Mononuclear कोशिकाओं की EAE के साथ चूहे के केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र से अलगाव
Summary
हम इस वीडियो में प्रदर्शन कैसे प्रयोगात्मक autoimmune Encephalomyelitis के साथ चूहों के केंद्रीय तंत्रिका तंत्र से mononuclear कोशिकाओं को अलग करने के लिए.
Abstract
एक autoimmune रोग केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (CNS) प्रयोगात्मक autoimmune (EAE, 1) Encephalomyelitis, या जैसे पोलियो, Lyme neuroborreliosis, या neurosyphilis सीएनएस के एक संक्रमण के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के रूप में प्रणाली, के लिए निर्देशित अध्ययन चाहे, यह अक्सर है CNS-घुसपैठ प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने के लिए आवश्यक है.
हम इस वीडियो प्रोटोकॉल में प्रदर्शित कैसे EAE के साथ एक चूहे के सीएनएस से mononuclear कोशिकाओं (एमएनसी) को अलग करने के लिए. इस प्रक्रिया का पहला कदम एक नमकीन समाधान करने के लिए सुनिश्चित करें कि कोई रक्त रक्त वाहिकाओं सिंचाई सीएनएस में रहता है के साथ एक कृंतक के हृदय छिड़काव की आवश्यकता है. किसी भी रक्त संदूषण कृत्रिम रूप से स्पष्ट सीएनएस घुसपैठ बहुराष्ट्रीय कंपनियों की संख्या में वृद्धि होगी और घुसपैठ प्रतिरक्षा स्पष्ट संरचना बदल सकता है. हम तो प्रदर्शन कैसे और बाद dilaceration के लिए चूहे के मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी को दूर करने के लिए एक एकल कोशिका निलंबन तैयार. इस निलंबन एक दो परत Percoll ढाल पर बहुराष्ट्रीय कंपनियों को अलग अलग है. धोने के बाद, इन कोशिकाओं को फिर किसी भी आवश्यक प्रक्रिया से गुजरना करने के लिए तैयार हैं.
Mononuclear इस प्रक्रिया का उपयोग करने के लिए अलग कोशिकाओं व्यवहार्य हैं और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी, प्रवाह cytometry (FACS), या जैव रसायन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यदि तकनीक बाँझ शर्तों के तहत किया जाता है (एक टिशू कल्चर हुड में बाँझ उपकरणों का उपयोग कर) कोशिकाओं को भी टिशू कल्चर माध्यम में हो जा सकता है. एक दिया सेल की आबादी आगे या तो चुंबकीय जुदाई प्रक्रियाओं या एक FACS का उपयोग कर शुद्ध कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
इस प्रक्रिया है, सभी जीवित पशुओं को शामिल प्रक्रियाओं के रूप में, अपने संस्थान के पशु का उपयोग करें और देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए. हम अनुशंसा करते हैं कि एक पशुचिकित्सा या एक पशु चिकित्सा तकन?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS, 1x, sterile | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14190-250 | |
| Cell strainer, 70 um | Tool | Fisher | 08-771-2 | |
| Percoll | Reagent | Sigma | P1644 |
References
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Visualized Experiments. 5, .
