रक्त प्रसंस्करण के लिए एक तेजी से विधि मानव रक्त में प्लाज्मा पेप्टाइड स्तर की पैदावार बढ़ाने के लिए
Summary
त्वरित रक्त प्रसंस्करण विधि मानव में इस्तेमाल किया जा सकता है और उच्च पेप्टाइड स्तरों पैदावार के साथ ही सही आणविक फार्म के आकलन के लिए अनुमति देता है। इसलिए, इस विधि पेप्टाइड अनुसंधान के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण उपकरण होगा।
Abstract
भोजन का सेवन विनियमन के क्षेत्र में अनुसंधान के महत्व को फायदा हो रहा है। इस बार भोजन का सेवन को विनियमित करने पेप्टाइड्स की माप भी शामिल है। एक पेप्टाइड की एकाग्रता का सही निर्धारण के लिए, यह रक्त प्रसंस्करण के दौरान स्थिर होना चाहिए। हालांकि, यह कई पेप्टाइड्स जो जल्दी अंतर्जात peptidases द्वारा अपमानित कर रहे हैं के लिए मामला नहीं है। हाल ही में, हम एक रक्त प्रसंस्करण विधि विकसित आर educed तापमान, ए cidification रोजगार, पी निषेध rotease, मैं exogenous नियंत्रण और चूहों में प्रयोग के लिए डी ilution (त्वरित) sotopic। यहाँ, हम इंसानों में इस्तेमाल के लिए इस तकनीक की स्थापना की और वसूली, आणविक फार्म और भोजन का सेवन नियामक हार्मोन के घूम एकाग्रता की जांच की है। तेजी से विधि काफी के लिए 125 मैं लेबल सोमेटोस्टैटिन-28 (+ 39%), ग्लूकागन-जैसे पेप्टाइड -1 (+ 35%) वसूली, एसाइल ghrelin और ग्लूकागन (+ 32%), इंसुलिन और kisspeptin (+ 29% से सुधार ), nesfatin -1 (+ 28%), लेप्टिन(+ 21%) और पेप्टाइड YY 3-36 (+ 19%) मानक प्रोसेसिंग (बर्फ पर EDTA रक्त, पी <0.001) की तुलना में। उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी, तेजी से प्रसंस्करण के बाद उम्मीद की स्थिति में अंतर्जात एसाइल ghrelin की क्षालन से पता चला है, जबकि मानक प्रसंस्करण के बाद एसाइल ghrelin के 62% के पहले के एक चोटी में जिसके परिणामस्वरूप संभावना desacyl ghrelin का प्रतिनिधित्व कर अपमानित किया गया। 3 मानक प्रोसेसिंग (पी = 0.03) के बाद 1:23 की तुलना में: तेजी से प्रसंस्करण के बाद सामान्य वजन विषयों के रक्त में एसाइल / desacyl ghrelin अनुपात 1 था। इसके अलावा अंतर्जात kisspeptin का स्तर मानक प्रसंस्करण की तुलना में तेजी के बाद उच्च स्तर पर थे (+ 99%, पी = 0.02)। त्वरित रक्त प्रसंस्करण विधि मानव में इस्तेमाल किया जा सकता है, उच्च पेप्टाइड स्तरों पैदावार और सही आणविक फार्म के आकलन के लिए अनुमति देता है।
Introduction
मोटापा 1,2 की दुनिया भर में बढ़ती व्यापकता के प्रकाश में, भोजन का सेवन विनियमन के क्षेत्र में अनुसंधान महत्व प्राप्त कर रहा है। अब तक केवल एक पेप्टाइड ज्ञात है कि सतही तौर पर उत्पादन किया जाता है और केन्द्र पिछले दशकों के भीतर, भोजन का सेवन, अर्थात् ghrelin 3 प्रोत्साहित करने के लिए काम करने के दौरान, पेप्टाइड्स की एक विस्तृत रेंज पहचान की गई है कि भोजन का सेवन कम करने, उदाहरण के लिए। लेप्टिन, पेप्टाइड YY (पी वाई वाई) और भी ग्लूकागन की तरह पेप्टाइड 1 (जीएलपी -1) और इंसुलिन 4, इसलिए, भूख और तृप्ति पेप्टाइड स्तर के नियामक तंत्र की जांच के अध्ययन में अक्सर मूल्यांकन कर रहे हैं और एक ही समय में, यह माना जाता है कि पेप्टाइड का अध्ययन किया स्थिर और प्लाज्मा गठन के दौरान उच्च पैदावार में बरामद किया है। हालांकि, बहुत बार यह मामला तेजी से अंतर्जात टूटने के कारण के रूप में उदाहरण के लिए पहले दिखाया गया है। ghrelin जो एसाइल से ghrelin 5 desacyl