Introduction
De zebravis (Danio rerio) is een klein teleost soorten van oorsprong uit India, dat is een bruikbaar model organisme voor gedragsverandering 1 en medisch onderzoek 2,3. Zebravis worden ook vaak gebruikt bij het testen van verschillende farmacologische stoffen om hun impact op het gedrag karakteriseren. Diverse doseringen en schema van toediening zijn gebruikt om het gedrag van de zebravis na de toediening van verbindingen zoals stimulantia 4, anxiolytica 5 en ethanol 6-8 onderzoeken.
Ons laboratorium heeft het effect van verschillende schema ethanol toediening op zebravis angst en beweging in de goed gevalideerde licht / donker assay 9, 20, ook bekend als de scototaxic assay onderzocht. Een nieuwe wijze van toediening ethanol werd ontwikkeld om de efficiëntie voor herhaalde dagelijkse toediening toenemen gedurende een lange periode (21 dagen) 6 10-12. Hoewel deze methode is algemeen aanvaard, kan saldering zebravis de variabiliteit in de tijd genomen om te introduceren en te verwijderen van de vis uit de drug oplossing te verhogen. Daarom kan de exacte blootstelling aan de verbinding van belang variëren in de loop van een experiment met herhaalde toediening. Een methode die bronnen van fouten als gevolg van de variabiliteit in het vervoer tijden reduceert is dus wenselijk. Met onze methode kunnen we alle vissen tegelijk bewegen, waardoor identieke doseertijd per vis. Na blootstelling aan ethanol (hier beschreven) kunnen zebravissen worden getest in elke number gedrags- testen, waaronder die angst beoordelen. Doseren groepen van vis met behulp van de nieuwe methode heeft praktische toepassingen buiten het vermogen om nauwkeurig te repliceren en te standaardiseren dosering tussen onderwerpen en over groepen van vis. De komst van nieuwe software die het mogelijk maakt voor het volgen van meerdere vissen in een keer kan zien onderzoekers maken gebruik van onze methoden om herhaalbaarheid en nauwkeurigheid in hun experimenten. Gezien het wijdverbreide gebruik van zebravis als modelorganisme voor Behavioral Neuroscience, zal deze methode de efficiëntie en bruikbaarheid in de toekomst farmacologische studies te verhogen.
In het huidige paradigma, werd een herhaalde doseringsschema gebruikt die ongeveer weerspiegelt de menselijke drinken schema. Vissen werden willekeurig toegewezen aan één van drie groepen: controle, dagelijkse matige, of wekelijkse-binge. Het doseringsschema was 21 dagen duurden gekozen omdat het aanzienlijk belichtingstijden in eerdere studies 7 overschreden. Controlevissen ontvangen nul alcohol, ontving dagelijks matige vis 0,2% alcohol een keer per dag, en wekelijks binge-vis ontvingen 1,4% alcohol een keer per week. Het licht / donker taak werd gebruikt om angst te beoordelen na 2 dagen van terugtrekking. Dit is een relatief eenvoudige test te beheren met een rechthoekige arena waarin de wanden enerzijds zijn wit en anderzijds donker 9 gebruikt. Volwassen zebravissen robuust voorkeur aan de donkere kant van de arena onder controle condities 6,9,13. Toegenomen angst is operationeel gedefinieerd als aanzienlijk meer tijd in de donkere zone en verminderde angst kan worden aangenomen wanneer de vis besteedt relatief meer tijd in de lichte zone. Met motion-tracking software, kunnen andere informatieve variabelen ook worden gekwantificeerd, zoals gemiddelde snelheid, immobiliteit, meanderende, en zone overgangen 14.
