마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크
Summary
이 방법은 마우스 모델에서 신규 한 약물의 약물 동력학을 평가하기 위해, 경동맥을 통해 정상 약액을 공급할 목적으로 개발되었다.
Abstract
신규 시스템에 약물, 약물 조합, 또는 약물 전달의 사용을 제안하는 경우, 하나는 연구 모델에서 약물의 약물 동력학을 평가해야한다. 마우스 모델의 사용은 종종 전임상 신약 개발 및 약물 개발 1-8에서 중요한 단계이다 같이, 균일 한, 재생 가능한 방법으로 마우스에 약물을 도입하는 시스템을 설계 할 필요가있다. 이상적으로, 시스템이 설정 시간 걸쳐 일정한 간격으로 혈액 샘플의 수집을 허용한다. 질량 분광기 약물 농도를 측정 할 수있는 능력은, 개별 마우스 1, 9, 10 시간에 걸쳐 혈장 약물 농도의 변화를 따라 조사원을 허용했다.이 연구에서, 파크 리 탁셀은 지난 3 연속 동맥 주입으로 트랜스 제닉 마우스에 도입 하였다 시간, 혈액 샘플을 동시에 설정 시점에서 레트로 안와 출혈에 의해 촬영되는 동안. 경동맥 주입은 경정맥 주입에 잠재적 인 대안, 요소 등이다유방암 또는 다른 장애물은 경정맥 주입 비실용적. 이 기술을 사용하여, 혈장 및 조직에서의 파클리탁셀 농도 경정맥 주입에 비해 비슷한 수준을 달성 하였다. 이 튜토리얼에서, 우리는 성공적으로 개별 마우스 모델에 최적화 된 카테터를 준비하여 경동맥 동맥 카테 테르를 꽂다하는 방법을 보여줍니다, 다음 삽입하고 마우스 경동맥 동맥에 카테터를 확보, 뒷면을 통해 카테터의 끝을 스레드하는 방법을 보여줍니다 마우스의 목, 마약 유입의 제어 속도를 제공하기 위해 펌프에 마우스 후크. 여러 낮은 볼륨 복고풍 궤도 출혈은 시간이 지남에 따라 혈장 약물 농도를 분석 할 수 있습니다.
Introduction
경동맥을 통한 약물 주입 장비 및 기술을 최적화하여 신뢰성 있고 재현성있게 수행 될 수있다. 그것은 세부 사항에 미세 제어 및주의가 필요합니다 않지만 절차는 복잡하지 않습니다. 우수한 관리 및 손재주가 경동맥을 격리하며 일반적으로 연습을 통해 획득 할 수 카테터를 삽입 할 필요가있다. 숙련 된 기술자에 의해 수술 한 시간을 초과 할 수 없습니다. (마우스, 실제 약물 주입에 반응 할 수있다) 성공적인 수술 후 마우스 정상 건강 나타나야과 약물 (들)은 제어 된 균일 한 연속 투여 량으로 투여 될 수있다. 혈액 샘플 경동맥 이외 사이트에서 취해 져야한다; 복고풍 궤도 출혈은 약물 농도 분석을위한 수집하기 쉽고 만족스러운 증명했다.
최적의 크기와 모양의 카테터는 성공적인 주입 (11)을 수행하기에 매우 귀중한 자산이다. 우리는 카테터를 사용할 수 commerciall 발견Y는 종종 너무 큰 및 / 또는 마우스 경동맥에 편리하게 액세스 할 수 있도록 너무 융통성이 있어야합니다. 이는 주입 주사기로 마우스를 연결하는 데 사용되는 폴리에틸렌 튜브에서 패션 카테터에 바람직 증명. 따라서, 모든 튜브, 커넥터 및 주입 바늘 조립체를 단순화 일관된 치수로 하였다. 이 기술을 사용하여, 그것이 여전히 표시하며, 경동맥 혈류가 카테터가 초기에 고정 된 후까지 복원되지 지점을지나 동맥 내로 카테터의 팁을 눌러 할 필요가 없다. 이는 동맥 천공이나 카테터를 갖는 유해성 혈류의 높은 압력에 의해 밀려 감소시킨다. 카테터 디자인은 여기에서 이렇게 봉합 잘 카테터를 확보 외과 테이프가 우선 순위이며,이 제자리에 고정하기 위해 "범프"통합하지 않습니다.