को अपमानित किया जाता है। इसलिए, हम हाल ही में रक्त की प्रक्रिया के लिए तेजी से विधि का वर्णन कियाआर educed तापमान, ए cidification रोजगार चूहों में गाते हैं, पी निषेध rotease, मैं exogenous नियंत्रण और डी 6 ilution sotopic। इस विधि को 12 में से 11 पेप्टाइड्स परीक्षण किया और मानक रक्त प्रसंस्करण की तुलना में सही घूम आणविक फार्म के दृढ़ संकल्प (बर्फ पर EDTA रक्त) के लिए अनुमति दी 6 के लिए वसूली में सुधार हुआ। इस विधि ghrelin घूम corticotropin रिहा कारक के रूप में 13 के रूप में अच्छी तरह से पता लगाने के लिए कई बाद में पढ़ाई 7-12 में इस्तेमाल किया गया है। इसलिए, विधि कृन्तकों में पेप्टाइड अनुसंधान के लिए उपयोगी साबित हो गया। हालांकि, बाद से कृंतक अध्ययन नहीं हमेशा एक और प्रजातियों के लिए अनुवाद कर रहे हैं, विधि मानव रक्त में उपयोग के लिए के रूप में अच्छी तरह से स्थापित किया जाना चाहिए।
वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य मानव में रक्त के प्रसंस्करण के लिए तेजी से विधि का परीक्षण करने के लिए मानक रक्त प्रसंस्करण, बर्फ पर EDTA खून है, जो व्यापक रूप से सिफारिश की है 14 और बार-बार यू की तुलना में थानैदानिक साथ ही अनुसंधान की स्थापना में sed। हमने हाल ही में (भोजन का सेवन पर प्रभाव तालिका 1 में दिखाया गया है) के बाद प्रसंस्करण विनियमन खिलाने में एक भूमिका निभाने के लिए सुझाव दिया 125 मैं लेबल स्थापित पेप्टाइड्स के साथ ही नए उम्मीदवारों सहित भोजन का सेवन के नियमन में शामिल पेप्टाइड्स की एक चयन की वसूली का परीक्षण किया दोनों तरीकों के साथ। हार्मोन भी अलग अलग लंबाई और प्रभारी (तालिका 2) के पेप्टाइड्स प्रतिनिधित्व करने के लिए चुने गए हैं। इसके अलावा, ghrelin के लिए हम आणविक फॉर्म (s) मानक और तेजी से विधि निम्न की जांच की। अन्त में, हम अंतर्जात ghrelin (एसाइल और desacyl ghrelin) के साथ ही kisspeptin स्तर, एक पेप्टाइड भी हाल ही में तेजी से या मानक प्रसंस्करण के बाद भोजन का सेवन 15,16 के नियमन में एक भूमिका निभाने के लिए सुझाव का आकलन किया। इसके अलावा, हम भी बॉडी मास इंडेक्स (10.2-67.6 किलो से लेकर / एम 2) possib अध्ययन करने के लिए की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ विषयों की आबादी में इन पेप्टाइड स्तरों की जांच कीलंबे समय बदल शरीर के वजन से संबंधित Le मतभेद।
निदान, मूल्यांकन, और योजना:
अध्ययन प्रतिभागियों
सभी अध्ययन प्रतिभागियों नव अस्पताल में भर्ती थे रोगियों Charité-Universitätsmedizin बर्लिन में मनोदैहिक चिकित्सा के डिवीजन के (शामिल किए जाने के अस्पताल में प्रवेश के दो दिनों के भीतर था) और सूचित सहमति लिखा दिया। लिंग के किसी भी प्रभाव केवल महिला रोगियों को शामिल किया गया से बचने के लिए। 42 विषयों की कुल इस अध्ययन में भाग लिया और तीन समूहों में विभाजित किया गया: सामान्य वजन (बीएमआई 18.5-25 किग्रा / एम 2 n = 12), एनोरेक्सिया नर्वोसा (बीएमआई <17.5 किग्रा / एम 2 n = 15) और मोटापा (बीएमआई> 30 किग्रा / एम 2 n = 15)। Anorexic और मोटापे से ग्रस्त रोगियों थेरोग-10 के अंतर्राष्ट्रीय वर्गीकरण का निदान और वजन (एनोरेक्सिया नर्वोसा) या वजन में कमी (मोटापा), क्रमशः के लिए अस्पताल में भर्ती कराया। सभी सामान्य वजन रोगियों प्रासंगिक दैहिक विकारों के बिना somatoform लक्षणों के कारण विशेष रूप से अस्पताल में भर्ती थे। जठरांत्र somatoform लक्षण या जठरांत्र सर्जरी के इतिहास के साथ मरीजों को बाहर रखा गया। अपवर्जन मानदंड भी एक उम्र <18 साल, वर्तमान गर्भावस्था और इलाज मानसिक रोगों घेर लिया। रक्त संग्रह आदेश में वृद्धि या क्रमश: शरीर के वजन को कम करने के लिए आहार में उपचार प्राप्त करने से पहले अस्पताल में प्रवेश के बाद दिन में 2 या 3 पर प्रदर्शन किया गया था। मानवशास्त्रीय मानकों को एक ही दिन में मूल्यांकन किया गया।