Récolte sélective de Marginating-pulmonaires Leucocytes

Résumé

Les leucocytes marginaux-pulmonaires présentent des caractéristiques uniques et des fonctions immunologiques distinctes par rapport aux autres populations de leucocytes. Nous décrivons ici le prélèvement sélectif de cette sous-population de leucocytes pulmonaires, par perfusion forcée des poumons chez le rat et la souris. Les leucocytes pulmonaires marginaux semblent essentiels pour déterminer la susceptibilité aux maladies transmissibles par le sang et les maladies pulmonaires.

Résumé

Les leucocytes marginaux-pulmonaires (MP) sont des leucocytes qui adhèrent à l’endothélium interne des capillaires pulmonaires. Il a été démontré que les leucocytes MP présentent une composition et des caractéristiques uniques par rapport aux leucocytes d’autres compartiments immunitaires. Les preuves suggèrent une cytotoxicité plus élevée des cellules tueuses naturelles et un profil pro- et anti-inflammatoire distinct de la population de leucocytes MP par rapport aux immunocytes circulants ou spléniques. La méthode présentée ici permet la récolte sélective de MP-leucocytes par perfusion forcée des poumons chez la souris ou le rat. Contrairement à d’autres méthodes utilisées pour extraire les leucocytes pulmonaires, telles que le broyage des tissus et la dégradation biologique, cette méthode produit exclusivement des leucocytes à partir des capillaires pulmonaires, non contaminés par des cellules parenchymateuses, interstitielles et broncho-alvéolaires. De plus, la technique de perfusion préserve mieux l’intégrité et le milieu physiologique des MP-leucocytes, sans induire de réponses physiologiques dues au traitement tissulaire. Cette population unique de leucocytes MP est stratégiquement située pour identifier et réagir aux cellules circulantes anormales, car toutes les cellules malignes circulantes et les cellules infectées sont détenues lors de leur passage dans les capillaires pulmonaires, interagissant physiquement avec les cellules endothéliales et les leucocytes résidents. Ainsi, la récolte sélective de leucocytes MP et leur étude dans diverses conditions peuvent faire progresser notre compréhension de leur signification biologique et clinique, en particulier en ce qui concerne le contrôle des cellules aberrantes circulantes et des maladies pulmonaires.

Introduction

Leucocytes adhérant aux capillaires des poumons ( par exemple, marginating-pulmonaire (MP) leucocytes) ¹ ont été montrées pour présenter la composition leucocytaire distincte et une activité unique par rapport aux leucocytes d'autres compartiments immunitaires (par exemple, la circulation, de la rate, la moelle osseuse) ^{2- 4.} Par exemple, exposition MP-leucocytes plus tueuses naturelles (cellules NK) cytotoxicité contre les cellules tumorales différentes, par rapport à circulants et spléniques cellules NK, ainsi que l'ARN messager différencié (ARNm) niveaux et augmentation de la sécrétion de cytokines pro- et anti-infla....

Protocole

Les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvés par le Comité soin et l'utilisation institutionnelle des animaux (IACUC) à l'Université de Tel-Aviv.

1. Protocole Rat

1. Les préparatifs
   1. Disposer 2 papillon 21 G aiguilles. Eventuellement, préparer 2 contondants tranchant papillon 21 G aiguilles en déposant le tranchant de l'aiguille.
   2. Stériliser outils chirurgicaux: 2 paires de ciseaux, une pince émoussée tranchant, hémostatique, pinces à dents tissus stérilisés par autoclave à 121 ° C pendant au moins 30 minutes sur la gravité paramètre (sec).
   3. Préparer du PBS héparinisé (30 unités / ml) par additio....

Résultats

L'exposition MP-compartiment une composition leucocyte sous-ensemble différent par rapport aux leucocytes circulants. En utilisant une analyse de cytométrie en flux, les sous-populations leucocytaires ont été identifiés et quantifiés pour caractériser la composition à la fois en circulation et MP leucocytes. Les granulocytes et les lymphocytes ont été identifiés sur la base avant et latérales éparpillements. Dans les lymphocytes, NKRP-1 des cellules ^lumineuses ont été iden.......

Discussion

La méthode présentée ici permet la récolte sélective et à l'étude de la population unique de MP-leucocytes. Par rapport à la circulation des leucocytes ou splénique, la population de MP se caractérise par une composition distincte de sous - populations leucocytaires, les niveaux plus élevés d'activation, la libération ultérieure de diverses cytokines et des niveaux plus élevés d' ARNm de cytokines pro- et anti-inflammatoires ^2,3. Plus précisément, nous avons montré que les cellules NK-MP sont plus.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Autoclud Pompe
Aiguille papillon	OMG		26G
Aiguille papillon	OMG		21G*3/4"
Syringe	Pic solution		1 ml
Seringue	Pic solution		2,5 ml
Seringue	Pic solution		5 ml
Seringue	Solution Pic 10		ml
Seringue	Solution Pic		25 ml
Pince à bords arrondis Ciseaux
hémostatique
Pince à tissus Héparine
sodique muqueuse porcine (sans perservatifs)	Sigma Aldrich

péristaltique