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Medicine

की प्रभावकारिता का मूल्यांकन Published: May 29, 2015 doi: 10.3791/52743
Automatic Translation
1, 1, 2, 1
1Department of Biology, University of Padua, 2Department of Medical Diagnostic Sciences & Special Therapies, University of Padua

Introduction

मूत्राशय कैंसर संयुक्त राज्य अमेरिका 1 में लगभग 75,000 नए मामले हर साल के साथ, मूत्रजननांगी पथ का सबसे आम कैंसर में से एक है। पुनरावृत्ति की उच्च दर मूत्राशय के कैंसर के इलाज के लिए बेशकीमती कैंसर में से एक बनाता है जो आजीवन अनुवर्ती की आवश्यकता होती है। उच्च ग्रेड NMIBC के लिए स्वर्ण मानक उपचार बीसीजी के साथ intravesical immunotherapy के द्वारा पीछा किया, ट्रांस-मूत्रमार्ग लकीर है। बीसीजी के विरोधी ट्यूमर गतिविधि की सटीक व्यवस्था पूरी तरह से स्पष्ट किया जाना बना रहता है, यह टी सहायक (ध) 1 और साइटोटोक्सिक टी (टीसी) 1 कोशिकाओं में समृद्ध एक सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के क्रियान्वयन के लिए महत्वपूर्ण है कि स्वीकार कर लिया है चिकित्सा 2 की सफलता।

बीसीजी NMIBC के लिए पसंद का इलाज रहता है कि इस तथ्य के बावजूद, चिकित्सा का जवाब नहीं है रोगियों के एक उच्च अनुपात; इसके अलावा, यह दुष्प्रभाव की एक संख्या के कारण हो सकता है: इलाज किया ट्यूमर के बारे में 70% की मांसपेशी इनवेसिव प्रपत्र को ~ 15% प्रगति कुछ समय के बाद फिर से याद पड़ना औररोग। बीसीजी के उपचार के साथ जुड़े अन्य दुष्प्रभाव dysuria, cystitis और गुर्दे के संक्रमण 3-6 शामिल हैं।

उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों के विकास के प्रारंभिक इन विट्रो मूल्यांकन के बाद, को ध्यान में क्लिनिक पूर्व मॉडल के उपयोग को ले लेना चाहिए; इस जिसका माइक्रोएन्वायरमेंट काफी इलाज के लिए उनके विकास और जवाबदेही को प्रभावित कर सकते हैं ट्यूमर में विशेष रूप से प्रासंगिक है।

पिछले दशक के दौरान, हम हिमाचल प्रदेश झपकी, जीवाणु हेलिकोबेक्टर द्वारा उत्पादित एक प्रोटीन की प्रतिरक्षा modulating गतिविधि के कई पहलुओं को संबोधित किया है, शुरू में polymorphonuclear कोशिकाओं (PMNs) 7 के endothelial आसंजन को बढ़ावा देने में सक्षम के रूप में पहचान की। संरचनात्मक रूप से, हिमाचल प्रदेश झपकी भूखे शर्तों (डीपीएस) परिवार के 8 के तहत डीएनए की रक्षा प्रोटीन के अंतर्गत आता है और एक dodecameric खोल में व्यवस्थित 12 समान सब यूनिटों के होते हैं।

हम हिमाचल प्रदेश झपकी है कि प्रदर्शन किया हैटी के भेदभाव ड्राइविंग के लिए जिम्मेदार एक मजबूत इम्युनो modulating गतिविधि के साथ एक टोल की तरह रिसेप्टर (TLR) 2 एगोनिस्ट, इन विट्रो में और vivo 9-10, दोनों में Th1 फेनोटाइप की ओर लिम्फोसाइटों। इस गतिविधि के आधार में, हिमाचल प्रदेश झपकी एलर्जी अस्थमा 11 के एक murine मॉडल में अधिक फायदेमंद Th1 प्रतिक्रिया में Th2 प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया रीडायरेक्ट करने के लिए सक्षम है।

हिमाचल प्रदेश झपकी के Th1 पर निर्भर विरोधी ट्यूमर क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए, हम बीसीजी प्रशासन के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए O'Donnel और उनके सहयोगियों ने 12 से कई साल पहले विकसित मूत्राशय के कैंसर का एक माउस मॉडल का फायदा उठाया।

