التنشيط المناعي للأم (MIA) هو نموذج لعامل الخطر البيئي للتوحد والفصام. الهدف من هذه المقالة هو توفير إجراء خطوة بخطوة لكيفية تحفيز MIA في الفئران الحامل من أجل تعزيز قابلية استنساخ هذا النموذج.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحريض الأم المناعي التنشيط في الفئران في مرحلة منتصف الحمل مع الفيروسية تقليد بولي (I: C)
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يحظى نموذج التنشيط المناعي للأمهات (MIA) بتقدير متزايد كنموذج للقوارض لعامل الخطر البيئي للاضطرابات النفسية المختلفة. أظهرت العديد من الدراسات أن نموذج MIA قادر على إظهار الوجه والبناء والصلاحية التنبؤية ذات الصلة بالتوحد والفصام. لنمذجة MIA ، غالبا ما يستخدم الباحثون البوليينوسينيك الفيروسي: حمض البولي سيتيديليك (بولي (I: C)) لتنشيط جهاز المناعة في القوارض الحامل. بشكل عام ، يظهر النسل من السد المنشط المناعي تشوهات سلوكية وتغيرات فسيولوجية مرتبطة بالتوحد والفصام. ومع ذلك ، فإن حقن بولي (I: C) بجرعات مختلفة وفي نقاط زمنية مختلفة يمكن أن يؤدي إلى نتائج مختلفة من خلال اضطراب نمو الدماغ في مراحل مختلفة. نقدم هنا طريقة مفصلة لتحفيز MIA عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP) بمقدار 20 مجم / كجم بولي (I: C) في منتصف الحمل الجنيني 12.5 يوما (E12.5). لقد ثبت أن هذه الطريقة تحفز استجابة التهابية حادة في محور الأم والمشيمة والجنين ، مما يؤدي في النهاية إلى اضطرابات في الدماغ والأنماط الظاهرية السلوكية المرتبطة بالتوحد والفصام.
المقدمة
مفهوم التنشيط المناعي للأم (MIA) تنبع من الدراسات الوبائية على جمعية إصابة الأم بمرض التوحد وانفصام الشخصية 1. نظرا لعدم وجود مسببات الأمراض الفيروسية تكرار اكتشافها في المشيمة أو دماغ الجنين بعد عدوى فيروسية الأمهات 2،3، على فرضية تأثير الإصابة على ذرية أن يكون سبب تنشيط الجهاز المناعي للأم بدلا من مسببات الأمراض أنفسهم .
لإلقاء الضوء على العلاقة بين السبب والنتيجة بين وزارة الداخلية والاضطرابات النفسية، حقن تصنيعه كيميائيا، الفيروسية تقليد ضعف polyinosinic الحمض النووي الريبي RNA: حمض polycytidylic (بولي (I: C)) في القوارض الحوامل قد اس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأجريت جميع البروتوكولات بموجب موافقة من معهد كاليفورنيا للجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي التكنولوجيا (IACUC).
1. التحضير للأزواج موقوت التزاوج
- استخدام لا يقل عن 6 سدود للتجارب السلوكية و 3 لتحليل التعبير الجيني.
ملاحظة: استخدام ضعف عدد إناث الفئران المقدرة، كما سيتم توصيله فقط حوالي 50٪ من الفئران من توقيت التزاوج. - استخدام إناث الفئران مع عدم وجود الحمل السابقة وفي 8-16 أسابيع من العمر.
