סינתזה של Thermogelling midi (N-isopropylacrylamide) מרוכבים -graft-כונדרואיטין סולפט עם אלגינט microparticles עבור הנדסת רקמות
Summary
פיגום הנדסת רקמות בזריקות מורכב פולי (N-isopropylacrylamide) סולפט -graft-כונדרואיטין (PNIPAAm-ז-CS) microparticles אלגינט המכילים הוכן. כוחו הדבק, נפיחות נכסים ב biocompatibility במבחנה מנותח במחקר זה. טכניקות האפיון שפותחו כאן עשויות לחול על מערכות thermogelling אחרות.
Abstract
Biomaterials בזריקות מוגדרים כחומרים מושתלים כי יכול להיות מוחדרת לגוף כנוזל וכן לגבש באתרו. חומרים אלה מציעים את היתרונות הקליניים של להיות מושתל מינימאלי פולשני ובקלות להרכיב מוצקים ממלאי חלל פגמים בצורה סדירה. biomaterials בזריקות נחקר נרחב כמו פיגומים להנדסת רקמות. עם זאת, עבור התיקון של אזורים מסוימים נושאת עומס בגוף, כגון הדיסק הבין החולייתי, פיגומים צריכים להחזיק תכונות דבקות. זה יהיה למזער את הסיכון של נקע בזמן התנועה ולהבטיח מגע אינטימי עם הרקמה שמסביב, מתן שידור נאות של כוחות. כאן, אנו מתארים את הכנת ואפיון של פיגום מורכב פולי רגישים תרמית (N-isopropylacrylamide) סולפט -graft-כונדרואיטין (PNIPAAM-ז-CS) ו microparticles אלגינט. קופולימר PNIPAAm-ז-CS יוצר פתרון צמיג במים ב RT, שלתוכו alginatחלקיקי דואר מושעים כדי לשפר את הידבקות. מעל טמפרטורת הפתרון הקריטית הנמוך (LCST), כ -30 מעלות צלזיוס, קופולימר יוצר ג'ל מוצק סביב microparticles. יש לנו את נהליו אפיון biomaterials תקן לקחת בחשבון את המעבר לשלב הפיך של PNIPAAm-ז-CS. תוצאות המחקר מראות כי שילוב של 50 או 75 מ"ג / מ"ל חלקיקים אלגינט לתוך 5% (w / v) פתרונות PNIPAAm-ז-CS לרבע את חוזק מתיחה דבק של PNIPAAm-GCS לבד (p <0.05). השילוב של microparticles אלגינט גם מגביר באופן משמעותי קיבולת נפיחות של PNIPAAm-ז-CS (p <0.05), ובכך מסייע לשמור על ג'ל ממלא חלל בתוך פגמי רקמות. לבסוף, תוצאות של ערכת assay טוקסיקולוגיה חוץ גופית, 2,3-בשדרת (2-methoxy-4-ניטרו-5-sulfophenyl) -2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT) ו- Live / assay הכדאיות המלח עולה כי דבק הוא תומך להישרדות ושגשוגם של כליה עוברית האנושי כמוסה (HEK) 293 גאמות מעל 5 ימים.
Introduction
Biomaterials בזריקות הם אלה שיכולים להיות מועברים בצורה נוחה הגוף כנוזל וכן לגבש באתרו. חומרים אלה יושמו בהרחבה ברפואת רגנרטיבית, שם הם משמשים כדי לספק תאים כמוסים לאתר הנגוע 1-4 ולהתנהג כמו מטריקס זמנים תלת ממדי עבור התאים 5. עבור המטופל, בביו-חומרים להזרקה הם יתרון משום הניתוחים להשתלה הם פולשנית ואת השלב המוצק יכול למלא צורה אסימטרית פגמי רקמות, ביטול צורך שתלים בגודל מותאם אישית.