इस प्रोटोकॉल के साथ, हम हिमाचल प्रदेश झपकी मूत्राशय कैंसर के खिलाफ एक मजबूत विरोधी ट्यूमर है कि क्षमता और हिमाचल प्रदेश झपकी प्रशासन की प्रभावकारिता (इंटरफेरॉन उत्पादन दोनों Th1 और TC1 लिम्फोसाइटों के ट्यूमर और क्षेत्रीय लिम्फ नोड्स के भीतर, महत्वपूर्ण संचय समानताएं दिखाना है कि IFN) 13 -γ

वर्तमान रिपोर्ट जानवरों की तैयारी, उनके मूत्रमार्ग कैथीटेराइजेशन, मूत्राशय म्यूकोसा करने के लिए कोशिकाओं की कुर्की के लिए आवश्यक रासायनिक जल रहा है, और ट्यूमर कोशिकाओं के इंजेक्शन का ब्यौरा, एक stepbystep प्रोटोकॉल प्रदान करता है। हम यह भी मूत्राशय के कैंसर के इलाज के लिए विकसित की किसी भी चिकित्सकीय एजेंटों की एक प्रोटोटाइप के रूप में माना जा सकता है कि हिमाचल प्रदेश झपकी के सामयिक प्रशासन का वर्णन है। नियंत्रण और हिमाचल प्रदेश झपकी इलाज जानवरों से अलग ट्यूमर की तुलना द्वारा प्राप्त साक्ष्य न केवल हिमाचल प्रदेश झपकी मूत्राशय कैंसर प्रतिरक्षा चिकित्सा के लिए एक अच्छे उम्मीदवार हैं, लेकिन यह भी स्थापित की प्रयोगात्मक के सामान्य प्रभावशीलता हो सकता है कि इस तथ्य पर जोर दिया।

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Protocol

जानवर से निपटने के लिए सभी प्रक्रियाओं स्वास्थ्य के इतालवी मंत्रालय (डीएम 204/2011-बी) द्वारा अनुमोदित किया गया है।

1. पशु

  1. Microisolation फिल्टर के साथ व्यक्तिगत रूप से हवादार पिंजरों में उम्र के 8 सप्ताह के लिए C57BL6 / जम्मू मादा चूहों के लिए आगे बढ़ें।
    नोट: उनके बाहरी uro-जननांग तंत्र की शारीरिक रचना पुरुषों की तुलना में कैथीटेराइजेशन आसान renders क्योंकि महिलाओं पसंद कर रहे हैं।

2. सेल संस्कृति

  1. Humidified 5% सीओ 2 में 37 डिग्री सेल्सियस पर 10% गर्मी निष्क्रिय भ्रूण गोजातीय सीरम और 50 माइक्रोग्राम / एमएल gentamicin साथ पूरक RPMI 1,640 माध्यम में माउस urothelial कार्सिनोमा सेल लाइन MB49 बनाए रखें।
  2. 80% संगम T-75 बोतल में MB49 कोशिकाओं को विकसित। Trypsinize और 0.5 × 10 5 में resuspend - चूहों में आरोपण से पहले पीबीएस के 150 μl प्रति 0.5 × 10 6 कोशिकाओं।