De dosering methode ontwikkeld in ons laboratorium kan worden toegepast op elk onderzoek waarbij in water oplosbare verbindingen worden toegediend aan één of meer zebrafish. Veel andere farmacologische middelen die kunnen profiteren van deze methodiek worden momenteel getest in de zebravis. Gewoonlijk geteste verbindingen omvatten nicotine, chloordiazepoxide, buspiron en scopolamine, die zijn opgelost in een soortgelijke wijze ethanol; door mengen van de juiste hoeveelheid van de chemische stof in water. Daarom is het algemene toepassingsgebied van deze procedure is veel breder en niet beperkt tot ethanol. Bovendien na toediening van geneesmiddelen voor meerdere dagen, de licht / donker taak is slechts één van vele gedragstesten die kunnen worden toegepast. Na toediening van het geneesmiddel of tijdens de terugtrekking, andere populaire assays die kunnen worden gebruikt zijn onder andere de roman tank duiken-test 15 en tests van sociaal gedrag zoals shoaling 16. De volgende procedure zal een efficiënte methode van herhaaldelijk overbrengen groepen van vis of van individuele vissen in oplossingen die een farmacologische verbinding van belang te schetsen. Bovendien, het proces van het testen van angst met de licht / donker-testin groepen van vis die in intrekken na blootstelling aan lange lijsten van alcohol toediening worden beschreven.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedures en gedragsmatige testen werden goedgekeurd door MacEwan University's Animal Research Ethics Board onder protocol nummer 06-11-12, dat is in overeenstemming met de Canadese Raad voor Animal Care's richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren.
1. Bereid Doseren Tanks, Solutions, en het toedieningsschema
- Bereid een toedieningsschema dat de dieren worden toegediend in dezelfde omgeving en gedurende dezelfde tijd van de dag aan een verwart tijd of vertekenende visuele stimuli voorkomen.
- Verkrijgen van zoveel identiek, 1.5 L, duidelijke polypropyleen paai tanks als nodig is voor het aantal groepsgrootte. Gebruik groepen van 8 vissen per tank, waardoor voor 2 groepen van vis te testen per dag later in de procedure (zie stap 3). Gebruik een vuilwatertank en één doseertank per groep (2x totaal aantal groepen).
- Plaats 400 pm paai inserts in alle opslagtanks. Fziek de tanks met water leefgebied of omgekeerde osmose water op de juiste temperatuur (zebravis, 25-28 ° C) die overeenkomt met de temperatuur vis gewoonlijk ondergebracht bij.
LET OP: Er kunnen ongewenste chemische interacties tussen sommige drugs en de chemische bestanddelen van gebufferd leefgebied water. In deze situatie gebruik omgekeerde osmose water gebufferd met minimale of geen aquarium zouten voor toediening, en voor de controlegroepen. - Zorg ervoor dat de tanks zijn in een neutrale omgeving te conditioneren vis op externe visuele prikkels tijdens de dosering te vermijden.
- Plaats 400 pm paai inserts in alle opslagtanks. Fziek de tanks met water leefgebied of omgekeerde osmose water op de juiste temperatuur (zebravis, 25-28 ° C) die overeenkomt met de temperatuur vis gewoonlijk ondergebracht bij.
- Bereid de drug oplossing. Meng de geschikte hoeveelheid van het geneesmiddel met leefgebied water in de paai tanks. Bereid de 0,2% ethanoloplossing combineert 3 ml van een hoogwaardige ethanol (95% niet-gedenatureerde ethanol) met 1.497 ml water. Bereid de 1.4% ethanoloplossing door het combineren 21 ml ethanol met 1.479 ml water.
2. Verrekening Vis en Ethanol Administration Procedure
- Zorgvuldig netto vis uit hun habitat tanks en de overdracht naar de juiste vuilwatertank met de paai insert. Idealiter, het huis van de vis in de paaitijd insert te elimineren netten helemaal.
- Met alle vissen in hun respectieve deelneming tanks, til de paai plaatst uit de vuilwatertank en plaats deze in de juiste drug schoonwatertank (Figuur 1A).
- Noteer de dosering als voorgeschreven. Gebruik 30 min in ethanol oplossing voor de hier beschreven procedure.
- Indien mogelijk, assistenten helpen bij de overdracht van alle experimentele groepen aan de geneesmiddeloplossing tegelijkertijd nauwkeurige dosering te garanderen. Alternatief: breng één groep tegelijk en bijhouden van afzonderlijke groepen 'doseren keer (Figuur 1A).
- Aan het einde van de vereiste doseringsperiode, verwijder de vis uit de ethanoloplossing door voorzichtig optillen van de paai inzetstukout van de drug-oplossing en het plaatsen voorzichtig terug in de vuilwatertank.
- Zachtjes net de vis in de opslagtanks en plaats ze terug in hun leefgebieden tot de volgende geplande dosering tijd, of plaats de paai steek terug in de vuilwatertank te netting elimineren.