Injectability יכול להיות מושג באמצעות מגוון של מנגנונים. גורמים חיצוניים, כמו pH, נחקרו כמפעיל ליצירת ג'לים לתמצת תאים ומולקולות ביו 6-8. עם זאת, ה- pH לא יכול להיות על ההדק הקל ביותר לשימוש בכל הסביבות הפיזיולוגיות. עוד alterna המסורתיתמגני אוזניים להשגת injectability משתמשות פילמור כימי באתרו או crosslinking. קבוצת פיתחה מערכת חיזור מסיסים במים מורכב persulfate אמוניום N, N, N -tetramethylethylenediamine ', N' והשתמש בו במשך מגיבים macromers מורכב פוליאתילן גליקול ו פולי (פרופילן) גליקול 9,10. זאן et al. 11 רשתות polyvinylalcohol chitosan בזריקות מפותחות crosslinked עם glutaraldehyde. במערכות כאלה, cytotoxicity של רכיבים תגובתי חייב להיחשב, במיוחד עבור יישומים הכוללים אנקפסולציה התא. כמו כן, פילמור אקסותרמית יכול לייצר טמפרטורות גבוהות מספיק כדי להתפשר הרקמה שמסביב, אשר דווחה על עצם פולימריים מכתיר 12,13.
עדיין מערכות פולימר הניתן להזרקה אחרות פותחו כי התערוכה שינוי מן הנוזל למצב מוצק עם טמפרטורה כמו ההדק. המכונה מערכות thermogelling, אלה הם aqueoלנו פתרונות פולימר שאינו דורשים גירוי כימי, מונומרים, או crosslinkers להשיג היווצרות באתרו 14. במקום זאת, המעבר לשלב בדרך כלל מתרחש ליד טמפרטורה פיזיולוגית גורם להיווצרות של רשת תלת ממדים crosslinked פיזית. Poloxamers כגון Pluronic F127 הם בין פולימרים למד נרחב ביותר עבור thermogelling אנקפסולציה 15-17 ותא משלוח סמים 18,19. עם זאת, מקובל גם כי ג'לי אלה היעדר יציבות בתנאים פיסיולוגיים. מחקרים הוכיחו יציבות מוגברת באמצעות מרחיבי שרשרת 20 או crosslinkers כימי 21,22. עם זאת, השימוש ריאגנטים אלה עלולים להגביל את הפוטנציאל של החומרים אנקפסולציה תא.
Midi (N-isopropylacrylamide) הוא פולימר סינתטי thermogelling כי זכה לתשומת לב משמעותית משלוח הנדסת רקמות סמים 14. תמיסות מימיות של פולי (N-isopropylacrylamide) (PNIPAAm) להפגין טמפרטורת פתרון קריטית נמוך (LCST), בדרך כלל מתרחש כ -32 – 34 ° C 23,24. מתחת LCST, מים נוזלים שרשראות PNIPAAm. מעל טמפרטורת המעבר, הפולימר הופך הידרופובי, וכתוצאה מכך הפרדת פאזות דרמטית 25-27 היווצרות של ג'ל מוצק ללא שימוש מונומרים או crosslinkers רעילים. עם זאת, homopolymers PNIPAAm להפגין תכונות עניות אלסטי והחזק מעט מים בטמפרטורה פיזיולוגית בשל הידרופוביות 28. בעבודה זו, אנו בוחרים לשלב כונדרואיטין סולפט קוולנטית לרשת PNIPAAm, אשר מציעה את הפוטנציאל של פריקות האנזימטית 29, פעילות אנטי דלקתית 30,31, ו מים מוגברים מזין קליטה 32. קופולימרים PNIPAAm עם CS הוכנו במעבדה שלנו על ידי polymerizing מונומר NIPAAm בנוכחות CS-פונקציונלי methacrylate לגבש קופולימר מורכב (PNIPAAm-ז-CS). Because של צפיפות crosslinking הנמוכה של קופולימר, PNIPAAm-ז-CS יוצר פתרון צמיג במים ב RT ו ג'ל אלסטי בטמפרטורה פיזיולוגית בשל LCST 29. הפתרונות פולימר להיות flowable שוב בקירור מתחת LCST בשל הפיכות של המעבר.