3. Intravesical ट्यूमर प्रत्यारोपण

  1. (क्रमश: 33 मिलीग्राम / किग्रा और 20 मिलीग्राम / किग्रा) एनेस्थेटिक्स zoletil और xylor का मिश्रण का उपयोग चूहों चतनाशून्य, intraperitoneally के इंजेक्शन।
  2. एक लापरवाह स्थिति में पशुओं प्लेस और स्कॉच टेप के साथ पैड करने के लिए पिछले पैरों को ठीक। पंजे पर्याप्त रूप में अच्छी तरह से दिखाई और कैथेटर की प्रविष्टि के लिए आसानी से सुलभ मूत्रमार्ग कुहर रेंडर करने के लिए अलग हो सकता है।
  3. नोट: कैथीटेराइजेशन के लिए, एक 24 जी बाल चिकित्सा शिरापरक कैथेटर 8 से 10 सप्ताह की उम्र में चूहों के लिए उपयुक्त है। कैथेटर की पसंद मूत्रमार्ग दीवार और कैथेटर के बीच तरल के रिसाव से बचने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। बड़ा बोर कैथेटर बड़ा या बड़े चूहों के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए।
  4. एक छोटा सा चिमटा का प्रयोग, मूत्रमार्ग के बाहरी हिस्से के एक किनारे चुटकी और चूहों के "सिर अंत" की ओर बहुत धीरे यह मोड़। यह क्रिया मूत्रमार्ग कुहर को उजागर करता है।
  5. 45 डिग्री के कोण पर मूत्रमार्ग में बाद कैथेटर की आंतरिक सुई निकालें और डालें, थोड़ा उन्मुखचूहों के "पूंछ अंत" की ओर। कैथेटर के प्रवेश द्वार के लिए मजबूर मत करो; यह मूत्रमार्ग के अंदर निकल जाता है जब तक प्रतिरोध के मामले में, बस, बहुत धीरे कैथेटर मोड़। कैथेटर के बारे में 0.5-0.8 सेमी मूत्रमार्ग में है, ध्यान से चूहों की पूंछ को कैथेटर समानांतर जगह है और यह पूरी तरह से डालें।
  6. कैथेटर में डाला जाना है सुई, जिनमें से 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर, बाँझ पीबीएस के 200-300 μl इंजेक्शन द्वारा अवशिष्ट मूत्र से मूत्राशय धोने और मूत्राशय से सभी तरल aspirate।
  7. नोट: पीबीएस इंजेक्शन लगाने करते हैं, मूत्राशय भर जाएगा और एक सूजन चूहों के पिछले पैरों के बीच दिखाई जाएगी; इस कैथीटेराइजेशन सही है कि पुष्टि करता है। अधिकांश कैथेटर इंजेक्शन की मात्रा की गणना करते समय विचार किया जाना चाहिए कि एक मृत मात्रा है।
  8. एक बाँझ 1 मिलीलीटर सिरिंज का प्रयोग, 0.1 एन एचसीएल के 200 μl इंजेक्षन। इसकी पूरी दीवार को जलाने के क्रम में मूत्राशय भरें। 10 सेकंड के बाद, सभी एसिड को हटाने और तुरंत neutraliएक बाँझ सिरिंज के साथ 0.1 एन NaOH के 200 μl इंजेक्शन द्वारा ज़ी। कोशिकाओं की संख्या सबसे ज्यादा (0.5 × 10 6) के इंजेक्शन के मामले में, अम्लीकरण चरण आवश्यक नहीं है।
  9. महाप्राण सभी अवशिष्ट तरल और तुरंत बाँझ पीबीएस के 300 μl के साथ गुहा फ्लश।
  10. मूत्राशय में - (0.5 × 10 6 रेंज 0.5 × 10 5) आकांक्षा से मूत्राशय खाली है, और MB49 कोशिकाओं से युक्त पीबीएस के 150 μl इंजेक्षन। कोशिकाओं के रिसाव से बचने के लिए कैथेटर के लिए इकट्ठे सिरिंज छोड़ दें। यह स्कॉच टेप के साथ पैड को यह तय करने से सिरिंज सुरक्षित करने के लिए बेहतर है।
  11. 1 घंटे बाद, धीरे मूत्रमार्ग से कैथेटर को निकालने के लिए, और वे जाग जब तक एक गरमागरम दीपक के नीचे, पिंजरे में चूहों प्लेस: यह आमतौर पर उपचार के अंत के बाद के बीच 1 और 2 घंटा होती है।

हिमाचल प्रदेश झपकी 4. Intravesical डिलिवरी

  1. नोट: सेल टपकाना के बाद कम से कम 3 दिनों, यह शुरू करने के लिए संभव हैउपचार।
  2. चरणों 3.1-3.4 में वर्णित के रूप में कैथीटेराइज़। इस स्तर पर, यह एचसीएल के साथ मूत्राशय की दीवार को जलाने के लिए आवश्यक नहीं है।
  3. 1 मिलीलीटर सिरिंज का प्रयोग, बाँझ पीबीएस के 200-300 μl इंजेक्शन द्वारा अवशिष्ट मूत्र से मूत्राशय धोने और मूत्राशय से सभी तरल aspirate।
  4. मूत्राशय में 150 μl पीबीएस प्रति एचपी झपकी के 50 माइक्रोग्राम इंजेक्षन। प्रोटीन समाधान के रिसाव से बचने के लिए कैथेटर से जुड़ी सिरिंज छोड़ दें। स्कॉच टेप के साथ पैड को यह तय करने से सिरिंज सुरक्षित।
  5. वे जाग जब तक, एक गरमागरम दीपक के नीचे, 1 घंटे के बाद, धीरे मूत्रमार्ग से कैथेटर निकालने और पिंजरे में चूहों जगह है।