- Zoals eerder, indien mogelijk vermeld binnen de parameters van stallen materiaal, huis dieren in dezelfde tank en paai inzetstuk wordt gebruikt als vuilwatertank. Dit zal elimineren saldering helemaal tijdens de toediening procedure.
3. Behavioral Testen
- Verkrijgen van een licht / donker arena 9,5 cm breed en 55 cm lang en 9,5 cm diep met een witte waterdichte vloer (Figuur 1B). Plak wit en zwart waterdichte niet-reflecterend papier aan de binnenwanden van de arena met behulp van klittenband, waarbij de helft van de arena bedekt met witte en de helft bedekt met zwart. Vul de arena tot een diepte van 5 cm met leefgebied water bij een temperatuur van 25-28 ° C. Maintain deze temperatuur tijdens testen.
- Minimaliseer externe visuele prikkels door de aanleg van een witte driezijdige behuizing voor de arena te zijn gelegen in. Zorg ervoor dat de testruimte heeft diffuus overhead verlichting die niet reflecties op het wateroppervlak veroorzaakt, maar toch voldoende helder voor de beweging tracking software, of post -hoc handleiding kwantificering van videobeelden.
- Plaats de arena in de behuizing en zet de opname en bewegingsanalyse parameters van het gedrag tracking software. Stel de proef duur 5-15 min, afhankelijk van de onderzoeksvraag.
LET OP: Hier gebruikten we 5 min. - Vervoer de groep vissen te worden getest om het onderzoeksgebied in het leefgebied tank en plaats ze buiten de arena behuizing. Acclimatiseren de vis gedurende 10 minuten.
- Zachtjes net een vis uit de betreffende groep en plaats in het midden van de licht / donker-arena, en zorg ervoor dat de vis los wanneer het wordt evenwijdig aan de lange as van de arena om AVOid vertekenende de vis aan de lichte of donkere zone.
- Beginnen met opnemen gedrag onmiddellijk nadat het dier wordt vrijgelaten. Kijk voor alle software problemen met het bijhouden van de vis of voor vis springen of invriezen. Draai de arena 180 ° na de helft van de proefpersonen getest één verwart raakt door vooroordelen gevolg van welke kant van de arena is gericht naar het open uiteinde van de behuizing.
- Na de proefperiode is afgelopen, zachtjes net en haal de vis uit de arena om een vuilwatertank of leefgebied tank.
4. Analyse
- Onderzoeken de tijd doorgebracht in het licht versus donker zones. Voor elke groep en elke vis, het verkrijgen van de relatieve tijd doorgebracht in de lichte en donkere zones en analyseren met behulp van een one sample t-test (of Wilcoxon test voor niet-parametrische gegevens; verschil met (de helft van het totale proces tijd) 150 sec) te bepalen of groepen significant liever een ruimte boven de andere.
- Te vergelijken voorkeuren, berekenen een preference index door aftrekken van de tijd doorgebracht in de lichte zone van de tijd doorgebracht in de donkere zone en vergelijk de verschillen tussen groepen. t- tests kunnen worden gebruikt om twee groepen te vergelijken. Vergelijk meerdere groepen met een one-way variantie analyse met behulp van Tukey's HSD post hoc-test waar nodig (of de Kruskal-Wallis-test met Dunn's meervoudige vergelijking post hoc test voor niet-parametrische data).
- Vergelijk snelheid, aantal zone overgangen, meanderende en immobiliteit tussen groepen. Gebruik one-way variantie-analyse met behulp van Tukey's HSD post hoc-test waar nodig (of de Kruskal-Wallis-test met Dunn's meervoudige vergelijking post hoc test voor niet-parametrische data).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Om de nauwkeurigheid en controle farmacologische studies zebravis is het belangrijk om tijd de duur van ethanol toediening consistent en nauwkeurig beschreven behouden. Onze procedure kan het gemak en de doorvoer van de dosering procedure te verhogen. De toediening van ethanol op een wekelijkse-binge of dagelijks matige schema resulteerde in gewijzigde angst niveaus, gemeten met de licht / donker-test, in vergelijking met controles. Wanneer onderzocht twee dagen na de laatste toediening zebravis in de controlegroep (die geen alcohol ontvangen maar nog steeds verplaatst naar dosering tanks) toonde de verwachte gedragspatroon, met controlevissen uitgaven aanzienlijk meer tijd op de donkere kant van de arena ( figuur 2A) Soortgelijke naïeve zebravis in andere studies 6,9,13. Vis in de wekelijkse binge groep toonde geen voorkeur voor een van beide het licht of donker zones in de taak wanneer getest twee dagen na hun laatste ethanol administratie (Figuur 2B (figuur 2C); in tegenstelling tot de controlegroep. De voorkeur index bleek een significante verschil tussen controle en dagelijks matige groepen (figuur 2D). Er waren geen significante verschillen in zwemsnelheid of immobiliteit tussen groepen (tabel 1), en dus was dit effect niet op een motor tekort in de vis.