ملاحظة: أنثى الف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
حقن 20 ملغ / كغ بولي (I: C) في E12.5 يمكن أن تثير استجابة التهابية حادة في محور الأم والمشيمة والجنين ويعجل له تأثير المزمن لنمو الدماغ والظواهر السلوكية 12،13. مستويات مرتفعة من proinflammatory سايتوكاين، انترلوكين (IL) -6، هو مؤشر موثوق من الاستجابة الالتهابية الحادة بعد MIA. وقت الذروة للتعبير الجين Il6 في المشيمة ودماغ الجنين هو في 3 ساعات بعد بولي (I: C) حقن 12،13. لقد أثبتنا أن بولي (I: C) يدفع أعلى التعبي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
MIA الحث على نوافذ زمنية مختلفة، يشوش الأحداث نمو المخ المختلفة في القوارض، وبالتالي يؤدي إلى تشوهات وneuropathologies سلوكية مختلفة في النسل. هنا، وصفنا بروتوكول للحث وزارة الداخلية في الفئران مع بولي (I: C) الحقن في E12.5. هذا الأسلوب من MIA تحريض يؤدي إلى السلوكية والعصبية، المناعية، وتشوهات في الجهاز الهضمي المرتبطة التوحد والفصام في النسل 8،10،11،16. من المهم أن نلاحظ أن، لأن وزارة الداخلية هو عامل المخاطر البيئية، ومن المتوقع أن يكون الاختلاف أعلى من الفئران من ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
ونود أن تكريم الراحل الدكتور بول ه باترسون لإسهاماته في تقدم نموذج MIA، والتوحد، والبحوث الفصام. ونحن نعترف سركيس ك Mazmanian على دعمه الكبير على هذا البروتوكول. روبن م بايون، وإيفيت غارسيا فلوريس، كارين جيم Lencioni، وليزلي نيومان A. للحصول على المساعدة الإدارية؛ علي Khoshnan ويان جيم كو للمساعدة على تصوير. إلين Y. هسياو وناتاليا Malkova للحصول على المشورة على MIA الاستقراء. جيفري كوكرين، خواكين جوتيريز، كوان واو لي، خايمي رودريجيز، لورينا جيم ساندوفال، وناتالي A. فيردوزكو لتربية الحيوانات الخبراء الخاصة بهم. وأيد هذا العمل من قبل جائزة المعاهد الوطنية للصحة كونتي مركز (NIH 5P50MH086383-04، إلى بول ه باترسون)؛ التوحد يتحدث (# 7670، إلى بول ه باترس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بولينوسينيك– ملح البوتاسيوم بحمض البولي سيتيديليك | SIGMA | P9582 | |
| 0.9٪ كلوريد الصوديوم INJ. USP | HOSPIRA | NDC 0409-4888-10 | |
| MONOJECT insuline syrinage 3/10 مل 29 جم × 1/2 " | COVIDIEN | 8881600145 | |
| 50 مل أنابيب غطاء لولبي مخروطي الولايات | المتحدة الأمريكية SCIENTIFIC | 1500-1211 | |
| Nanodrop 1000 مقياس الطيف | الضوئي THERMO SCIENTIFIC | 1000 | مجهر مجهر مجسمة اختياري |
| Wild Heerbrugg | M5A | اختياري | |
| Dumont # 5 ملقط Inox Tip Size .10 X .06 mm | Roboz | RS-5045 | |
| RNAlater اختياري كاشف تثبيت الحمض النووي الريبي | Qiagen | 76104 | |
| كاشف TRIzol | تقنيات الحياة | 15596-026 | اختياري |
| RQ1 DNase Promega | M610A | الاختياري | |
| iScript cDNA مجموعة | توليف Bio-Rad | 170-8891 | اختياري |
| FastStart العالمي SYBR الأخضر المزيج مع ROX & nbsp ؛ | Roche | 4913922001 | اختياري |
| الوقت الحقيقي PCR | ABI | 7300 | التمهيدي الاختياري |
| : Il6 إلى | الأمام Life Technologies | TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC | التمهيدي الاختياري |
| : Il6 Reverse | Life Technologies | TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC | التمهيدي الاختياري |
| : beta-actin إلى الأمام | Life Technologies | AGAGGGAAATCGTGCGTGAC | اختياري |
| التمهيدي: تقنيات الحياة العكسية بيتا الأكتين | CAATAGTGATGACCTGGCCGT | اختياري | |
| MicroAmp البصري 96 بئر لوحة | التفاعل تقنيات الحياة | 4306737 | |
| لاصق بصري Optionl MicroAmp | لايف تكنولوجيز | 4311971 | Optionl |
| EthoVision Noldus | EthoVision | Optionl | |
| SR-LAB الجهاز (PPI) سان | دييغو إنسترومنتس | SR-LAB | Optionl |
| Marbles | PENN-PLAX | أحجار الأحجار الكريمة الزرقاء رخام | Optionl |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt (DPBS) | Life Technologies | 21600-069 | Optionl |
| Paraformaldehyde | MACRON | 2621-59 | Optionl |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | Optionl |
| Sodium azide | Sigma | S2002 | Optionl |
| Triton x-100 | Sigma | X100 | Optionl |
| محلول بيروكسيد الهيدروجين | Sigma | 18312 | Optionl |
| مصل الماعز | Vector Laboratories | S-1000 | |
| Optionl Rabbit الأجسام المضادة للكالبندين | Abcam | ab11426 | Optionl |
| البيوتينيات الماعز المضادة للأرانب IgGantibody | Vector Laboratories | BA-1000 | Optionl |
| VECTASTAIN ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | Optionl |
المراجع
- Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
- Fatemi, S. H., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