אנחנו הוכחנו כי PNIPAAm-ז-CS יש הפוטנציאל לתפקד כמו פיגום להנדסת רקמות, בגלל תכונות מכאניות כי ניתן להתאים, פריקות, ו cytocompatibility עם הכליה עוברית אנושית (HEK) 293 תאים 29. עם זאת, באזורים מסוימים הנושאת עומס, כגון הדיסק הבין חולייתי, פיגומים להנדסת רקמות צריך את היכולת ליצור ממשק משמעותי עם רקמת הדיסק שמסביב כדי למנוע את הסיכון של נקע 33. ממשק זה הוא גם הכרחי השידור הנאות של כוח על פני הממשק בין השתל והרקמה 33. בעבודה שלנו, יש לנו הושעהmicroparticles lginate בתמיסות מימיות של PNIPAAm-ז-CS ומצא כי gelation מתאימה את microparticles, המספקים הידבקות עם הרקמה הסובבת 34. במאמר זה, אנו נתאר את שלבי ההכנה של thermogelling, פולימר דבק. טכניקות סטנדרטיות לאפיון חומרים ביולוגיים, הדמית תא, מבחני כדאיות הותאמו לקחת בחשבון את הרגישות לטמפרטורה של פולימר ההפיכות של המעבר לשלב. הפולימר בזריקות המתואר במאמר זה יש פוטנציאל רחב עבור יישומי הנדסה משלוח סמים ורקמות מחוץ לאלה המתוארים במאמר זה. יתר על כן, שיטות האפיון המתוארות כאן עשויות לחול על מערכות thermogelling אחרות.
Protocol
Representative Results
Discussion
ישנם מספר שלבים קריטיים ב סינתזה של מרוכבים הידרוג'ל-microparticle והערכת כוח דבק בו, נפיחות היכולת, התאמה ביולוגית הסלולר. פילמור רדיקלים החופשי של PNIPAAm-ז-CS דורש methacrylation מוצלח של כונדרואיטין סולפט, פירוק מוחלט של רכיבי מונומר, ותנאי תגובה חסר חמצן. יחס של מונומר NIPAAm כדי כו…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מבקשים להודות סיוע בהכרת תודה של ד"ר ג'ניפר Kadlowec בפיתוח פרוטוקול הבדיקה המתיחה הדבקה.
מחקר מדווחים בפרסום זה מומן על ידי המכון הלאומי של דלקת מפרקים השלד והשרירים ועל מחלות עור לבין המכון הלאומי של הדמיה ביו Bioengineering של המכון הלאומי לבריאות בארה"ב תחת AR מספר פרס 1R15 063,920-01. התוכן הוא באחריות בלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצג את הדעות הרשמיות של מכוני הבריאות הלאומיים.
Materials
| N-isopropylacrylamide, 99%, pure, stabilized | Acros Organics | 2210-25-5 | Refrigerate and remove stabilier with hexane |
| Chondroitin sulfate A sodium salt (from bovine trachea) | Sigma-Aldrich | 39455-18-0 | Refrigerate |
| Hexanes | Fisher Scientific | H302-4 | Store in a flammable cabinet |
| 50% (w/w) sodium hydroxide | Fisher Scientific | SS254-1 | Caustic in nature |
| Methacrylic anhydride | Sigma-Aldrich | 276685 | Strong fumes; use in a fume hood |
| Acetone | Fisher Scientific | A18-4 | Chill in a refrigerator prior to use |
| Nitrogen Gas | Praxair | 7727-37-9 | Part Number: NI 4.8, cylinder style T, 99.998% pure nitrogen (Argon may be used as an alternative inert gas) |
| Tetramethylethylenediamine, 99% extra pure | Acros Organics | 110-18-9 | |
| Ammonium persulfate | Sigma Aldrich | A3678 | Hygroscopic and degrades in the presence of water |
| Phosphate buffered saline tablets | Fisher Scientific | BP2944 | Keep dry |
| Alginic acid, sodium salt | Acros Organics | 177775000 | Use heat to aid in dissolving |
| Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientific | C79 | |
| Canola oil | Local store | Obtain from a local store | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | 93773 | |
| 70% (v/v) Isopropoanol | Fisher Scientific | A416-4 | |
| Porcine ears | Haine's Pork Shop | Obtain from a local butcher | |
| Sodium Chloride | Fisher Scientific | S271-3 | |
| Human embryonic kidney 293 cells | ATCC | ATCC CRL-1573 | Store in liquid nitrogen for long-term use |
| DMEM: 1X, high glucose, no pyruvate | Life Technologies | 11965126 | Refrigerate |
| Fetal bovine serum | Life Technologies | 10082-147 | Refrigerate |
| Penn Strep: 10,000 U/ml | Life Technologies | 15140-122 | Refrigerate |
| Trypsin-EDTA: 0.5%, 10X | Life Technologies | 15400-054 | Refrigerate |
| Methanol | VWR | AAA44571-K7 | |
