Intravitalmikroskopie der Leukozyten-Endothel und Plättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen in Mesenterialvenen in Mice
Summary
This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.
Abstract
Intravitalmikroskopie ist eine Methode, die verwendet werden können, um verschiedene Prozesse in verschiedenen Regionen und Gefäße in lebenden Tieren zu untersuchen. In diesem Protokoll beschreiben wir Intravitalmikroskopie der Gekröse Adern. Dies kann in einem kurzen Zeitraum mit reproduzierbaren Ergebnissen, die Leukozyten-Endothel-Interaktionen in vivo durchgeführt werden. Wir beschreiben eine entzündliche Einstellung nach der LPS-Exposition des Endothels. Aber in diesem Modell kann man viele verschiedene Arten von entzündlichen Erkrankungen wie Bakterien, chemische oder biologische gelten, und untersuchen die Verabreichung von Arzneimitteln und deren direkte Auswirkungen auf die lebenden Tier und seine Auswirkungen auf die Rekrutierung von Leukozyten. Dieses Protokoll wurde erfolgreich in einer Reihe von verschiedenen Behandlungen von Mäusen und ihre Wirkungen auf entzündliche Reaktion in den Gefäßen eingesetzt. Hier beschreiben wir die Visualisierung von Leukozyten und Blutplättchen durch Fluoreszenzmarkierung diese mit Rhodamin 6G. Zusätzlich kann jede spezifische Bildgebung pe seinrformed durch gezielte fluoreszenzmarkierte Moleküle.
Introduction
Der Zweck dieses Protokolls ist es, ein vereinfachtes Verfahren der Intravitalmikroskopie der Gekröse Adern in lebenden Mäusen für die direkte Beobachtung der Leukozyten-Endothel und Leukozyten-Thrombozyten-Wechselwirkungen unter entzündlichen Erkrankungen zu beschreiben.
Intravitalmikroskopie wurde entwickelt, um Leukozyten-Endothel-Interaktionen in vivo unter entzündlichen Erkrankungen 1,2, das ist nicht trivial, aber wichtig für das Verständnis entzündlicher Leukozytenrekrutierung und Funktion zu untersuchen. Die Methode beschreiben wir in diesem Protokoll wurde auf der Grundlage zuvor veröffentlichten Publikationen entwickelt. Ähnlich Visualisierung Thrombozyten Einbau in eine wachsende Thrombus 3 und parallel zu dem, was bereits früher veröffentlicht 4 ist ein exteriorisierten Mesenterium Venendurchlichtmikroskopie untersucht. Es gibt verschiedene andere Modelle von intra-Vitalmikroskopie wie dem Cremastermuskel von Ratten 5 oder Leber der Maus und Ratten 6.
Intravitalmikroskopie Mesenterium Vene wurde entwickelt und in früheren Studien durch verschiedene Gruppen angewandt. Wir haben diese Technik verwendet werden, um Unterschiede in der Rekrutierung von Leukozyten zwischen Wildtyp-Mäusen und Tryptophan hydroxylase1 (Tph1) beobachten – / – Mäusen, die einen Mangel an nicht-neuronalen Serotonin und verglichen die Ergebnisse an Mäusen, deren Blutplättchen-Serotonin wurde pharmakologisch durch langfristige aufgebraucht sind Anwendung der ein selektiver Serotonin-Wiederaufnahmehemmer Fluoxetin 7. Wir haben auch Leukozyten-Endothel-Interaktionen nach akutem Fluoxetin-Behandlung 8 untersucht.
In diesem Protokoll konzentrieren wir uns auf Intravitalmikroskopie Mesenterium Venen, weil dieses Modell kann schnell durchgeführt werden und ermöglicht gültigen Messungen der Leukozyten-Endothel und Blutplättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen. Dies ist viel schwieriger und zeitraub in Intravitalmikroskopie an anderen Organen, wie etwa Knochen, Leber, Haut oder M. cremaster. Der Modushier beschriebene l ist nach herausforderndes mit einem entzündlichen Stimulus, wie beispielsweise eine intraperitoneale Injektion von Lipopolysaccharid ideal zur reproduzierbaren Beurteilung von entzündlichen Zell-Zell-Interaktion.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hier beschreiben wir die Vorbereitung und Durchführung der Intravitalmikroskopie der Gekröse Venen von Mäusen in vivo. Diese Methode gibt uns die Möglichkeit, Leukozyten-Endothel und Thrombozyten-Endothel-Interaktionen 11 direkt im lebenden Organismus zu beobachten.
Als einer der ersten Reaktion auf das Endothel Entzündung aktiviert wird und interagiert mit von Leukozyten und Blutplättchen, was zu rollen, Adhäsion und Trans 12. Aber auch Leukozyten mit T…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
Materials
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
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