Mesure la pression artérielle à long terme chez la souris Librement mobile à l'aide de télémesure
Summary
The goal of this protocol is to assess systemic blood pressure in conscious freely moving mice using implantable radio-telemetry devices.
Abstract
Au cours du développement de nouveaux agents vasoactifs, la surveillance artérielle de la pression artérielle est cruciale pour évaluer l'efficacité des nouveaux médicaments proposés. En effet, la recherche axée sur la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles en utilisant des souris génétiquement modifiées nécessite une évaluation fiable, à long terme de la variation systémique de la pression artérielle. À l'heure actuelle, la norme d'or pour obtenir des mesures à long terme de la pression artérielle chez les souris ambulatoires utilise des radio-transmetteurs implantables, qui nécessitent cathétérisme de l'artère. Cette technique élimine la nécessité d'attacher, retenir ou anesthésier les animaux qui introduisent le stress et les artefacts lors de l'échantillonnage de données. Toutefois, la surveillance de la pression artérielle sanguine chez des souris par l'intermédiaire de cathétérisation peut être plutôt difficile en raison de la petite taille des artères. Nous présentons ici un guide étape par étape pour illustrer les passages clés cruciaux pour une implantation sous-cutanée réussie de radio-émetteurs et l'artère carotide cannellation chez la souris. Nous incluons également des exemples d'activité de la pression artérielle à long terme prélevées sur des souris se déplaçant librement après une période de récupération post-opératoire. Suite à cette procédure permettra des enregistrements de pression artérielle directe fiables provenant de plusieurs animaux en même temps.
Introduction
L' hypertension est l' un des principaux facteurs de risque de maladies cardio – vasculaires, sans doute , il est un problème majeur de santé publique dans les pays développés et en développement 1. Plusieurs modèles animaux d'hypertension expérimentales ont été développées pour mimer les réponses hypertensives , comme ceux observés chez les humains 2. Entre autres, la souris ambulatoire représente un excellent modèle pour étudier la genèse et la progression de l' hypertension permettant l'analyse in vivo des conséquences de l' exposition chronique à l' hypertension.
La pression artérielle (BP) suivi chez la souris a permis aux chercheurs de démêler plusieurs mécanismes impliqués dans la physiologie et la physiopathologie des maladies telles que l' hypertension et l' insuffisance cardiaque 3, 4. En effet, la manipulation du génome de la souris a permis la génération de modèles transgéniques ou des gènes ciblés adapté à l' étude de l' hypertension 5, 6. Cependant, même manipulation doucede souris consciente induit excitations qui peuvent potentiellement introduire des artefacts lors de l' acquisition de données, tandis que l' utilisation de la sédation ou de tranquillisants affectent profondément la pression artérielle 7. Ces aspects sont particulièrement importants et doivent être pris en considération lors d'une tentative à long terme BP surveillance.
Il y a plusieurs façons d'enregistrer BP chez la souris, et une comparaison entre les techniques les plus courantes actuellement disponibles a été discuté ailleurs 8, 9. Toutefois, les recommandations de l' AHA pour la mesure BP a conclu que la mesure intra-artérielle de BP sont généralement préférés en raison de leur capacité à mesurer directement BP sur une longue période de temps 10. Radio-télémétrie couplée à la mesure directe de la pression artérielle est la méthode state-of-the-art pour la surveillance des fonctions physiologiques chez éveillé et se déplacer librement les animaux de laboratoire , tout en minimisant le stress et les artefacts de l' environnement associés 9, 11.Radio-télémesure offre la possibilité de collecter automatiquement la pression sanguine, le rythme cardiaque, la température corporelle et l'activité des animaux provenant de plusieurs animaux conscients.
Bien que cette méthodologie est devenu très populaire dans de nombreux laboratoires, radio-télémétrie implantation chez la souris peut être techniquement difficile. Ici, nous montrons un protocole étape par étape, qui illustre l'implantation d'un capteur de pression chez la souris. La technique implique l'insertion sous-cutanée de la sonde dans le corps de la souris, le canal du cathéter vers le col et le transmet à proximité de la crosse de l'aorte via l'artère carotide gauche. les données capturées à distance sont présentés en direct sur l'écran d'ordinateur. Les données sont également stockées pour une analyse "off-line".
Protocol
Representative Results
Discussion
Implantable radiotélémesure a amélioré de manière significative au cours de la dernière décennie; petite taille de la sonde rend l'implant moins traumatisante pour l'animal, la vie de la batterie prolongée aide à réduire les coûts, et les fréquences de télémètre indépendantes éliminer la diaphonie entre les récepteurs. Telemetry est considérée comme la méthode state-of-the-art pour collecter une grande variété de paramètres physiologiques de se déplacer librement des animaux sans les art…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the National Institutes of Health (NIH/NHLBI) [Grant no. HL114869] and the support from UTHSC to SM.
Materials
| Small animal anesthesia system | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | low-Flow small animal anesthesia system | |
| Pad warmer and mouse termometer | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | allows monitoring body temperature, and homeothermic control in small animals. | |
| Binocular Microscope | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | KSCXTS-1121 | binocular body with boom stand pole and top LED. |
| Hemostat Forceps | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | INS750451 | used to clamp blood vessels or tag sutures |
| Small metal Clips, 7mm, Stainless Steel | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | INS750344 | used for skin closure |
| Betadine solution | Purdue Products L.P., Stamford, CT, USA | NDC-67618-150-01 | 10% povidone iodine topical solution |
| Normal saline solution | Abott Laboratories | 04930-04-10 | Needed for preventing tissue from drying. |
| Nair (Hair remover lotion) | Needed for fur removal from the site of incision/surgery. | ||
| Braide silk suture | Teleflex Medical OEM, Coventry, Connecticut, USA | Size 5.0, 6.0, 7.0 | |
| Ethanol | 2716 | 70% ethanol for disinfection | |
| Spring scissors | Fine Science Tool | 15000-10 | for minor dissection |
| Scissors (angled to side) | Fine Science Tool | 14063-011 | No. 3 handle |
| Scalpel blade | 2976-0 | No. 10 | |
| Forceps (curved) | Fine Science Tool | 11150-10 | for holding tissue |
| Forceps (straight) | Fine Science Tool | 11151-10 | for holding tissue |
| Needle holder | Fine Science Tool | 12002-12 | for suturing |
| Fine needle nose Forceps | Fine Science Tool | ||
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health, Melville, New York, USA | a general inhalation anesthetic agent | |
| Sterilizer | Benchmark Scientific, 116 Corporate Blvd, South Plainfield, NJ, USA | B1000 | sterilize surgical tools in 5-10 seconds using infrared heating |
| Gauze Pads | Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, USA | JJ8513 | to use for wound cleaning, prepping, scrubbin or dressing. |
| Telemetry Device | Data Sciences International, St. Paul, MN, USA | DSI-PA-C10 | to record blood pressure in freely moving mice |
| Telemetry receiver system coumpled with a PC | Data Sciences International, St. Paul, MN, USA | ||
| small Tubing | Instech Laboratories, Plymouth Meeting, PA USA | BTPE-90 | |
| Vessel Cannulation Forceps, 13cm, 0.5mm OD | World Precision Instruments | 503374 | special vessel cannulation forceps. |
| Tissue adhesive | 3M Animal Care Products, St. Paul, MN, USA | NAC No.: 11380041 | use to close minor wounds, often eliminating the need for sutures and/or bandages |
| Weighing scale | BB300 | Precision Analytical Laboratory Balance |
References
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