| Live/Dead Cell viability kit | Life Technologies | L3224 | Light sensitive, keep frozen |
| XTT cell viability kit | Sigma Aldrich | TOX2-1KT | Light sensitive, keep frozen |
| Clear DMEM: 1X, high glucose, no phenol | Life Technologies | 21063-029 | Refrigerate |
| Dulbecco's PBS: 1X | Life Technologies | 14190136 | Refrigerate |
| Sodium citrate | EMD | SX0445-1 | |
| Positive displacement pipette | BrandTech Scientific, INC | 2702904 | Dispenses 100 – 500 µL and comes with attachable tips |
| No 3. Stainless Steel scalpel handle | Sigma Aldrich | S2896 | |
| Miltex sterile surgical blades | Fisher Scientific | 12-460-440 | Size 10 |
| Power gem homogenizer | Fisher Scientific | 08-451-660 | Model # 125 |
| Porcelain mortar and pestle | Sigma Aldrich | Z247464 | Holds 50 mL |
| FreeZone 1 L benchtop freeze dry system | Labconco | 7740020 | Freeze samples prior to use |
| Oil sealed rotary vane pump | Edwards | A65301906 | Model # RV5 |
| Incubating orbital shaker | VWR | 12620-946 | Model # 980153 |
| Benchtop refrigerated centrifuge | Forma Scientific, INC | Model # 5682 | |
| Heated ovens | VWR | Model # 1235PC | |
| 2 N force gauge | Shimpo | FGV-0.5XY | Model # FGV-0.5XY |
| E-force test stand | Shimpo | FGS-200PV | Model # FGS-200PV |
| Tissue culture swinging bucket centrifuge | Beckman Coulter | 366830 | Model #6S-6KR |
| Tissue culture microcentrifuge | Eppendorf | Model #5415C | |
| Hemacytometer set | Hausser Scientific | 3720 | Requires replacement cover glass slips |
| Slide warmer | Lab Scientific | XH-2022 | Model # XH-2002 |
| Portable heating lamp | Underwriters Laboratories | Helps to maintain polymer temperature at 37°C | |
| Inverted fluorescent microscope | Zeiss | Model Axiovert 25 CFL | |
| Heated water bath | VWR | Model # 1235PC | |
| Rocking platform | VWR | Series 100 | |
| Multiskan FC microtiter plate reader | Thermo Scientific | Type 357 | |
| Cell culture incubator | VWR | Model # 2350T | |
| Purifier class II biosafety cabinet | Labconco | Delta Series |
References
- Bidarra, S.J., Barrias, C.C., & Granja, P.L. Injectable alginate hydrogels for cell delivery in tissue engineering. Acta Biomater. 10, 1646-1662 (2014).
- Choi, J. et al. Human extracellular matrix (ECM) powders for injectable cell delivery and adipose tissue engineering. J. Control. Release. 139, 2-7 (2009).
- Selvam, S., Pithapuram, M.V., Victor, S.P., & Muthu, J. Injectable in situ. forming xylitol-PEG-based hydrogels for cell encapsulation and delivery. Colloid Surface B. 126, 35-43 (2015).
- Park, K.M., Lee, S.Y., Joung, Y.K., Na, J.S., Lee, M.C., & Park, K.D. Thermosensitive chitosan-pluronic hydrogel as an injectable cell delivery carrier for cartilage regeneration. Acta Biomater. 5., 1956-1965 (2009).
- Ren, K., He, C., Xiao, C., Li, G., & Chen, X. Injectable glycopolypeptide hydrogels as biomimetic scaffolds for cartilage tissue engineering. Biomaterials. 51, 238-249 (2015).
- Chiu, Y.L., et al. pH-triggered injectable hydrogels prepared from aqueous N-palmitoyl chitosan: In vitro. characteristics and in vivo. biocompatibility. Biomaterials. 30, 4877-4888 (2009).
- Shim, W.S., et al. pH- and temperature-sensitive, injectable, biodegradable block copolymer hydrogels as carriers for paclitaxel. Int. J. Pharm. 331, 11-18 (2007).
- Singh, N.K., & Lee, D.S. In situ. gelling pH- and temperature-sensitive biodegradable block copolymer hydrogels for drug delivery. J. Control. Release. 193, 214-227 (2014).
- Wang, B., Zhu, W., Zhang, Y., Yang, Z., & Ding, J. Synthesis of a chemically-crosslinked thermo-sensitive hydrogel film and in situ encapsulation of model protein drugs. React. Funct. Polym. 66, 509-518 (2006).
