単離とマウス大動脈の切除。心血管疾患の研究で多彩なテクニック
Summary
Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.
Abstract
Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.
Introduction
大動脈は、酸素化された血液及び身体の他の同様の部分とボディを供給する血管機能において重要な役割を果たしている疾患に感受性である。一般的な大動脈疾患は、食事、喫煙と座りがちな生活1を含む、遺伝的要因と環境要因の結果であるアテローム性動脈硬化症や動脈瘤が含まれる。アテローム性動脈硬化症は、一般的に、慢性高脂血症2の患者で見つかった大動脈壁にカルシウムおよび脂質ベースのプラークの沈着である。動脈瘤は、最終的に3を破裂させる可能性があり拡径続い大動脈血管壁の菲薄化の構造成分の分解によって特徴付けられる。
動物モデルは、病気や潜在的な治療法の有効性のメカニズムを研究するために使用される重要なツールである。心血管の研究に使用される一般的な動物モデルは、特に、血管および代謝障害を調査研究そのようなアポリポタンパク質E遺伝子ノックアウトおよび低密度リポタンパク質受容体遺伝子ノックアウトマウス4などの脂質レベルを変化させる遺伝的に改変されたマウスを含む。疾患及び治療の有効性の機構を評価するための方法の大部分は大動脈の単離および切除を含むであろう。
大動脈は、ローカライズされ単離されると、形態学的分析は、このような動脈瘤の存在、典型的には、直径5で50％以上の増加として定義されるように、決定することができる。 in situ分析必要が完了したら、大動脈を、さらなる分析のために切り出すことができる。切除された大動脈は、タンパク質および/または遺伝子発現アッセイまたは分子的研究を行うために急速冷凍することができ、4％パラホルムアルデヒドを用いて固定し、後で、包埋し、組織学的分析のために染色した。大動脈の組織学的分析は、そのような構造劣化、プラーク形成、および白血球の浸潤として大動脈疾患の共通の特徴を示すことができる<SUP> 6,7。さらに、切除された大動脈は、その後in vitro試験7のさまざまな目的で使用することができ、内皮細胞および平滑筋細胞を含む初代細胞株を単離することができる。
現在、大動脈疾患のこの深いキャラクタリゼーションを提供するだけでなく、さらなる心臓血管疾患を研究するためのツールを研究者に提供するための他の方法はない。例えば、磁気共鳴画像のような画像診断法は、コンピュータ断層撮影および超音波検査は、形態学的に大動脈を評価するための最も近い方法であるが、これは、小動物では困難であり、適切な技術と装置を得ることが8に高価である。不死化細胞株は、しかしながら、これらの細胞の人工的な性質は、細胞のライフサイクルおよびアポトーシス9への影響を研究に制限されている疾患および治療 の有効性の潜在的なメカニズムを調査するために購入することができる。
の全体的な目標この原稿は、心血管疾患の調査にマウス大動脈の無菌分離および切除を実証することである。
Protocol
Representative Results
Discussion
Aortic disease can lead to significant systemic pathology and possibly death in severe cases. Treatment options are currently limited therefore continued research in the field is necessary10. Murine models are ideal to further study disease progression and potentially therapeutic options4. Therefore, the successful completion of the method described in this manuscript will provide investigators with the tools to measure disease progression and drug efficacy.
This techniq…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は全く確認応答がありません。
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% Ethanol | Fisher | 07-678-001 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5368-10PAK | |
| Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| Sterile Gauze | Dukal Corporations | 1312 | |
| 25 Gauge Needle | BD | 305122 | |
| 10ml Syringe | BD | 309604 |
References
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