एक कारगर तरीका dedifferentiated वसा कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए
Summary
We have modified the conditions for DFAT cell generation and provide herein information regarding the use of an improved growth medium for the production of these cells.
Abstract
ऊतक इंजीनियरिंग और सेल थेरेपी महान वादा चिकित्सकीय पकड़ो। इस संबंध में, इस तरह के mesenchymal स्टेम सेल (MSCs), के रूप में multipotent कोशिकाओं, क्षतिग्रस्त अंगों को समारोह बहाल करने के लिए उपचारात्मक इस्तेमाल किया जा सकता है, निकट भविष्य में। फिर भी, MSCs और उनके आसपास के प्रवर्धन अक्षमता को अलग करने की अत्यधिक आक्रामक प्रक्रिया सहित कई तकनीकी मुद्दों, वर्तमान में इन चिकित्सकीय तौर तरीकों के संभावित नैदानिक इस्तेमाल में बाधा। इस के साथ साथ, हम dedifferentiated वसा कोशिकाओं (DFAT), एमएससी की तरह कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए एक बेहद कारगर तरीका परिचय। दिलचस्प बात यह है DFAT कोशिकाओं adipogenic, osteogenic, और chondrogenic कोशिकाओं सहित कई प्रकार की कोशिकाओं में भेदभाव किया जा सकता है। हालांकि अन्य समूहों के पहले परिपक्व वसा ऊतकों से DFAT कोशिकाओं को पैदा करने के लिए विभिन्न तरीकों का प्रस्तुत किया है, हमारे विधि हमें और अधिक कुशलता से DFAT कोशिकाओं का उत्पादन करने के लिए अनुमति देता है। इस संबंध में, हम दिखाना है कि DFAT संस्कृति के माध्यम से (डीसीएम), 20% के साथ पूरक FBS,DMEM से DFAT कोशिकाओं, 20% FBS के साथ पूरक पैदा करने में अधिक प्रभावी है। इसके अतिरिक्त, हमारे सेल संस्कृति विधि द्वारा उत्पादित DFAT कोशिकाओं कई प्रकार के ऊतकों में redifferentiated जा सकता है। जैसे, ऊतक dedifferentiation के अध्ययन के लिए एक बहुत ही रोचक और उपयोगी मॉडल प्रस्तुत किया है।
Introduction
सेल थेरेपी और ऊतक इंजीनियरिंग पुनर्योजी चिकित्सा 1-5 के क्षेत्र में गर्म विषय हैं। इन चिकित्सकीय रूपरेखा महान वादा पकड़ जबकि, कई तकनीकी मुद्दों वर्तमान में अपने नैदानिक इस्तेमाल में बाधा। इस संबंध में आईपीएस कोशिकाओं की पीढ़ी के रूप में, सभी ऊतक इंजीनियरिंग के उपचारों बाहरी जीन transductions की स्वतंत्र कोशिकाओं क्रम में मरीज की सुरक्षा बनाए रखने के लिए उत्पादन होगा। तदनुसार, हम पहले समूह सफलतापूर्वक मानव DFAT कोशिकाओं 6 का उत्पादन करने के लिए थे। कई अन्य अनुसंधान समूहों के बाद से स्तनधारी मूल 7-9 की DFAT कोशिकाओं को उत्पन्न करने के लिए हमारे विधि को अपनाया है, आगे हमारे मॉडल की उपयोगिता पर प्रकाश डाला।
कई अध्ययनों के दौरान, हमने पाया है कि सेल संस्कृति पर्यावरण की गुणवत्ता सेल के माध्यम से सामग्री का समायोजन करके संशोधित किया जा सकता है। यह निष्कर्ष DFAT कोशिकाओं के उत्पादन की सफलता की दर में वृद्धि करने के लिए नेतृत्व और सेल की गुणवत्ता में सुधार हुआ है; दोनों में महत्वपूर्ण कारकोंकुशलता से भविष्य चिकित्सीय परीक्षण के लिए कोशिकाओं को पैदा होता है। इस संबंध में, एक बेहतर DFAT संस्कृति के माध्यम से (डीसीएम, एक माध्यम के समान सेल माध्यम है, जो पुनः संयोजक मानव इंसुलिन, सीरम albumin, एल glutamic एसिड, कई फैटी एसिड होता है, और कोलेस्ट्रॉल स्टेम mesenchymal के लिए) और DFAT सेल पीढ़ी के लिए एक विधि में और प्रसार विकसित किया गया था (डीसीएम की सामग्री के बारे में अधिक जानकारी के अनुरोध पर उपलब्ध है)। का उपयोग करते हुए इस विधि उच्च गुणवत्ता DFAT कोशिकाओं adipogenic, osteogenic, और chondrogenic कोशिकाओं सहित कई प्रकार की कोशिकाओं में अंतर करने की क्षमता के साथ उत्पन्न किया गया। कुल मिलाकर, यह मान्य सेल संस्कृति प्रोटोकॉल DFAT कोशिकाओं की गुणवत्ता को बढ़ाता है और सेल थेरेपी और ऊतक इंजीनियरिंग के नैदानिक अनुप्रयोगों को बढ़ाने के लिए काफी उपयोगी हो सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
परिपक्व adipocytes है कि इन विट्रो dedifferentiation में से गुजरना है, एक प्रक्रिया छत संस्कृति के रूप में जाना जाता है, एक अधिक आदिम phenotype पर वापस लौटने और proliferative योग्यता हासिल कर सकता है। इन कोशिकाओं के रूप में dediffer…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported in part by Program for Creating Start-ups from Advanced Research and Technology (START Program) from the Japan Society for the Promotion of Science (ST261006IP, TM) and by Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (2014-2019) (S1411018, TM) from the Ministry of Education, Sports, Science and Technology.
Materials
| CSTI303-MSC medium | CSTI | 87-671 | This medium is defined as DCM in the text |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | It does not contain Mg2+ and Ca2+ |
| DMEM medium | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma | 172012 | |
| Collagenase type II | Sigma | C-6885 | |
| Scissors | Takasago Medical Industry Co., Ltd | TKZ-F2194-1 | |
| Shaker | TAITEC | Bioshaker V.BR-36 | |
| Falcon Cell Strainer 100um Yellow | CORNING LIFE SCIENCES | DL 352360 | |
| Falcon 12.5cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Blue Vented Screw Cap | CORNING LIFE SCIENCES | 353107 | |
| 18G needle | NIPRO | 02-002 | |
| 20ml Syringe | NIPRO | 08-753 | |
| Z Series Coulter Counter | BECKMAN COULTER | 383550 |
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