Figuur 1:. Transfer Procedure en de licht / donker arena Deze foto's illustreren de overdracht procedure (A) Ten eerste, de vissen bevinden zich in de overdracht tank (links).. Doseervat met ethanol wordt afgebeeld (rechts). (BC) Het verplaatsen van de vis uit de overdracht tank naar de ethanol-oplossing vereist de researcher aan de paai insert te bevrijden van de overdracht tank en in de ethanol-oplossing tank. (D) Het licht / donker arena zoals geïllustreerd gemeten 9,5 cm breed en 9,5 cm diep en 55 cm lang. White vloeren wordt gebruikt, samen met zwarte muren op de helft van de arena (links) en witte muren op de andere helft, het creëren van een lichte en donkere zone.
Figuur 2: Representatieve resultaten en trackplots ethanol doseringsprocedure op drie groepen van zebravissen na 2 dagen terugtrekking. (A) Een vertegenwoordiger trackplot van een enkele controle zebravis beweging pad gedurende de 5 min licht / donker-trial. Hieronder is dezelfde zebravis trackplot voorgesteld als een heatmap, die een gekleurde weergave van zebravis beweging gehele proces, gebaseerd op de tijd doorgebracht in de vis de locatie weergegeven door elke pixel. (B) A represdiger trackplot van één zebravis uit de wekelijkse binge-groep gedurende de 5 min licht / donker taak. Hieronder is de heatmap van dezelfde zebravis. (C) Een vertegenwoordiger trackplot van een enkele dagelijkse matige zebravis beweging gedurende de 5 min licht / donker-trial. Hieronder is de heatmap van dezelfde zebravis. (D) De voorkeur index werd berekend voor alle groepen door het aftrekken van de tijd doorgebracht in de lichte zone van de tijd doorgebracht in de donkere zone. Negatieve cijfers geven de voorkeur aan de donkere zone. Positieve cijfers geven de voorkeur aan het licht zone. Resultaten geven een significant verschil in voorkeur tussen controle en dagelijks matige groepen 2 dagen terugtrekking * p <0,05 (ANOVA). Let er ook een aanzienlijk voorkeur donker in de controlegroep, p <0,05 (één monster t-test, tijdsverschil van 0), en een significante voorkeur voor licht in de dagelijkse matige groep, p <0,05 (één monster <em> t-test, verschil met 0). Klik hier voor een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
| Snelheid | Onbeweeglijkheid | |
| (Cm / sec) | (Sec) | |
| 2-dagen Wd | 2-dagen Wd | |
| Controle (n = 13) | 9,1 ± 0,6 | 1,9 ± 0,6 |
| Binge (n = 14) | 9.8 ± 0.5 | 0,8 ± 0,2 |
| Chronisch (n = 15) | 10.3 ± 0.5 | 2,5 ± 1,0 |
Tabel 1: Gemiddelde snelheid en onbeweeglijkheid tijdens de licht / donker-test. De gemiddelde zwemmen snelheid (cm / sec) en immobiliteit (sec) van een representatieve groep van zebravissen na 2 dagen van het herroepingsrecht (gemiddelde ± SEM). Hier, geen significante verschillen in zowel snelheid of immobiliteit gevonden. Gebruikt met toestemming van Holcombe et al., (2013).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vorige studies met toediening van het geneesmiddel in de zebravis hebben gewoon vertrouwd op saldering vis om ze te vervoeren van hun huis tank in de drug oplossing 12,16. Saldering is niet altijd consistent en duurt vaak langer dan verwacht als gevolg van de ontsnapping respons van de zebravis, die aanzienlijke individuele variatie heeft. Traditionele overdrachtsmethoden, hoewel nuttig, kan worden verbeterd door de hoeveelheid van de totale tijd doorbrengen vis buiten water, evenals het verminderen van de hoeveelheid variabiliteit in overdrachtstijd tussen dieren. Naast het verbeteren praktisch Deze methode geeft onderzoekers de mogelijkheid om grote groepen vis dosis gelijktijdig in een oplossing voor een nauwkeurige tijd. Vorige methoden vereisen ofwel doseren een enkele vis, of een poging om tegelijkertijd netto hele groepen van vis. De voormalige is traag en vermindert throughput, terwijl de laatste is een lastige en moeilijke taak. Bovendien-motion tracking systemen die ceen beoordeling van het gedrag van meerdere vissen tegelijkertijd kunnen profiteren van de nauwkeurigheid van deze methode. Vis kon direct worden overgedragen van de paai inzetstuk in de shoaling arena, die ervoor zou zorgen in de buurt van gelijktijdige blootstelling aan de arena voor alle vissen.