- Zhu, W., & Ding, J. Synthesis and characterization of a redox-initiated, injectable, biodegradable hydrogel. J. Appl. Polym. Sci. 99, 2375-2383 (2006).
- Zan, J., Chen, H., Jiang, G., Lin, Y., & Ding, F. Preparation and properties of crosslinked chitosan thermosensitive hydrogel for injectable drug delivery systems. J. Appl. Polym. Sci. 101, 1892-1898 (2006).
- Togawa, D., Bauer, T.W., Lieberman, I.H., & Takikawa, S. Histologic evaluation of human vertebral bodies after vertebral augmentation with polymethyl methacrylate. Spine. 28, 1521-1527 (2003).
- Berman, A.T., Reid, J.S., Yanicko, D.R., Sih, G.C., & Zimmerman, M.R. Thermally induced bone necrosis in rabbits: relation to implant failure in humans. Clin. Orthop. Relat. R. 186, 284-292 (1984).
- Kretlow, J.D., Klouda, L., & Mikos, A.G. Injectable matrices and scaffolds for drug delivery in tissue engineering. Adv Drug. Deliver. Rev. 59, 263-273 (2007).
- Ye, F., Yaghmur, A., Jensen, H., Larsen, S.W., Larsen, C., & Ostergaard, J. Real-time UV imaging of drug diffusion and release from Pluronic F127 hydrogels. Eur. J. Pharm. Sci. 43, 236-243 (2011).
- Akash, M.S., & Rehman, K. Recent progress in biomedical applications of pluronic (PF127): Pharmaceutical perspectives. J. Control Release. 209, 120-138 (2015).
- Sellers, D.L., Kim, T.H., Mount, C.W., Pun, S.H., & Horner, P.J. Poly(lactic-co-glycolic) acid microspheres encapsulated in Pluronic F-127 prolong hirudin delivery and improve functional recovery from a demyelination lesion. Biomaterials. 35, 8895-8902 (2014).
- Jung, H., Park, K., & Han, D.K. Preparation of TGF-β1-conjugated biodegradable pluronic F127 hydrogel and its application with adipose-derived stem cells. J. Control. Release. 147, 84-91 (2010).
- Lee, S.Y., & Tae, G. Formulation and in vitro characterization of an in situ gelable, photo-polymerizable pluronic hydrogel suitable for injection. J. Control. Release. 119, 313-319 (2007).
- Chen, Y.Y., Wu, H.C., Sun, J.S., Dong, G.C., & Wang, T.W. Injectable and thermoresponsive self-assembled nanocomposite hydrogel for long-term anticancer drug delivery. Langmuir. 19, 3721-3729 (2013).
- Cellesi, F., Tirelli, N., & Hubbell, J.A. Materials for cell encapsulation via a new tandem approach combining reverse thermal gelation and covalent crosslinking. Macromol. Chem. Physic. 203, 1466-1472 (2002).
- Cellesi, F., Tirelli, N., & Hubbell, J.A. Towards a fully-synthetic substitute of alginate: development of a new process using thermal gelation and chemical cross-linking. Biomaterials. 25, 5115-5124 (2004).
- Hirokawa, Y., & Tanaka, T. Volume phase transition in a nonionic gel. J. Chem. Phys. 81, 6379-6380 (1984).
- Freitas, R., & Cussler, E.L. Temperature sensitive gels as extraction solvents. Chem. Eng. Sci. 42, 97-103 (1987).
- Schild, H., & Tirrel, D.A. Microcalorimetric detection of lower critical solution temperatures in aqueous polymer solutions. J. Chem. Phys. 94, 4352-4356 (1990).
- Yagi, Y., Inomata, H., & Saito, S. Solubility parameter of an N-isopropylacrylamide gel. Macromol. 25, 2997-2998 (1992).
- Illmain, F., Tanaka, T., & Kokufuta, E. Volume transition in a gel driven by hydrogen bonding. Nature. 349, 400-401 (1990).
- Vernengo, J., Fussell, G.W., Smith, N.G., & Lowman, A.M. Evaluation of novel injectable hydrogels for nucleus pulposus replacement. J. Biomed. Mater. Res. B. 84, 64-69 (2008).
- Wiltsey, C., et al. Characterization of injectable hydrogels based on poly(N-isopropylacrylamide)-g-chondroitin sulfate with adhesive properties for nucleus pulposus tissue engineering. J. Mater. Sci-Mater. M. 24, 837-847 (2013).