5. ट्यूमर Explants और histological विश्लेषण

  1. उपचार के अंत में, जानवरों के बलिदान लापरवाह स्थिति में उन्हें जगह और स्कॉच टेप के साथ पैड करने के लिए पिछले पैरों को ठीक।
  2. एक शल्य चिकित्सा स्केलपेल का उपयोग, त्वचा और के माध्यम से के बारे में 1.52 सेमी लंबे समय से एक ऊर्ध्वाधर चीरापेरिटोनियम, सिर्फ चूहों की "सिर अंत" के लिए बाह्य जननांग से ऊपर शुरू। मूत्राशय को नुकसान पहुँचाए के जोखिम को कम करने के लिए, कटौती की गहराई पर विशेष ध्यान दें।
  3. मूत्राशय में कटौती का केंद्र-बाएँ में तैनात किया जाएगा और ट्यूमर एक गहरे गुलाबी / बैंगनी बड़े पैमाने के रूप में दिखाई देगा। इसके छांटना पर, एक ऊतकीय पिंजरे में पूरे मूत्राशय जगह है और आयल में एम्बेड करने से पहले 10% बफर formalin में तय कर लो।
  4. ऊतकीय और प्रतिरक्षा histochemical विश्लेषण के लिए, एक मानक सूक्ष्म का उपयोग कर मूत्राशय (46 माइक्रोन मोटाई) के सीरियल वर्गों तैयार करते हैं।
  5. Haematoxylin / eosin के साथ वर्गों दाग और ट्यूमर का आकार (डी XD 2) और एक कंप्यूटर की मदद से छवि विश्लेषक का उपयोग पार के अनुभागीय क्षेत्र के प्रति नेक्रोसिस का प्रतिशत निर्धारित की गणना के साथ आगे बढ़ें।
  6. पोत की गणना के लिए एक मानक immunoperoxidase तकनीक का उपयोग कर, एन्दोथेलिअल मार्कर CD31 / PECAM के लिए वर्गों धुंधला करके आगे बढ़ें। वर्गों स्कैन एकउच्चतम संवहनी घनत्व के क्षेत्र की पहचान करने के लिए कम बिजली (4 ×) टी। इस क्षेत्र के भीतर, उच्च शक्ति (20 ×) में पांच अलग-अलग यादृच्छिक क्षेत्रों में अलग-अलग microvessels गिनती।

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Representative Results

चित्रा 1 कैथीटेराइजेशन तकनीक से पता चलता है; माउस catheterized और 0.5 × 10 6 MB49 कोशिकाओं के साथ संस्कार है। हिमाचल प्रदेश झपकी के साथ उपचार मूत्राशय की दीवार को देते हैं और पैदा करने के लिए उन्हें सक्षम करने के लिए, 3 दिन ट्यूमर कोशिकाओं के इंजेक्शन के बाद शुरू कर दिया है। नियंत्रण समूह से संबंधित सभी जानवरों ट्यूमर विकसित करना; उनमें से कुछ के कारण मूत्रमार्ग का रोड़ा करने के लिए 13 दिन की अवधि के अंत से पहले मर सकते हैं।

हिमाचल प्रदेश झपकी के साथ पहली बार इंजेक्शन के बाद, जानवरों के चार इंजेक्शन की कुल के लिए, हर तीन दिन इलाज कर रहे हैं। प्रयोग के अंत में, दिन में तेरह, पशुओं के लिए बलिदान कर रहे हैं और ब्लैडर ऊतकीय और प्रतिरक्षा histochemical विश्लेषण के लिए एकत्र की। 2A चित्रा में दिखाया गया है, हिमाचल प्रदेश झपकी इलाज चूहों से मूत्राशय के भीतर ट्यूमर की मात्रा 830 ± 1 बनाम (220 ± 62 मिमी 3 वाहन का इलाज चूहों के ट्यूमर की तुलना में काफी छोटा होता है80 मिमी 3)।

दिलचस्प है, जबकि वाहन का इलाज पशुओं में ट्यूमर ट्यूमर मूत्राशय दीवार (चित्रा 2 बी) के भीतर ही सीमित है 8 हिमाचल प्रदेश झपकी इलाज जानवरों के 7 में, अंतर्निहित वसा ऊतकों पर हमला। अंत में, vascularity कम हो जाता है और नेक्रोसिस की हद तक जानवर (चित्रा 2 बी और सी) को नियंत्रित करने के लिए सम्मान के साथ, हिमाचल प्रदेश झपकी इलाज चूहों में वृद्धि हुई है।

