I leucociti polmonari marginanti mostrano caratteristiche uniche e funzioni immunologiche distinte rispetto ad altre popolazioni di leucociti. Qui descriviamo il prelievo selettivo di questa sottopopolazione di leucociti polmonari, mediante perfusione forzata dei polmoni in ratti e topi. I leucociti polmonari marginanti sembrano fondamentali nel determinare la suscettibilità alle malattie trasmesse per via ematica e polmonare.
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Articolo metodologico
La raccolta selettiva di Marginating-polmonari leucociti
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
I leucociti marginanti-polmonari (MP) sono leucociti che aderiscono all'endotelio interno dei capillari polmonari. È stato dimostrato che i leucociti MP presentano una composizione e caratteristiche uniche rispetto ai leucociti di altri compartimenti immunitari. L'evidenza suggerisce una maggiore citotossicità delle cellule natural killer e un distinto profilo pro- e anti-infiammatorio della popolazione di leucociti MP rispetto agli immunociti circolanti o splenici. Il metodo qui presentato consente il prelievo selettivo di leucociti MP mediante perfusione forzata dei polmoni sia nei topi che nei ratti. A differenza di altri metodi utilizzati per estrarre i leucociti polmonari, come la macinazione dei tessuti e la degradazione biologica, questo metodo produce esclusivamente leucociti dai capillari polmonari, non contaminati da cellule parenchimali, interstiziali e bronco-alveolari. Inoltre, la tecnica di perfusione preserva meglio l'integrità e l'ambiente fisiologico dei leucociti MP, senza indurre risposte fisiologiche dovute al processamento tissutale. Questa popolazione unica di leucociti MP è posizionata strategicamente per identificare e reagire alle cellule circolanti anormali, poiché tutte le cellule maligne circolanti e le cellule infette vengono trattenute mentre passano attraverso i capillari polmonari, interagendo fisicamente con le cellule endoteliali e i leucociti residenti. Pertanto, il prelievo selettivo di leucociti MP e il loro studio in varie condizioni possono far progredire la nostra comprensione del loro significato biologico e clinico, in particolare per quanto riguarda il controllo delle cellule aberranti circolanti e delle malattie polmonari.
Introduzione
I leucociti aderenti ai capillari dei polmoni (ad esempio, marginating-polmonare (MP) leucociti) 1 sono stati mostrati ad esporre distinti composizione dei leucociti e l'attività unico rispetto ai leucociti da altri comparti del sistema immunitario (ad esempio, la circolazione, milza, midollo osseo) 2- 4. Ad esempio, mostra MP-leucociti superiore cellule natural killer (NK) citotossicità contro varie cellule tumorali, rispetto al circolanti e milza cellule NK, così come i livelli differenziati RNA messaggero (mRNA) e aumento della secrezione di citochine pro e anti-infiammatori. La composizione delle cellule è anche differe....
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Protocollo
Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dalla cura e l'uso Comitato Istituzionale Animal (IACUC) a Tel-Aviv.
1. Protocollo Rat
- preparativi
- Disporre 2 farfalla 21 aghi G. Facoltativamente, preparare 2 farfalla 21 aghi smussati G taglio presentando il bordo tagliente dell'ago.
- Sterilizzare strumenti chirurgici: 2 paia di forbici, pinze smussato-taglio, emostatico, forcipe dente-tessuto sterilizzati in autoclave a 121 ° C per almeno 30 minuti su impostazione gravità (a secco).
- Preparare eparinizzato PBS (30 unità / ml) aggiungendo 30 unità di eparina per ml di soluzione di tampone fosfato....
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Risultati
La mostra MP-vano una diversa composizione dei leucociti sottoinsieme rispetto ai leucociti circolanti. Citometria a flusso di analisi, sottopopolazioni di leucociti sono stati identificati e quantificati per caratterizzare la composizione sia del circolante e leucociti MP. Granulociti e linfociti sono stati identificati sulla base disperde in avanti e laterali. All'interno dei linfociti, NKRP-1 le cellule luminose sono stati identificati come cellule NK, CD3 +,.......
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Discussione
Il metodo qui presentata consente la raccolta selettiva e studiando della popolazione unica di MP-leucociti. Rispetto al circolante o leucociti splenici, la popolazione MP è caratterizzata da una diversa composizione delle sottopopolazioni di leucociti, livelli di attivazione superiori, maggior rilascio di varie citochine, e più elevati livelli di mRNA di pro- e citochine antinfiammatorie 2,3. In particolare, abbiamo dimostrato che le cellule MP-NK sono più citotossico cellule NK circolatori contro varie cell.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori e questo lavoro sono stati sostenuti da NIH / NCI concessione # R01CA172138 (a SBE).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Autoclud Pompa | |||
| Ago a farfalla | OMG | 26G | |
| Ago a farfalla | OMG | 21G*3/4" | |
| Siringa | Pic soluzione | 1 ml | |
| Siringa | Pic soluzione | 2,5 ml | |
| Siringa | Pic soluzione | 5 ml | |
| Siringa | Soluzione Pic | 10 ml | |
Riferimenti
- Kuebler, W. M., Goetz, A. E. The marginated pool. Eur Surg Res. 34, 92-100 (2002).
- Benish, M., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics. Immunol Res. 58
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Ristampe e permessi
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