- Ronca, F., Palmieri, L., Panicucci, P., & Ronca G. Anti-inflammatory activity of chondroitin sulfate. Osteoarthr. Cart. 6, 14-21 (1998).
- Pipitone, V. Chondroprotection with chondroitin sulfate. Drug. Exp. Clin. Res. 17, 3-7 (1991).
- Moss, M., Kruger, G.O., & Reynolds, D.C. The effect of chondroitin sulfate on bone healing. Oral Surg. Oral Med. O. 20, 795-801 (1965).
- Nerurkar, N., Elliott, D.M., & Mauck, R.L. Mechanical design criteria fo intervertebral disc tissue engineering. J. Biomech. 43, 1017-1030 (2010).
- Wiltsey, C., et al. Thermogelling bioadhesive scaffolds for intervertebral disk tissue engineering: Preliminary in vitro comparison of aldehyde-based versus alginate microparticle-mediated adhesion. Acta Biomater. 16, 71-80 (2015).
- Xia, Y., Yin, X., Burke, N., & Stover, H. Thermal response of narrow-disperse poly(N-isopropylacrylamide) prepared by atom transfer radical polymerization. Macromol. 38, 5937-5943 (2005).
- Liu, Q., Zhang, P., Qing, A., Lan, Y., & Lu, M. Poly(N-isopropylacrylamide) hydrogels with improved shrinking kinetics by RAFT polymerization. Polymer. 47, 2330-2336 (2006).
- Lemoine, D., Wauters, F., Bouchend'homme, S., & Preat, V. Preparation and characterization of alginate microspheres containing a model antigen. Int. J. Pharm. 176, 9-19 (1998).
- Dang, T.D., & Joo, S.W. Preparation of tadpole-shaped calcium alginate microparticles with sphericity control. Colloid. Surface. B. 102, 766-771 (2013).
- Moebus, K., Siepmann, J., & Bodmeier, R. Novel preparation techniques for alginate-polaxamer microparticles controlling protein release on mucosal surfaces. Eur. J. Pharm. Sci. 45, 358-366 (2012).
- Lih, E., Lee, J.S., Park, K.M., Park, & K.D. Rapidly curable chitosan-PEG hydrogels as tissue adhesives for hemostasis and wound healing. Acta Biomater. 8, 3261-3269 (2012).
- Urban, J., & Maroudas, A. Swelling of the intervertebral disc in vitro. Connect. Tissue Res. 9, 1-10 (1981).
- Ma, H.L., Hung, S.C., Lin, S.Y., Chen, Y.L., & Lo, W.H., Chondrogenesis of human mesenchymal stem cells encapsulated in alginate beads. J. Biomed. Mater. Res. A. 64, 273-281 (2003).
- Leslie, S.K., et al. Controlled release of rat adipose-derived stem cells from alginate microbeads. Biomaterials. 34, 8172-8184 (2013).
- Peroglio, M., Eglin, D., Benneker, L.M., Alini, M., & Grad, S. Thermoreversible hyaluronan-based hydrogel supports in vitro. and ex vivo. disc-like differentiation of human mesenchymal stem cells. Spine J. 13, 1627-1639 (2013).
- Chen, J.P., & Cheng, T.H. Thermo-responsive chitosan-graft-poly(N-isopropylacrylamide) injectable hydrogel for cultivation of chondrocytes and meniscus cells. Macromol. Biosci. 6, 1026-1039 (2006).
- Schoichet, M.S., Li, R.H., White, M.L., & Winn, S.R. Stability of hydrogels used in cell encapsulation: an in vitro. comparison of alginate and agarose. Biotechnol. Bioeng. 50, 374-381 (1996).
- Dai, J., Wang, H., Liu, G., Xu, Z., Li, F., & Fang, H. Dynamic compression and co-culture with nucleus pulposus cells promotes proliferation and differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells. J. Biomech. 47, 966-972 (2014).
- Feng, G., et al. Effects of hypoxias and scaffold architecture on rabbit mesenchymal stem cell differentiation towards a nucleus pulposus-like phenotype. Biomaterials. 32, 8182-8189 (2011).
- Feng, G., et al. Hypoxia differentially regulates human nucleus pulposus and annulus fibrosus cell extracellular matrix production in 3D scaffolds. Osteoarth. Cartilage. 21, 582-588 (2013).