चित्र 1
चित्रा 1. चूहे कैथीटेराइजेशन। मादा चूहों anesthetized और 24 जी बाँझ प्रवेशनी का उपयोग कर catheterized कर रहे हैं। सही पैनल ब्लैक बॉक्स की बढ़ाई है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2 हिमाचल प्रदेश झपकी चित्रा 2. विरोधी ट्यूमर गतिविधि। चूहे, MB49 कोशिकाओं (0.5 × 10 6) के साथ 0 दिन में प्रत्यारोपित, दिन 3, 6, 9 और 50 अश्वशक्ति झपकी या पीबीएस (वाहन) की माइक्रोग्राम के साथ व्यवहार कर रहे हैं 12. सभी जानवरों के दिन 13 (ए) के नियंत्रण चूहों और हिमाचल प्रदेश झपकी इलाज पशुओं, और ट्यूमर मात्रा मात्रा का ठहराव से अलग ब्लैडर पर प्रतिनिधि histological विश्लेषण में मारे गए हैं। जानवरों के दो गुटों में पैनल ए और नेक्रोसिस के प्रतिशत के वर्गों (बी) बढ़ाई। (सी) CD31 / PECAM के लिए दाग resected ब्लैडर,; नियंत्रण और हिमाचल प्रदेश झपकी इलाज जानवरों से प्रतिनिधि वर्गों दिखाए जाते हैं। Microvessel घनत्व (सी, सही पैनल) की मात्रा; HPF, Highpower खेतों। डेटा मतलब ± एसडी का प्रतिनिधित्व करते हैं; समूह के अनुसार एन = 8 चूहों। सांख्यिकीय महत्व छात्र के टी -test (** पी <0.01) द्वारा निर्धारित किया गया था। Codolo ईटी से संशोधित आंकड़ाअल। 13। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

कैंसर के उपचार के क्षेत्र में प्रगति के बहुमत नैदानिक ​​परीक्षण शुरू करने से पहले पशु मॉडल में परीक्षण की आवश्यकता होती है। vivo में ट्यूमर जीव विज्ञान के अध्ययन के पशु मॉडल का लाभ लेने की संभावना है, विभिन्न चिकित्सकीय दृष्टिकोण के आकलन को सक्षम करने कैंसर रोगजनन की जांच के शोधकर्ताओं के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है। Orthotopic के मॉडल स्वर्ण मानक 14-15 बने हुए हैं, क्योंकि दोनों एक ट्यूमर मॉडल की स्थापना की और करने के लिए उपलब्ध सेल लाइनों की विशाल राशि का वे स्वाभाविक रूप से होने वाली ट्यूमर 16 के वातावरण की नकल है।

यहाँ वर्णित के रूप में बाद xenoimplants से गुजरना है कि प्रतिरक्षा कमी चूहों में संभव नहीं हैं क्योंकि इसके अलावा, syngeneic चूहों में कैंसर के Orthotopic मॉडल की स्थापना, प्रतिरक्षा चिकित्सा पर आधारित नई चिकित्सीय रणनीतियों की जांच के उद्देश्य से पढ़ाई के मामले में विशेष रूप से प्रासंगिक है।

इस प्रोटोकॉल में दर्शाया कार्यप्रणाली टी का वर्णनट्यूमर कोशिकाओं की टीका और मूत्राशय गुहा में चिकित्सीय एजेंट के प्रशासन दोनों परमिट कि एक महिला माउस मूत्रमार्ग की वह कैथीटेराइजेशन।

(के बजाय ऐसे trypsin या पाली lysine के उपयोग के रूप में अन्य तरीकों, के, ऊपर विस्तृत रूप में) एक एसिड को जलाने के माध्यम से मूत्राशय दीवार शर्त का लाभ, बड़े और अत्यधिक आक्रामक ट्यूमर के विकास को बढ़ावा देने की है। शायद कारण ट्यूमर कोशिकाओं को 17 साल की व्यवहार्यता पर इन पदार्थों के अवशेषों का एक हानिकारक प्रभाव को trypsin और पाली lysine, छोटे और कम आक्रामक ट्यूमर में परिणाम है, साथ शर्त इसके विपरीत,। उत्तरार्द्ध मूत्राशय दीवार के छिद्र और पेरिटोनियम 18 में ट्यूमर के प्रसार के कारण हो सकता है क्योंकि एसिड जला भी बिजली गुल देना पर आधारित एक और शर्त प्रणाली को प्राथमिकता दी जाती है।