Gebruik van deze nieuwe methode significante resultaten bij uitgevoerd op drie groepen zebravis gedurende een periode van 21 dagen. Controlevissen kreeg geen alcohol, dagelijks matige vissen kregen een kleine hoeveelheid alcohol eenmaal per dag, en wekelijks binge vissen kregen een grote dosis alcohol eenmaal per week gedurende de periode van 21 dagen. In het licht / donker taak heeft de dosering procedure niet de normale voorkeur van de zebravis wijzigt voor de donkere zone onder controle condities. Echter, na 2 dagen van ethanol terugtrekking, zebravis in de dagelijkse matige groep de voorkeur aan de lichte zone van de arena, een omkering van voorkeur. Statistische analyse bevestigt een significante verandering in de zone voorkeur. Het is mogelijk dat de dosering proceduopnieuw resulteerde in ethanol zoekgedrag door een geconditioneerde plaats voorkeur (CPP), de vis die ethanol (een appetitive stimulus), en de witte zone voorkeur vanwege de relatieve gelijkenis met de lichte dosering gebied. Recent onderzoek toont aan dat CPP kan in zebravis en in gebieden waar zebravis gedoseerd met ethanol 17,18. Wekelijks binge-vis toonde geen voorkeur 2 dagen na ethanol, en hoewel bewijs voor neurale mechanismen goed voor deze bevinding ontbreekt, is het mogelijk dat zeldzaam maar grote doses alcohol de hersenen kan beschadigd worden waardoor vissen geen onderscheid tussen zones.
Een ander voordeel dat deze dosering procedure verleent de onderzoekers is de generaliseerbaarheid. Zoals beschreven, de procedure produceert heldere en bruikbare resultaten in de zebravis. Echter, wordt de procedure niet alleen beperkt tot de zebravis. De beperkingen van de procedure zijn gerelateerd aan de omvang en grenzen van de dosering tanks, dieren en testing inrichting, alsmede het vermogen om gegevens te analyseren. Met het gebruik van motion tracking software, hebben recente studies veel extra variabelen onderzocht gedurende een proefperiode. White vermijden gewenning, pleinen gekruist, motoriek gewenning, latency naar de witte zone, onregelmatig zwemmen, thigmotaxis (tijd doorgebracht in de buurt van de arena muren), en risico-evaluatie kan ook worden gekwantificeerd 14. Het is denkbaar om deze procedure in andere modelorganismen, zoals goudvissen, die eerder gebruikt om de rol van tolerantie en intrekking 19 onderzoeken. Onderzoekers hoop de effecten van andere farmacologische agentia of giftige stoffen te onderzoeken, het gebruik van andere gedrags- testen, of andere mariene en zoetwater dieren, kan ook gebruik maken van deze eenvoudige methode.
