אלקטרו הקלטה בו זמנית ומייקרו-הזרקות של סוכנים מעכבים במוח מכרסם
Summary
Here, we craft a glass pipette with dual functions: inhibition of deep brain structures by microinjections of drugs and real-time monitoring of their effects through simultaneous electrophysiological recordings.
Abstract
כאן אנו מתארים שיטה לבניית "injectrode" שימוש יחיד באמצעות חלקים מסחריים נגישים ובמחיר סבירים. מערכת חיטוט פותחה המאפשרת להזרקה של תרופה בעת הקלטת אותות אלקטרו מהאוכלוסייה העצבית הפגועה. שיטה זו מספקת אלטרנטיבה פשוטה וחסכונית לפתרונות מסחריים. פיפטה זכוכית שונה על ידי שילוב שלו עם מזרק ונימת כסף. Injectrode מחובר למשאבת microsyringe מסחרית עבור משלוח סמים. התוצאה היא טכניקה המספקת משוב פרמקודינמיקה בזמן אמת באמצעות אותות תאיים רבת יחידה שמקורם מהאתר של אספקת סמים. כהוכחה של מושג, הקלטנו פעילות עצבית מcolliculus מעולה שהושרו על ידי הבזקי אור בחולדות, במקביל עם משלוח של תרופות דרך injectrode. קיבולת הקלטת injectrode מאפשרת אפיון הפונקציונלי של injאתר שיקוף העדפת שליטה מדויקת הלוקליזציה של אספקת סמים. יישום של שיטה זו גם חורג הרבה מעבר למה שהפגין כאן, כבחירה של חומר כימי נטענה לתוך injectrode היא עצומה, כולל איתור סמנים לניסויים אנטומיים.
Introduction
איון של אזורים בקליפת המוח וגרעינים תת-קליפת המוח הוא חשוב בחקר יחסים פונקציונליים בין מבנים השונים במוח 2-4. הספרות האחרונה העסיקה כימית או טכניקות קריוגני פסד של פונקציה כדי ללמוד את התפקיד של מבני מוח 2,5. בהקשר לmicroinjections התרופתי, בנפחים קטנים של תרופות יכולים להינתן לאזור במוח בקצב מבוקר תוך מזעור הנזקים נלווים ל6,7 הרקמה הסובבת. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לספק אגוניסטים ספציפיים, אגוניסטים הפוך או יריבים כדי לחקור את ההשפעה של מטרות תרופתיות שונות על פעילות עצבית. יכולים להיות גם למדו אפקטים כגון על ידי מדידת שינויים בתגובות עצביות ממקומות מרוחקים, המאפשרת לחוקרים ללמוד את היחסים בין מבנים בקליפת המוח וקורטיקליים שונים.
הנה, אנחנו מדגימים את ההרכבה של מכשיר, injectrode, מסוגל boה הקלטת אותות אלקטרו ומתן כמויות קטנות של סמים במיקום היעד. אנחנו מדגימים את היכולות של מערכת זו על ידי הזרקת GABA, מעכב משותף של פעילות עצבית, בcolliculus מעולה החולדה. אזור זה הוא רגיש לגירוי חזותי, אשר אפשר לנו להשתמש בפעילות multiunit עוררה חזותי כדי לאשר לוקליזציה injectrode. ההפיכות של איון הוערכו על ידי ההתאוששות של פעילות עצבית נורמלית לאחר תום הזרקת GABA.
היכולת לעקוב אחר פעילות יחידה רבת מאתר ההזרקה מאפשרת כוונון העדין של שיעורי ההזרקה וכרכים דרושים כדי להשיג את התגובה הפרמקודינמית הרצויה. לכן, יתרון של שיטה זו הוא פוטנציאל הגבלה של נזק לרקמות שנגרמו על ידי microperfusion, מאז הכרכים היעילים הקטנים מוזרקים. הפרוטוקול המוצע מספק שיטה יעילה עלות ליצירת necessar החומרה חד פעמיy לניסויי ניהול שבו משלוח סמים והקלטת פעילות עצבית המקומית הוא רצויה.
Protocol
Representative Results
Discussion
הפרוטוקול המוצע נועד לפתור את האתגרים הנובעים משיטות איון הפיכים הנוכחיות. באופן ספציפי, הפרויקט הזה במטרה לשכלל את השיטות המשמשות לmicroinjections הכימי של חומרי ויסות פעילות עצבית, במיוחד במבני מוח עמוקים. אתגר טכני המתעוררים מסוג זה של התקנה הוא את הצורך בשני הבדיקות שcol…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from CIHR (MOP231122) and NSERC (RGPIN-2014-06503). We would like to thank Geneviève Cyr for her help preparing experiments and supervising laboratory work. MAL received a scholarship from The Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Injection pump (UltraMicroPump III) | WPI | #UMP3 | |
| Injection console (Micro4 Controller) | WPI | #SYS-MICRO4 | |
| Hamilton syringe | Hamliton | (80301) 701LT 10 µL SYR | Syringes between 5 and 10 μL used |
| Gel cyanoacrylate adhesive | Krazy Glue | KG86648R | The gel form is easier to apply on the shaft of the 30G hypodermic needle |
| Glass pipettes | WPI | #TW100F-4 | Thin wall, 1mm OD, 0.75mm ID with filament pipettes used |
| 720 Needle Pipette Puller | Kopf | 720 | |
| Silver wire | A-M Systems, Inc. | 782500 | Bare 0.010” |
References
- Martin, J. H., Ghez, C. Pharmacological inactivation in the analysis of the central control of movement. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 145-159 (1999).
- Ponce, C. R., Hunter, J. N., Pack, C. C., Lomber, S. G., Born, R. T. Contributions of indirect pathways to visual response properties in macaque middle temporal area MT. The Journal Of Neuroscience The Official Journal Of The Society For Neuroscience. 31 (10), 3894-3903 (2011).
- Lomber, S. The advantages and limitations of permanent or reversible deactivation techniques in the assessment of neural function. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 109-117 (1999).
- Malpeli, J., Schiller, P. A method of reversible inactivation of small regions of brain tissue. Journal Of Neuroscience Methods. 1 (2), 143-151 (1979).
- Lomber, S. G., Payne, B. R., Horel, J. A. The cryoloop: an adaptable reversible cooling deactivation method for behavioral or electrophysiological assessment of neural function. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 179-194 (1999).
- Gonzalez-Perez, O., Guerrero-Cazares, H., Quiñones-Hinojosa, A. Targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants. Journal Of Visualized Experiments. (46), (2010).
- Hupé, J., Chouvet, G., Bullier, J. Spatial and temporal parameters of cortical inactivation by GABA. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 129-143 (1999).
- Casanova, C., McKinley, P., Molotchnikofff, S. Responsiveness of Reorganized Primary Somatosensory (SI) Cortex after Local Inactivation of Normal SI Cortex in Chronic Spinal Cats. Somatosensory & Motor Research. 8 (1), 65-76 (1991).
- Malpeli, J. Reversible inactivation of subcortical sites by drug injection. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 119-128 (1999).
- Minville, K., Casanova, C. Spatial frequency processing in posteromedial lateral suprasylvian cortex does not depend on the projections from the striate-recipient zone of the cat’s lateral posterior-pulvinar complex. Neuroscience. 84 (3), 699-711 (1998).
- Diao, Y., Wang, Y., Xiao, Y. Representation of the binocular visual field in the superior colliculus of the albino rat. Experimental Brain Research. 52 (1), 67-72 (1983).
