फ्लोरोसेंट Orthotopic माउस अग्नाशय के कैंसर के मॉडल
Summary
A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.
Abstract
अग्नाशय के कैंसर के कैंसर के लिए जो अस्तित्व के पिछले कुछ दशकों में काफी हद तक सुधार नहीं हुआ है की बनी हुई है। केवल निदान रोगियों के 7% पांच साल से अधिक समय बच जाएगा। आदेश में समझने और अग्नाशय के ट्यूमर का microenvironment नकल करने में, हम अग्नाशय के कैंसर के एक murine मॉडल ओर्थोटोपिक वास्तविक समय में ट्यूमर प्रगति के गैर इनवेसिव इमेजिंग की अनुमति देता है कि उपयोग किया। हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (Panc-1 GFP) व्यक्त अग्नाशय के कैंसर की कोशिकाओं तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स, उच्च एकाग्रता, (जैसे, Matrigel एचसी) सीरम मुक्त मीडिया के साथ और फिर laparotomy के माध्यम से अग्न्याशय की पूंछ में इंजेक्शन में निलंबित कर दिया गया था। उच्च एकाग्रता तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स में सेल निलंबन एक जेल की तरह पदार्थ एक बार यह कमरे के तापमान तक पहुँच बन जाता है; इसलिए, यह जैल जब यह अग्न्याशय के साथ संपर्क में आता है, इंजेक्शन स्थल पर एक मुहर बनाने और किसी भी सेल रिसाव को रोकने। ट्यूमर के विकास और अन्य अंगों को मेटास्टेसिस लाइव में निगरानी कर रहे हैंप्रतिदीप्ति का उपयोग करके जानवरों। यह उत्तेजना और GFP के उत्सर्जन के लिए उपयुक्त फिल्टर का उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है। ओर्थोटोपिक आरोपण के लिए कदम इस लेख में विस्तृत कर रहे हैं ताकि शोधकर्ताओं आसानी से नग्न चूहों में प्रक्रिया को दोहराने कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल के मुख्य कदम vivo इमेजिंग में सेल निलंबन की तैयारी, शल्य आरोपण, और पूरे शरीर फ्लोरोसेंट हैं। इस ओर्थोटोपिक मॉडल प्राथमिक और metastatic ट्यूमर पर उपन्यास चिकित्सा की प्रभावकारिता की जांच करने के लिए बनाया गया है।
Introduction
अग्नाशय के कैंसर अन्य कैंसर की तुलना में वृद्धि की आवृत्ति के साथ का निदान और संयुक्त राज्य अमेरिका में कैंसर से संबंधित मौतों के 4 वें प्रमुख कारण है। निदान के समय से, रोगियों के 90% से अधिक पांच साल के भीतर 1,2 मर जाते हैं। वर्तमान में, शल्य चिकित्सा ट्यूमर को हटाने अग्नाशय के कैंसर के लिए ही इलाज है, लेकिन रोगियों के 20% से कम है, क्योंकि निदान के समय रोग अग्रिम चरण में है और 3,4 metastasized है पर मुख्य रूप से सर्जरी से गुजरना करने के पात्र हैं। विशिष्ट लक्षणों की कमी अग्नाशय के कैंसर के एक खामोश बीमारी बनाता है; लक्षणों में से कुछ पेट दर्द, पीठ दर्द, भूख न लगना, पीलिया और मतली के नुकसान शामिल हैं; जो आसानी से आम पाचन बीमारियों 4 के रूप में व्याख्या की जा सकती है। इस कारण से, यह निदान और अग्नाशय के कैंसर के उपचार में सहायता करने के लिए नए औषधीय उपकरण विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण है।
पशु मॉडल का उपयोग pancre के जीव विज्ञान को समझने के लिए हमें की अनुमति देता हैatic कैंसर और मनुष्य के लिए इस ज्ञान को लागू करने में एक अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। क्योंकि ट्यूमर मूल 5 के अंग में बढ़ने अग्नाशय के कैंसर के Xenograft ओर्थोटोपिक मॉडल, यथार्थवादी हैं। Heterotopic मॉडल, जहां सेल लाइनों या ट्यूमर के टुकड़े subcutaneously प्रत्यारोपित कर रहे हैं के विपरीत, ओर्थोटोपिक मॉडलिंग उसके आसपास 6 के साथ ट्यूमर microenvironment और mimics ट्यूमर कोशिकाओं की बातचीत के मनोरंजन के लिए अनुमति देता है। जेनोग्राफ्ट मॉडल यहाँ वर्णित मानव अग्नाशय के कैंसर कोशिका लाइन Panc-1 GFP, जो आनुवांशिक रूप से हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर से ट्यूमर निकला है। GFP का पता लगाने के लिए एक गैर इनवेसिव इमेजिंग और ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस 7 की निगरानी के लिए सक्षम बनाता है। ट्यूमर के विकास, तेजी से होता है अनायास, और बारीकी से मानव अग्नाशय के कैंसर के रोगियों 8 के प्राथमिक ट्यूमर की है कि जैसा दिखता है। Orthotopic मॉडल, चिकित्सीय एजेंट के जवाब में दवा की प्रभावकारिता के एक अधिक सटीक भविष्यवाणी प्रदान करते हुएट्यूमर microenvironment नकल उतार।
जैसा कि ऊपर कहा, इस पशु मॉडल ट्यूमर के विकास और वास्तविक समय में मेटास्टेसिस के फ्लोरोसेंट का पता लगाने के लिए अनुमति देता है। फ्लोरोसेंट का पता लगाने के लिए एक और अधिक प्रत्यक्ष / लाइव luminescence की तुलना में इमेजिंग के लिए अनुमति देता है। प्रतिदीप्ति साथ प्रकाश उत्सर्जित एक छोटी तरंग दैर्ध्य की एक और प्रकाश द्वारा एक उत्तेजना का परिणाम है; luminescence में, जबकि प्रकाश उत्सर्जित एक रासायनिक प्रतिक्रिया का परिणाम है और मजबूत उत्सर्जन 9 नहीं हो सकता है। इसके अलावा, विवो फ्लोरोसेंट इमेजिंग में पूरे शरीर को पशु के लिए हानिकारक नहीं है और शोधकर्ताओं चिकित्सीय उपचार के जवाब में समय के साथ ट्यूमर के विकास पर नजर रखने के लिए अनुमति देता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम अग्नाशय के कैंसर की एक orthotopic murine मॉडल है जो GFP व्यक्त वर्णन है, इस प्रकार (चित्रा 1) विवो फ्लोरोसेंट इमेजिंग में पूरे शरीर का उपयोग कर ट्यूमर के विकास के गैर इनवेसिव निगरानी की इजाजत दी। इस तक?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank the Western University of Health Sciences for the Intramural Grant.
Materials
| RPMI media 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 10437-077 | |
| Penicillin Streptomycin | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
| Matrigel HC | Corning | 354248 | |
| SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
| Alcare or Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
| DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered saline) | Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
| TB Syringe 27G1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
| Isoflurane | Blutler Schein | 50562 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | ||
| Surgical Scissors, 5.5"straight mayo | Henry Schein | 22-1600 | |
| PANC-1 GFP cell line | Anticancer, Inc | ||
| Small Animal Imaging System: | |||
| iBOx Scientia, UVP : | UVP, LLC Upland, CA. | Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals | |
References
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