Met dit protocol is eenvoudig en effectief. Echter, als de resultaten zijn niet zoals verwacht, overweeg dan het oplossen van de motion-tracking systeem om een goede verzameling van gegevens te garanderen. Tracking moet glad en nauwkeurig over de proeven zijn. Het volgsysteem te registreren van de beweging van het lichaam midden van de vis te allen tijde. Elke springen of onvoorspelbare bewegingen van de tracking dot vanwege visuele artefacten, zoals licht reflecties op het water rimpelingen, of oneigenlijk volg instellingen kunnen de resultaten verwarren. Sommige verschillen in resultaten kunnen ontstaan door kleine verschillen in de arena, het ontwerp of de dosering omgevingen. Om zeker te zijn van replicatie, zou de arena zoals beschreven, met name bij gebruik van een witte vloer te volgen efficiëntie in zebravis maximaliseren. Met andere vissen die lichter van kleur moet een donkere vloer worden gebruikt om te helpen bij het volgen van beweging. Ook het doseren van de vis in een omgeving die vrij is van visuele stimuli die eventueel zou kunnen vertekenen de vis is uiterst belangrijk. Elke aparte kleur, patroon of tint die waarneembaar om de vis konden resultaten te beschamen. Een neutrale, licht gekleurde achtergrond vergelijkbaar met die in de behuizing wordt aanbevolen. </ P>
Hoewel het mogelijk is om deze methode als nodig is voor andere vissoorten te wijzigen, kunnen de resultaten variëren in termen van aangeboren licht / donker voorkeur 20-21. Het is ook belangrijk op te merken zelfs de hier beschreven werkwijze leidt nog wat stress. Hoewel saldering aanzienlijk wordt verminderd, de procedure is nog altijd een zeer korte periode van tijd waar de vis moet worden uit water, eventueel het induceren van een reactie op stress. Ramsay en collega's 22 vond dat gesaldeerd zebravis had ten minste het dubbele van het niveau van cortisol in hun lichaam in vergelijking met degenen die niet gecompenseerd werden. Omdat cortisol is een hormoon gekoppeld stress 11 kan deze de gedragsreactie die gemeten veranderen. Terwijl onze methode vermindert het opleveren, is het niet elimineren. Echter, het geeft onderzoekers de mogelijkheid om de incidentie van netting elimineren indien zij wensen door woningcorporaties zebravis in de paai inserts. Toekomstige studies moeten onderzoeken of het gebruik van de paai insert voor de overdracht van vis kan de stress respons ten opzichte van netting verlagen. Daarnaast is het van cruciaal belang precieze dosering tijde over en overdrachtstijden tussen groepen. Veranderingen in de dosering tijden of grote verschillen in de tijd die buiten water resultaten zou kunnen veranderen. Eventuele circadiane te verminderen, is het ook essentieel om de vis te doseren tijdens hetzelfde tijdstip van de dag. In het huidige experiment vissen werden gedoseerd en getest 10:00-2:00. Nauwkeurige en betrouwbare replicatie van deze procedure steunt herhalen het protocol nauwkeurig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs erkennen Joshua Gallup voor het gebruik van zijn fotografie apparatuur die wordt gebruikt voor Figuur 1. Dit werk werd ondersteund door een Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) Canada Discovery subsidie (tot TJH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Three shelf benchtop housing system |  Aquatic Habitats |
N/A | |
| 1.5 L Spawning tank w/400 μm baffle | Aquatic Habitats |
N/A | |
| Pure Grain Ethanol | Luxco, INC |
N/A | |
| Ethovision XT Motion tracking software | Noldus Information Technology |
||
| Pipette | Eppendorf Canada |
||
| Light/Dark Arena | Custom | Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long. |
References
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
- Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
- Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling. Behavioural brain research. , (2012).
- Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).
- Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish. PLoS ONE. 8 (5), (2013).
- Mathur, P., Guo, S. Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish. Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).
- Dlugos, C., Rabin, R. Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).
- Maximino, C., et al. Scototaxis as anxiety-like behavior in fish. Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).
- Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio). Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).
- Egan, R. J., et al. Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish. Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).
- Gebauer, D. L., et al. Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).
- Serra, M. C., Mattioli, R. Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment. Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).
- Maximino, C., et al. Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain. Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).
- Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T.
- Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).
- Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure. Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).
- Renninger, S. L., et al. Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish. Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).
- Crawshaw, L. I., et al. Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol. Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).
- Hamilton, T. J., Holcombe, A. Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning. Proceedings of the Royal Society B. , (2014).
- Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress. Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).
- Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour. Conservation Physiology. 2 (1), (2014).
