
| Nikon Mini Field Stereoscope | Nikon |
7314 | 20X magnification |
| Silicone II clear | GE |
159538 | 2.9 oz clear window & door caulk |
References
- Houston, D. R. A technique to artificially infest beech bark with the scale, Cryptococcus fagisuga (Lindinger). U.S. Forest Service. , Northeastern Forest Experiment Station. Broomhall, PA. (1982).
- Houston, D. R. American beech resistance to Cryptococcus fagisuga. Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Northeastern Forest Experiment Station. Washington, D.C. 38-42 (1983).
- Ehrlich, J. The beech bark disease: a nectria disease of Fagus, following Cryptococcus fagi. 10, 593-692 (1934).
- Papaik, M. J., Canham, C. D., Latty, E. F., Woods, K. D. Effects of an introduced pathogen on resistance to natural disturbance: beech bark disease and withdrow. 35, 1832-1843 (2005).
- Miller-Weeks, M. Current status of beech bark disease in New England and New York. Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Northeastern Forest Experiment Station. Washington, D.C. 21-23 (1983).
- Houston, D. R. Beech bark disease: The aftermath forests are structured for a new outbreak. J. For. 73, 660-663 (1975).
- Twery, M. J., Patterson, W. A. Variations in beech bark disease and its effects on species composition and structure of northern hardwood stands in central New. 14, 565-574 (1984).
- Jakubus, W. J., McLaughlin, C. R., Jensen, P. G., McNulty, S. A., et al. Alternate year beechnut production and its influence on bear and marten populations. Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. Evans, C. A., et al. , U.S. Forest Service, Northern Research Station. Newtown Square, PA. 79-87 (2005).
- Koch, J. L., Carey, D. W., Mason, M. E., Nelson, C. D. Assessment of beech scale resistance in full- and half-sib families. Can. J. For. Res. 40, 265-272 (2010).
- Koch, J. L. Beech bark disease: The oldest “new” threat to American beech in the United States. Outlooks Pest Manag. 21, 64-68 (2010).
- Koch, J. L., Mason, M. E., Carey, D. W., et al. Screening for resistance to beech bark disease: improvements and results from seedlings and grafted field selections. Proceedings of the 4th International Workshop on Genetics of Host-Parasite Interactions in Forestry. Palmieri, K., et al. , U.S. Forest Service, Pacific Southwest Research Station. Albany, CA. (2012).
- Leak, W. B. Fifty year impacts of the beech bark disease in the Bartlett Experimental Forest, New Hampshire. Northern J. Appl. For. 23, 141-143 (2006).
- Koch, J. L., Carey, D. W., et al. Controlled cross-pollinations with American beech trees that are resistant to beech bark disease. Proceedings of the 14th Central Hardwood Forest Conference. Yaussy, D. A., et al. , U.S. Forest Service, Northeastern Research Station. 358-364 (2004).
- Carey, D. W., Mason, M. E., Bloese, P., Koch, J. L. Hot callusing for propagation of American beech by grafting. HortSci. 48, 620-624 (2013).
- Koch, J. L., Carey, W. W., et al. The genetics of resistance of American beech to beech bark disease: knowledge through 2004. Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. Evans, C. A., et al. , U.S. Forest Service, Northern Research Station. Newtown Square, PA. 98-105 (2005).