प्रोटोकॉल अल्पकालिक स्टडीज (~ 13 दिन) के लिए अनुकूलित किया गया है। जनसंपर्क दाखिलएक उच्च सेल नंबर की वजह से बड़े ट्यूमर बोझ को और अधिक तेजी से ट्यूमर के विकास और संभवतः जानवरों का नुकसान होगा, क्योंकि कोशिकाओं की कार्रवाई संख्या महत्वपूर्ण है। उपयोगकर्ता तकनीक के साथ विश्वास हो जाता है जब तक इसके अलावा, इस प्रकार पशुओं की मौत के कारण, मूत्रमार्ग या मूत्राशय को नुकसान पहुँचाए में जोखिम की एक निश्चित डिग्री है। जानवरों के लिए पर्याप्त रूप से (प्रक्रिया के दौरान मर नहीं है और इस तरह) संचालित कर रहे हैं अगर हमारे अनुभव में, हालांकि, वे प्रयोगों (13 दिन) की अवधि के लिए दुख के बिना रहते हैं। इसके अलावा, इंजेक्शन कोशिकाओं की संख्या कम करने के द्वारा, यह प्रयोगों की अवधि को लम्बा करने के लिए संभव है।

हम एक उच्च लाभ / साइड इफेक्ट के साथ संपन्न एक नया एक के साथ बीसीजी के आधार पर वर्तमान चिकित्सा में सुधार, और अंततः स्थानापन्न करने के उद्देश्य के साथ, हेलिकोबेक्टर द्वारा उत्पादित प्रोटीन हिमाचल प्रदेश झपकी के विरोधी ट्यूमर गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए इस मॉडल का इस्तेमाल किया अनुपात। आम तौर पर, इस प्रयोगात्मक दृष्टिकोण सभी पूर्व clini में अपनाया जा सकता हैमूत्राशय गुहा में चिकित्सीय एजेंट की डिलीवरी की आवश्यकता है कि कैलोरी के मूल्यांकन।

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Disclosures

लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषणा।

Acknowledgments

इस काम Associazione इटालियाना प्रति ला RICERCA सुल Cancro, विश्वविद्यालय की इतालवी मंत्रालय और रिसर्च, prin परियोजनाओं और PROGETTI डि RICERCA डि Ateneo, अनुदान एन ° CPDA137871, Fondazione Cariplo द्वारा समर्थित किया गया था, एन एमडीबी के लिए 2011-0485 °, और Finanziamento जिओवानी द्वारा अनुदान गैया Codolo को Studiosi, पडुआ विश्वविद्यालय,।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Materials
C57BL/6J female mice Harlan Italy (Udine, Italy)
MB49 Cells Obtained from Prof. O'Donnel, University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa, USA
RPMI Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA) R8758
FBS Sigma-Aldrich F7524
PBS Sigma-Aldrich D1408 10X, to be diluted in apyrogenic water
Flask Becton Dickinson (Franklin Lakes, New Jersey, USA) 353135
Syringe 1ml Becton Dickinson 301358
Trypsin Life Technologies (Waltham, Massachusetts, USA)
Gentamycin Life Technologies 15710-049
Xilor Bio 98 s.r.l. (Milano, Italy) 2% Xylazin
Zoletil Virbac (Carros, France) 359713301992 5% Zolazepam + 5% Tiletamine
24G Catheter Terumo (Rome, Italy) SR+DM2419PX
HCl Carlo Erba Reagents (Milano, Italy) 403871 Liquid
NaOH JT Baker (Center Valley, Pennsylvania, USA) 10095011 Powder
Equipment
Surgical Scalpel Albion Surgical Limited (Sheffield, England)
Microtome Leica Microsystem ( Wetzlar, Germany) RM2235
Microscope Slides VWR International (Radnor, Pennsylvania, USA) 631-0108
Image Analyzer Zeiss (Jena, Germany) Cyres System

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References

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चिकित्सा अंक 99 मूत्राशय कैंसर कैथीटेराइजेशन ट्यूमर प्रत्यारोपण Orthotopic मॉडल हिमाचल प्रदेश झपकी Th1 प्रतिक्रिया
की प्रभावकारिता का मूल्यांकन<em&gt; एच। पाइलोरी</emएक Orthotopic के murine मॉडल में मूत्राशय के कैंसर के इलाज के लिए एक चिकित्सीय उपकरण के रूप&gt; प्रोटीन हिमाचल प्रदेश झपकी
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Codolo, G., Munari, F., Fassan, M.,… More

Codolo, G., Munari, F., Fassan, M., de Bernard, M. Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model. J. Vis. Exp. (99), e52743, doi:10.3791/52743 (2015).

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