अलगाव और murine महाधमनी के छांटना; हृदय रोग के अध्ययन में एक बहुमुखी तकनीक
Summary
Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.
Abstract
Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.
Introduction
महाधमनी ऑक्सीजन युक्त रक्त और शरीर के अन्य लोगों के समान भागों के साथ शरीर की आपूर्ति हृदय समारोह में एक निर्णायक भूमिका निभाता है, बीमारी के लिए अतिसंवेदनशील है। आम महाधमनी रोगों भोजन, धूम्रपान और आसीन जीवन शैली एक सहित आनुवांशिक और पर्यावरणीय कारकों का परिणाम हैं जो atherosclerosis और धमनीविस्फार, शामिल हैं। Atherosclerosis आम तौर पर पुरानी हाइपरलिपिडीमिया 2 के साथ रोगियों में पाया महाधमनी दीवार के लिए एक कैल्शियम और लिपिड आधारित पट्टिका का बयान है। Aneurysms अंततः तीन टूटना करने के लिए ले जा सकता है जो एक बढ़ा व्यास द्वारा पीछा महाधमनी और पोत दीवार के thinning के संरचनात्मक घटकों, की गिरावट की विशेषता है।
पशु मॉडलों की बीमारी और संभावित उपचार की प्रभावकारिता के तंत्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल महत्वपूर्ण उपकरण हैं। हृदय अनुसंधान में इस्तेमाल आम पशु मॉडल, विशेष रूप से संवहनी और चयापचय विकारों की जांच के लिए अनुसंधानऐसे अपोलीपोप्रोटीन ई जीन पीटा और कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर जीन पीटा चूहों के रूप में 4 लिपिड स्तर में परिवर्तन करने के लिए आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों शामिल हैं। रोग और उपचार की प्रभावकारिता के तंत्र का मूल्यांकन करने के तरीकों में से बहुमत महाधमनी के अलगाव और छांटना भी शामिल होगा।
महाधमनी स्थानीय और अलग-थलग हो जाने के बाद, morphometric विश्लेषण ऐसे धमनीविस्फार की उपस्थिति, आम तौर पर व्यास 5 में एक अधिक से अधिक से अधिक 50% की वृद्धि के रूप में परिभाषित के रूप में निर्धारित किया जा सकता है। सीटू विश्लेषण में आवश्यक पूरा होने पर, महाधमनी आगे के विश्लेषण के लिए excised जा सकता है। एक excised महाधमनी ऐसे प्रोटीन और / या जीन अभिव्यक्ति assays के रूप में या आणविक अध्ययन का संचालन करने के लिए जमे हुए फ्लैश किया जा सकता है 4% paraformaldehyde का उपयोग कर तय की और बाद में, एम्बेडेड sectioned और histological विश्लेषण के लिए दाग। महाधमनी के histological विश्लेषण इस तरह के संरचनात्मक गिरावट, पट्टिका गठन, और leukocytes की घुसपैठ के रूप में महाधमनी रोग के आम सुविधाओं का प्रदर्शन कर सकते हैं <समर्थन> 6,7। इसके अतिरिक्त, एक excised महाधमनी बाद में इन विट्रो अध्ययन में 7 की एक किस्म के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जो endothelial और चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं सहित प्राथमिक सेल लाइनों को अलग-थलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
वर्तमान में, महाधमनी रोग के इस में गहराई लक्षण वर्णन उपलब्ध कराने के साथ ही आगे हृदय रोग का अध्ययन करने के उपकरण के साथ शोधकर्ताओं प्रदान करने के लिए कोई अन्य तरीके हैं। ऐसे चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग, गणना टोमोग्राफी और अल्ट्रासोनोग्राफी के रूप में रूपरेखा इमेजिंग लेकिन इस छोटे जानवरों में मुश्किल है और पर्याप्त प्रौद्योगिकी के साथ एक डिवाइस प्राप्त आठ महंगा है, आकृति विज्ञान महाधमनी का मूल्यांकन करने के लिए करीब तरीके हैं। अमर सेल लाइनों हालांकि इन कोशिकाओं के कृत्रिम प्रकृति सेल जीवन चक्र और apoptosis 9 पर प्रभाव का अध्ययन करने में सीमित कर रहे हैं रोग और उपचार की प्रभावकारिता के संभावित तंत्र, जांच करने के लिए खरीदा जा सकता है।
के समग्र लक्ष्यइस पांडुलिपि हृदय रोग की जांच में murine महाधमनी के बाँझ अलगाव और छांटना प्रदर्शित करने के लिए है।
Protocol
Representative Results
Discussion
Aortic disease can lead to significant systemic pathology and possibly death in severe cases. Treatment options are currently limited therefore continued research in the field is necessary10. Murine models are ideal to further study disease progression and potentially therapeutic options4. Therefore, the successful completion of the method described in this manuscript will provide investigators with the tools to measure disease progression and drug efficacy.
This techniq…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों कोई स्वीकृतियां है।
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% Ethanol | Fisher | 07-678-001 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5368-10PAK | |
| Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| Sterile Gauze | Dukal Corporations | 1312 | |
| 25 Gauge Needle | BD | 305122 | |
| 10ml Syringe | BD | 309604 |
References
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