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम जानते हैं कि रक्त के प्रसंस्करण के लिए तेजी से विधि 11/12 पेप्टाइड्स के लिए वसूली में सुधार चूहों 6 में मानक रक्त प्रसंस्करण की तुलना में पहले की सूचना दी। वर्तमान अध्ययन में पता चला है कि हम इस पद्ध?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के द्वारा जर्मन रिसर्च फाउंडेशन STE 1765 / 3-1 (एएस) और शिक्षा और अनुसंधान 03IPT614A (सीजी) के लिए जर्मन मंत्रालय का समर्थन किया था। हम संगठन और मानवशास्त्रीय माप के निष्पादन के साथ मदद के लिए उनके उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए रेइनहार्ड Lommel और पेट्रा BUSSE के साथ ही करीन जोहानसन और क्रिस्टीना Hentzschel धन्यवाद
Materials
| diprotin A | Peptides International, Louisville, KY, USA | IDP-4132 | |
| E-64-d | Peptides International, Louisville, KY, USA | IED-4321-v | |
| antipain | Peptides International, Louisville, KY, USA | IAP-4062 | |
| leupeptin | Peptides International, Louisville, KY, USA | ILP-4041 | |
| chymostatin | Peptides International, Louisville, KY, USA | ICY-4063 | |
| Sep-Pak C18 cartridges | Waters Corporation, Milford, MA, USA | WAT051910 | 360 mg, 55-105 µm |
| acyl-ghrelin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9088-HK | Radioactive |
| GLP-1 | Millipore, Billerica, MA, USA | 9035-HK | Radioactive |
| glucagon | Millipore, Billerica, MA, USA | 9030 | Radioactive |
| insulin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9011S | Radioactive |
| leptin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9081-HK | Radioactive |
| kisspeptin-10 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-048-56 | Radioactive |
| nesfatin-1 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-003-26 | Radioactive |
| PYY3-36 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-059-02 | Radioactive |
| somatostatin-28 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-060-16 | Radioactive |
| ZORBAX Rapid Resolution HT SB-C18 column | Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA | 822700-902 | 2.1 x 50 mm, 1.8 µm |
| Agilent 1200 LC | Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA | HPLC, several components, therefore no single catalog number | |
| Kisspeptin RIA | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | # RK-048-56 | Radioactive |
| Total ghrelin RIA | Millipore, Billerica, MA, USA | # GHRT-89HK | Radioactive |
| Active ghrelin RIA | Millipore, Billerica, MA, USA | # GHRA-88HK | Radioactive |
| SigmaStat 3.1 | Systat Software, San Jose, CA, USA | online download |
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