주입은 임상 투여 잘 모방로서, 일반적인 정맥 내 볼 루스 주사에 바람직 할 수있다예컨대 탁산 3, 12, 여기서 설명 13. 기술로서 약물 원래 경정맥 또는 대퇴부 정맥에 대한 액세스가 유방 종양의 성장 및 / 또는 삽입 영역의 과도한 혈관 형성에 의해 배제 된 상기 마우스 모델에 투여 할 수 있도록 개발되었다. 이 방법은 종종 심지어 종양이없는 마우스에 적합 할 수 있습니다 : 경정맥 벽의 성향이 더 실패 삽입과 완료 실패의 결과 찢어 때문에 분리하고 경동맥을 catheterizing하지만 약간 더 침습적, 우리가하는 것이 바람직 경정맥에 발견 3 시간 시간 코스.
여기에 표시된 결과가 C57BL / 6J에서 동안 (사내에서 자란) 마우스, 우리는 성공적으로 형질 전환되어 조작 마우스 모델에서의 약물 동력학을 따라, FVB 및 혼합 균주를 포함하여 마우스의 여러 변종으로 파클리탁셀을 고취하기 위해이 기술을 사용했다 세포 수송 기능을 다운 조절한다. 혈액과 조직 샘플을 paclitax의 예상 수준을 보여 주었다 수집 된엘, 경정맥 주입 한 후 본 레벨의 범위이다. 이 기술은 다른 마우스 모델 및 기타 주입 솔루션과 동일하게 작동 할 것으로 예상 할 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
경동맥 동맥 주입은 파클리탁셀의 약물 동태의이 연구에서 중요한 기술이다. 경동맥 동맥 주입 빠르게 순환 시스템 (14)에 걸쳐 약물을 분배하는 방법이다. 3 시간 주입은 일시 주사보다 탁 산계로 약물의 임상 관리의 가까운 모방이다. 수술 신뢰성 한 개인에 의해 수행 될 수 있으며, 수술 시간이 비교적 짧고, 성공률은> 75 %이다. 샘플이 수집 된 후, 이들은 적절한 방법으로 분석해야한?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는이 프로젝트에 그들의 지원을위한 FCCC 실험 동물 시설을 인정하고 싶습니다. 우리는 혈장과 조직에 파클리탁셀 수준을 분석하는 그들의 도움 울프 Laboratories, Inc.의 감사합니다. 이 작품은 국립 보건원 EHB에 K01CA120091을 부여하고, CA06927 폭스 체이스 암 센터에 의해 지원되었다.
Materials
| Table of specific reagents and equipment: | Source: | Catalog Number | Comments |
| Polyethylene tubing 0.024”OD X 0.011”ID | Braintree Scientific, Inc. | PE10 | |
| Stainless steel port plug (30 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | NB-30 | |
| 2 Stainless steel connector plugs (28 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | PP-28 | Slightly larger than PE tubing ID, to fit snugly and keep a tight seal. |
| 3 Blunted needles (30 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | C-30 | |
| 3 1cc syringes | Becton, Dickinson and Co. | 309659 | |
| Sterile 0.9% Saline solution | Hospira | 0409-7984-37 | |
| Cath-Loc HGS Heparin/Glycerol Solution | Braintree Scientific, Inc. | HGS | |
| Silk suture | Braintree Scientific, Inc. | SUT-S 113 | |
| Vanna Scissors (micro-scissors) | World Precision Instruments | 14122 | This model has a curved tip, but straight-tip scissors work as well. |
| Hartman Mesquito Hemostatic Forceps | World Precision Instruments | 501705 | |
| Betadine Swabsticks | Perdue Products L.P. | BSWS1S | |
| Bupivacaine | Hospira | 0409-1160-01 | May be replaced with Lidocaine, or similar local anesthesia. |
| Paclitaxel | LC Laboratories | P-9600 | |
| Methanol | Sigma-Aldrich | 32213 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes, Heparinized | Fisher Scientific | 22-362-566 | |
| Capillary Tube Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
| C57BL/6J mice | Fox Chase Cancer Center, Laboratory Animal Facility in-house-bred | ||
| API 4000 Q-Trap mass spetrometer | Applied Biosystems |
References
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